Вирусная диарея-болезнь слизистых крупного рогатого скота

Bovine Viral Diarrhea/Mucosal disease (англ.); Schleimhautkrankheit der Kinder (нем.); Maladia muqueuse des bovines (франц.); Diarrea virica bovina (исп.)

Вирусная диарея - болезнь слизитых оболочек (ВД-БС) - инфекционная контагиозная болезнь КРС, преимущественно молодых животных, характеризующаяся эрозивно-язвенным воспалением слизистых оболочек пищеварительного тракта, ринитом, увеличени­ем лимфоузлов, высокой лихорадкой, общим угнетением, лейкопенией, постоянной или пе­ремежающейся диареей, эрозивным и язвенным стоматитом с обильным слюноотделением, появлением слизисто-гнойных истечений из носовой полости. У коров возможны аборты. Впервые как самостоятельное заболевание ВД-БС была определена в штате Нью-Йорк (США) в 1946 г. при вспышке острой, часто со смертельным исходом болезни КРС, харак­теризовавшейся диареей и эрозийными поражениями ЖКТ. В настоящее время ВД-БС ши­роко распространена на территориях многих стран и вместе с 2-мя другими пестивирусами (ВКЧС и вирус ПВО) инфицирует 173 вида домашних и диких жвачных животных и 11 ви­дов свиней. Имеются публикации об обнаружении AT и АГ пестивируса у человека, но возможность его инфицирования только предполагается.

На основании различий в клинических проявлениях вирусную диарею и болезнь слизи­стых оболочек КРС первоначально рассматривали как разные болезни. Позднее на основа­нии анализа патологических изменений, особенностей эпизоотологии и клинических прояв­лений эти 2 болезни стали обозначать под названием вирусная диарея - болезнь слизистых оболочек КРС. Поскольку установлена идентичность возбудителей этих болезней, то их считают одной инфекцией с различными клиническими проявлениями, преимущест­венно респираторного или диарейного синдрома, в связи с чем болезнь чаше стали называть вирусная диарея КРС. Болезнь зарегистрирована во всех странах мира. В некоторых штатах США обнаружи­вается до 70-90% серопозитивных животных.

ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Более 50 лет назад Olafson P., Mac Collum A.D. и Fox F.H. и Quids Т. одновременно описали болезнь КРС, протекающую с острым энтеритом, ко­торый вызывается вирусом.

Морфология и химический состав. Установлено наличие 8 вирусспецифических бел­ков (VP1-VP8) с мол. м. от 120кД (VP1) до 230кД (VP8). Геном вируса представлен 1-нитёвой РНК, состоящей из 9800±200 нуклеотидов. Идентифицированы структурные и не­структурные полипептиды и кодирующие их участки генома.

Устойчивость. Вирус чувствителен к эфиру, хлороформу, трипсину и дезоксихолату Быстро инактивируется при рН 3. При изменении рН среды от 5,7 до 9,3 инфекционность его снижается, он наиболее устойчив при рН7,4; переносит температуру 4°С, годами сохра­няет активность при температуре ниже -20°С. ВД КРС обладает высокой устойчивостью, хорошо сохраняется в нативном виде без добавления стабилизирующих р-ров при 4°, -20°, -40°С и в лиофилизированном состоянии, восстанавливая заданные характеристики. Однако имеются сообщения, что при -20°С некоторые штаммы вируса быстро гибнут, а последовательное замораживание и оттаивание ведет к инактивации. В культуральной жид­кости при -15°С вирус активен до года; в крови, лимфоузлах, селезенке и другом патологи­ческом материале сохраняется до 6 мес; при 37°С погибает через 5 дн. Прогревание (56°С) в течение 15 мин снижает его активность в 10 раз, однако для полной инактивации при этой температуре требуется 1 ч.

 Антигенная структура. В структуре VP3 вируса выявлено 3 АГ-участка, один из кото­рых оказался высоко консервативным нейтрализующим эпигоном. Только монАТ к консервативному эпитопу ВД узнают все изоляты этого вируса и не реагируют с изолятами вирусов КЧС и пограничной болезни. В 1960 г. Darbyshire  показал АГ-родство между ВКЧС и ВД КРС. Для детального анализа АГ структуры вирусов используют монАТ. При тестировании других пестивирусов с помощью непрямой ИФ и ИФА было показано, что некоторые монАТ выявляли только цитопатогенный вариант ВД, тогда как другие широко реагировали со всеми изоля­тами ВД или с ВКЧС и ПВО.

Антигенная вариабельность и родство. Различные штаммы ВД различаются по виру­лентности, тропизму и цитопатогенному действию, но идентичны в АГ отношении.

Рекомендуемые материалы

По результатам РН и непрямой ИФ с монАТ референтные цитопатогенные и не цитопа­тогенные штаммы ВД-БС разделены на три группы: I - NADL-подобные, II - New York I-подобные, III - Oregon С24У-подобные Полевые изоляты вируса бьши отнесены к I или II группе и не один из них не был отнесен к группе III. Однако по результатам РН большинст­во штаммов ВД обладает общим АГ, который несет основной эпитоп нейтрализации. Все изоляты ВД относятся к одной серологически родственной группе. Обнаружена тесная АГ связь ВД с вирусами КЧС и ПВО вероятно за счет сходства АГ структуры гликозилированного полипептида 55кД.

Среди изолятов ВД КРС обнаружена вариабельность, в результате которой возможно заражение плодов вирусом диареи даже у вакцинированных коров-матерей. Все 13 изолятов ВД КРС в 4-х различных фермах Швеции, выделенных от КРС и овец, оказались сходными. Однако определенные эпитопы, присутствующие в изолятах, полученных от КРС, укорачи­вались при последующей передаче вируса овцам. Все изоляты бьши отнесены к ВД КРС. Обнаруженная у них специфичность для стада, но не для вида, показала, что ВД КРС легко передается между овцами и КРС. С помощью монАТ установлено значительное генетическое разнообразие популяций вируса.

В 1973 г. Horzinek предложил термин пестивирусы, чтобы сгруппировать 2 АГ родственных оболочечных РНК-содержащих вируса - возбудитель КЧС и ВД КРС. В 1982 г. Международный Комитет по таксономии вирусов принял эту номенклатуру и определил ро­довой статус для пестивирусов, включив их в семейство Togaviridae. Однако в настоящее время молекулярно-биологические данные подтверждают, что ВД КРС, в прошлом вклю­ченный в семейство Togaviridae, обоснованно перенесен во вновь образованное семейство Flaviviridae, которое ранее было родом.

Локализация вируса, вирусоносительство. У естественно восприимчивых больных животных вирус или вирусный АГ ВД-БС обнаруживали практически во всех органах: в клетках эпителия, лимфоцитах и макрофагах. Из организма возбудитель выделяется с калом, мочой, слюной, носовыми и глазными секретами, а также с экссудатом местных оча­гов поражения. Вирус способен длительно персистировать в организме больных животных, поэтому, часто в неблагополучном стаде большинство животных становятся вирусоносителями. Под влиянием стресса происходит угнетение механизмов иммунологической защиты, и вирусоноситель может становиться вирусовыделителем. Вирусоносительство может быть продолжительным. В органах переболевших вирус мо­жет сохраняться до 200 дн, в респираторном тракте - до 56 , а в лимфоузлах кишечника - до 39 дн. Из крови переболевших телят его удавалось выделять в течение 4 мес.

Антигенная активность. Вирус обладает выраженной АГ-активностью. В крови пере­болевших животных обнаруживают ПА, ВНА и КСА. Наиболее выраженный гуморальный ответ наблюдали у телят на VP2 и УРЗ ВД

Культивирование. Все известные штаммы вируса по цитопатогенной активности под­разделяются на 2 группы (биотипа): цитопатогенные и не цитопатогенные. По характеру ЦПД штаммы 1-ого биотипа подразделяются на 2 подгруппы, штаммы, вызывающие ЦПД, и штаммы, вызы­вающие депрессию роста клеточного монослоя, начинается через 16-48 ч (в зависимости от типа культуры клеток) и дости­гает максимума на 3-4-е сут после заражения. Оно проявляется мелкозернистой инфильтрацией в клетках фибробластного типа, вокуолизацией в перинуклеарной зоне. Сроки развития ЦПД не соответствуют увеличению титра вируса. К 72-96 ч после инокуляции, когда титры вируса достигают максимума, в первичной культуре тестикул отмечают лишь начало ЦПД. У цитопатогенных штаммов ВД 2-ой подгруппы ЦПД заключается в дегенерации, округлении и отслоении  клеток от стекла при отсутствии вакуолизации. Округлые клетки, уменьшенные в размере, собираются в группы произвольной конфигурации.

Установлена возможность выращивания вакцинного штамма ВД КРС в суспензионной культуре клеток ВНК-21 и определены оптимальные условия его культивирования. На КЭ культивируются далеко не все штаммы вируса Лишь отдельные из них (например шт Вирджиния) после нескольких пассажей через желточный мешок удалось адаптировать к этой системе. Размножение шт в желточном мешке происходи­ло к 48 ч после инокуляции, на 3-6-е сут после заражения около 50% эмбрионов погибали. При гистоисследовании пораженной мембраны находили зернистые или вакуолизированные клетки

Гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства не установлены

                         ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Персистентно инфицированные животные яв­ляются основным источником распространения ВД, которая чаще всего наблюдается в воз­расте от 6 мес до 2-х лет. Иногда персистентно инфицированные коровы достигают репро­дуктивного возраста; их потомство всегда бывает персистентно инфицированным. Ви­рус имеется в кишечнике новорожденных телят, которые могут заразиться внутриутробно и постнатально. Иногда такое заражение клинически не проявляется. Основным источником возбудителя - больные и персистентно инфицированные, а также клинически здоровые жи­вотные, выделяющие вирус во внешнюю среду с калом, мочой, слюной, носовыми и глаз­ными экскретами, со спермой. У персистентно инфицированных животных вирус присутствует во многих тканях, особенно в эпителиальных и ретикуло-эндотелиальных клетках. Наличие персистентно инфицированных животных поддерживает постоянные вспышки вируса в стаде, где процент серопозитивных животных достигает 85-100%. В 1982 г. впервые обнаружили практически здоровых, но персистентно инфициро­ванных быков, а некоторые авторы обратили внимание на репродуктивные качества спермы от таких быков-производителей, которые могут инфицировать здоровых ко­ров. При наличии у быков-производителей баланопостита, последний проявляется периоди­ческим выделением вируса со спермой. У некоторых быков обна­руживали более серьезные нарушения сперматогенеза, вызванные разрушением спермато­зоидов и эпителиальных клеток спермопроводящих путей, что иногда приводит к полному отсутствию жизнеспособных сперматозоидов в пробе спермы. Ме­стные AT в матке могут защищать эмбрионы после осеменения или естественной случки Перинуклеарная зона эффективно предохраняет от эмбриональной инфекции до выхода яй­цеклетки и в течение 8-9 дн после оплодотворения и в это время местный иммунитет уже активно отвечает на вирус, введенный со спермой. Имеется сообщение о том, что большое количество цитопатогенного вируса, введенного в матку, на 7-й день после осеменения вы­зывает дегенерацию эмбрионов. Вирус выделяется со спермой как у персистентно, так и у клинически инфицированных быков, хорошо сохраняется в условиях замораживания и передается при осеменении.

Передача возбудителя от коров к потомству происходит путем проникновения вируса через плацентарный барьер, в результате возникает внутриутробная инфекция плода. Ново­рожденным телятам вирус может передаваться через инфицированное молоко и фекалии. Среди телят возбудитель передается фекально-оральным и воздушно-капельным путями. Передача через эмбрион - один из наиболее важных путей распространения В Д. Если эмбрион инфицируется трансплацентарно, от персистентно инфицированного реципиента, возникает возможность получения персистентно инфицированных телят. Передача также возможна через другие вирусвакцины, контаминированные ВД. Таким образом вирус может сохраняться в пораженных стадах. В Австралии примерно половина случаев ВД-БС у стельных коров была подтверждена выделением вируса, от них получено потомство клини­чески нормальных, но персистентно инфицированных телят .

Дикие животные также инфицируются вирусом диареи и представляют резервуар воз­будителя. Скорость, с которой инфекция распространяется, может зависеть от штамма ВД и условий содержания животных. У коров с субклинической формой ВД-БС обычно замечают небольшое повышение тем­пературы тела и лейкопению с последующим образованием ВНА. Иногда такая инфек­ция может обостриться. Когда инфекция переходит в клиническую форму, то охватывает нетелей в возрасте от 6 мес до 2-х лет. В чувствительных неиммунных стадах заболе­ваемость может быть высокой, но смертность низкой или совсем отсутствовать. Инкубаци­онный период 5-7 да с последующей временной лихорадкой и лейкопенией. Виремия происходит на 4-7-й день после инфицирования, а в некоторых случаях вирус может циркулировать в организме до 15 дн. Клинические признаки включают депрессию, от­каз от корма, носовые и глазные истечения, иногда поражение ротовой полости, характери­зующееся эрозиями и неглубокими язвами. Как вторичный процесс может развиться острое респираторное заболевание с гипертермией, что неправильно диагностируют как пневмо­нию. Перемежающаяся диарея может быть у лактирующих коров и сопровож­даться снижением удоя. ВД принимает участие в этиологическом комплексе агентов, ответ­ственных за возникновение респираторных заболеваний у КРС, обычно старше 1,5-2-мес возраста.

Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях восприим­чив КРС, буйволы, олени, косули. Заболевает КРС в возрасте от 2 мес до 2-х лет независимо от пола. Взрослый КРС относительно устойчив к инфекциям, но иногда болеют коровы, особенно после первого отела. О восприимчивости других животных сведений нет, хотя Френч (1962) в Австралии обнаружил AT к ВД в крови овец (16%) и свиней (20%). У по­следних описана бессимптомная инфекция, вызванная ВД. Изолят вируса от таких свиней вызвал у телят симптомы болезни, тогда как поросята, от которых был изолирован вирус, оставались здоровыми. Вирус ВД-БС выделен от человека и КРС при наличии у них специ­фических AT. При заражении суягных овцематок культуральным вируса у потомства на­блюдали нарушение функции ЦНС, выпадение волосяного покрова, задержку роста, пони­жение жизнеспособности и тремор головы.

Клинические признаки и патологоанатомические изменения. Симптомы болезни, тяжесть переболевания, широта распространения и процент летальности зависят от виру­лентности вируса, чувствительности животных и наличия неблагоприятных факторов. В ес­тественных условиях болеют телята 5-6-мес возраста. Среди взрослых коров до 90% живот­ных могут иметь специфические AT, однако клинически болезнь не проявляется. Особенно типично она протекает в откормочных хозяйствах среди молодняка КРС. В Австралии ВД-БС поражает овец. Различают острое, подострое, хроническое и латентное течения болезни. При остром течении симптомы появляются внезапно и выражаются лихорадкой (39,5-42,4°С) в течение 12-60 ч, умеренной или сильной депрессией, тахикардией, учащением ды­хания и потерей аппетита, появлением множества эрозий и язв на слизистых оболочках ротовой полости и почти всего пищеварительного тракта. С подъемом температуры регистрируют лейкопению. Особенностью острой формы ВД-БС является тромбоцитопения. У коров может развиваться и генитальная форма в результате контаминирования спермой Она может клинически и не проявляется, однако имеются данные о том, что ВД-БС может быть связана с воспалением яичников у яловых телок.

У больных животных наблюдается истощение, обезвоживание и ацидоз У лактирующих коров снижается продуктивность При осмотре ротовой полости у больных животных можно обнаружить эрозии на губах, краях десен, языка, комиссуры рта и задней части твер­дого нёба. Поражения могут сливаться, формируя большие зоны некроза и отторгаться в ро­товую полость. Эрозии могут развиваться на носовом зеркальце, ноздрях и в носовой полос­ти, а также вызывать сходные поражения вульвы и сосков вымени. Гиперсаливация являет­ся результатом поражения ротовой полости, которые встречаются в среднем у 75-80% боль­ных животных Часто наблюдается слизисто-гнойное истечение из носа, иногда слезотече­ние и отек роговицы. Отмечают также хромоту, затрудняющую движение, связанную с эро­зиями и некрозом кожи межкопытной щели, ламинит и воспаление венчика Профузная диарея часто развивается на второй, третий день после появления клинических признаков, но в сверхострых ситуациях смерть может наступить раньше развития этого симптома В фекалиях часто обнаруживают фибринозные отторжения Движения рубца уменьшаются и слабеют, развивается умеренная тимпания.

На ранних стадиях заболевания отмечают сильную лейкопению Развивается лимфопения без сдвига влево и тромбопения, секундарные инфекции обычны. Смерть может про­изойти в острой фазе болезни, но чаще через 3-10 дн после проявления клинических при­знаков На 7-9-й день появляется диарея и продолжается 1-4 нед Испражнения водянистые, темные, содержат пузырьки зловонных газов, часто сгустки слизи и крови В затяжных слу­чаях в области шеи, плеч, колен, промежности и седалищных бугров кожа сморщивается, становится жесткой и покрывается перхотью На препуции, основании мошонки и вымени появляются эрозии и засохшие корочки экссудата. Иногда выпадают волосы, худеют.

У пораженных коров отмечают выраженное снижение молочной продуктивности, абор­ты, гибель 6-8% телят от гнойной или фибринозной пневмонии, а у более старших (от 3 нед до 5 мес) - гибель от диареи с поражением кишечника. Телята, персистентно инфицирован­ные вирусом диареи, после инфекции in uteri предрасположены к инфекции другими микро­организмами, имеющимися в стаде, что приводит к развитию у них пневмонии. Чаще всего абортируют коровы, зараженные в ранний период стельности С увеличением срока стельности острота инфекции у плода снижается Болезнь продолжается от 4 дн до 2 нед и почти всегда заканчивается летально У новорожденных телят наблюдается мозжеч­ковая гипоплазия, проявляющаяся затрудненным вставанием и выраженной атаксией. У те­лят с гипомиелогенезом наблюдается тремор мышц сразу после рождения. Врожденные де­фекты глаз могут привести к слепоте различной степени. При офтальмологическом исследо­вании легко выявляется катаракта Недоразвитие скелетномышечного аппарата может при­вести к задержке роста плода. Это проявляется рождением слабых, мелких телят, кото­рые часто гибнут уже в первые дни жизни Телята, рожденные персистентно инфицирован­ными коровами, имеют низкую жизнеспособность, подвержены ранним болезням и обычно погибают Болезнь может проявляться респираторным и энтеритным синдромами. На поздних стадиях стельности (после начального формирования иммунокомпетентности) инфекция редко вызывает врожденные пороки. Телята могут родиться нормальными и иметь ВНА к вирусу, однако они всегда будут внутриутробно инфицированными носителя­ми вируса диареи (ВД). Новорожденные иммунокомпетентные телята могут заражаться от матерей при рождении. В таком случае часто развивается тяжелая форма энтерита, которая сопровождается высоким процентом летальности. От больных коров-матерей часто рождаются телята с признаками ВД-БС. У них отмечают некрозы в легких, коже, мозге или поражения в ротовой полости, лихорадку, лейкопению, поражения в носовой полости. Па­деж наступает в период от 18 до 96 ч.

Подострое течение характеризуется внезапностью, подъемом температуры тела на 1-2°С, учащенным сердцебиением и дыханием, снижением или полной потерей аппетита. У некоторых больных поражаются слизистые оболочки ротовой полости, появляются истече­ния из носа, кашель и кратковременная (12-24 ч) диарея. Болезнь протекает и атипично, сопровождается гиперемией, цианизом слизистых и атонией преджелудков.

Абортивное течение инфекции, проявляющееся невысокой кратковременной лихорад­кой, незначительным ринитом, иногда диареей, чаще наблюдают у молодняка старшего возраста и коров, в тех стадах, где регистрируют хроническое течение болезни; болезнь длится 3-4 да, больные животные выздоравливают. Хроническое течение ВД-БС чаще на­ступает после острой вспышки болезни. Характерны длительная диарея и кахексия.

 Часто инфекция протекает субклинически (стертая форма), иногда сопровождается абортами, по­носами и появлением слабого потомства. При латентном течении болезнь протекает бес­симптомно и переболевание определяют по наличию специфических AT. Последние часто находят у клинически здорового КРС неблагополучных хозяйств.

Превалирующее течение болезни - острое, одно из наиболее редких течений - персистентная инфекция (1 случай на 100 или 1000 животных). Она развивается у телят, рожден­ных от персистентно инфицированных коров при заражении эмбриона в течение первых 4 мес стельности нецитопатогенным вирусом. Хроническое течение ВД-БС - следствие перси-стентной инфекции. Идентификация персистентно инфицированных животных основана на выделении вируса и обнаружении ВНА. Однако не у всех персистентно инфицированных животных образуются ВНА к не цитопатогенному вирусу. Bolin S.R привел схемы раз­вития различных клинических течений болезни, вызываемых цитопатогенными и нецитопа-тогенными вирусами, и прямых методов диагностики.

Характерные патологоанатомические изменения обнаруживают на слизистых оболочках ЖКТ и верхних дыхательных путей. Эрозии и язвы находят на слизистой оболочке губ, щек, десен, на боковых поверхностях языка, на нёбе, у основания гортани. Аналогичные пораже­ния обнаруживают в рубце и сычуге. В тонком кишечнике отмечаются изменения, харак­терные для катарального, фибринозно-некротического или геморрагического энтерита. У отдельных больных животных на 21-й день после заражения отмечают поражения глаз Врожденная курчавость волосяного покрова телят является симптомом персистентной ин­фекции у коров. Полагают,  вирус может индуцировать у телят диабет.

Клиническое проявление ВД-БС в определенной степени зависит и от биотипа зара­жающего штамма. Так, цитопатогенный шт. TVM-2 вызывает у телят явные клинические признаки, характерные для острого течения болезни. Не цитопатогенный шт. Нью Йорк-1 вообще не индуцирует каких-либо клинических признаков болезни. Однако инфицирование любым из 2-х биотипов телят, иммуносупрессированных дексаметазоном приводит к ле­тальному исходу. Смешанная инфекция, вызываемая обоими биотопами, не вызывает ка­кой-либо серьезной болезни, что, возможно, исключает потенциальную иммуносупресси-рующую активность самого вируса. В США сообщалось о геморрагическом синдроме у КРС с острой инфекцией, вызванной нецитопатогенными штаммами ВД КРС. Отмечалась тяжелая тромбоцитопения. Аналогич­ный синдром идентифицирован в нескольких стадах Южной Бельгии.

Патогенез. Вирус легко преодолевает плацентарный барьер и вызывает у плода разви­тие патологических изменений, приводящих к морфологическим и функциональным нару­шениям (церебральная гипоплазия, микроофтальмия, катаракта). Если заражение плода произошло в течение первой половины беременности, развивается иммунологическая толе­рантность и теленок родится персистентно инфицированным нецитопатогенным штаммом вируса. Если такие животные суперинфицируются цитопатогенным штаммом вируса, раз­вивается тяжелая болезнь с летальным исходом. Если суперинфекция вызвана гетерогенным цитопатогенным штаммом вируса, то развивается хроническая болезнь. У большинства телят, родившихся от больных матерей, еще до первой дачи молозива имеются ВНА, что свидетельствует о внутриутробном инфицировании. В патогенезе болезни характерным моментом является блокирование иммунореактивности организма вследствие поражения иммунокомпетентных клеток, доказательством чему служит значительное снижение титров противовирусных AT и, в частности противогрип­позных, после заражения телят ВД. При ВД-БС КРС подавляются нормальные защитные механизмы, предположительно гуморальные факторы или фагоцитарная функция, что при­водит к неингибируемому циркулированию бактерий в крови. Последствием клинически легкой диареи КРС является иммуносупрессия, повышается восприимчивость животных к другим инфекциям. Персистентная форма ВД-БС наблюдается у телят, родившихся от ко­ров, зараженных не цитопатогенным вирусом. Клинически такие телята представляются здоровыми, хотя у них наблюдается постоянная виремия. Полагают, что ВД путем подавле­ния иммунных реакций способствует диссеминации вируса ИРГ в организме телят. Показа­на возможность передачи инфекции через инфицированную вирусом сперму и способность трансплацентарной передачи. Вирионы и обусловленные вирусом ультраструктурные изме­нения выявляются, главным образом, в Т-лимфоцитах, моноцитах и лишь в единичных слу­чаях в В-клетках. В патогенезе ВД-БС еще многое не ясно. Например, в сыворотке крови реконвалесцентов до 9-18 мес выявляются специфические AT, далее животное становится серонегативным, но не выздоравливает. У таких хронически больных животных удается выделить вирус из крови и лимфоузлов Не ясна причина, обусловливающая серонегативное состояние больного хроника. Трансплантация лимфоцитов от такого животного здоровому сопровождается заболеванием и гибелью от обезвоживания в течение 6 мес.

У плодов после заражения отдельных коров (150-дн стельности) на 17-й день находили воспаление мягких оболочек мозга, некроз клеток наружного зародышевого листка, очаги геморрагии и умеренный отек. На 42-й день поражались весь мозжечок, кожа (ненормальный волосяной покров) и бронхиолы. Нередки случаи мумификации плода. Ус­тановлена следующая зависимость действия вируса на зараженные эмбрионы: при зараже­нии эмбрионов до 125-дн возраста наблюдали латентную персистентную инфекцию (не цитопатогенным штаммом) или с проявлением симптомов болезни (цитопатогенньм штам­мом). Инфицирование приводило к аборту стельных коров или рождению нежизнеспособно­го потомства (со скрытой инфекцией). Гибель телят при остром течении болезни наступала в течение 5-7 сут, при хроническом - от 10 сут до нескольких месяцев; у телят развивались эрозии и язвы на слизистой оболочке носа.

Помимо мононуклеарных клеток, АГ ВД-БС обнаруживают в лимфоидной ткани плодов КРС. Инфекция плодов ведет к патологическим изменениям лимфоидной ткани, гипоплазии тимуса. Гистопатологические изменения обнаружены в мозжечке, коже и слизистых обо­лочках. С 5-мес срока стельности титр специфических AT у плода нарастает. При зараже­нии плода в 7-мес возрасте вирус, как правило, в организме не находят, так как титр AT достаточно высок. С возрастом плода нарастает способность его отвечать плазмоцитарной реакцией в ответ на заражение. Интересно, что IgM у плодов от зараженных стельных коров появляется примерно через 2 нед после инокуляции вируса коровам и через 7 да он сменял­ся IgG. Предполагают, что раннее появление Ig в сыворотках эмбрионов - результат АГ ак­тивации поликлональных В-клеток эмбриона. С эпизоотической точки зрения вертикальная передача ВД играет важную роль в поддержании и сохранении инфекции. При наличии на ферме вирусоносителей другие телята активно продуцируют AT после исчезновения мате­ринских AT, не проявляя симптомов болезни. Предложена и экспериментально доказана гипотеза, согласно которой для появления клинически выраженной болезни требуется персистентная инфекция животных нецитопато­генным и последующая инфекция цитопатогенным В Д. Животные становятся персистентно инфицированными нецитопатогенным вирусом после внугриматочной инфекции плода до развития иммунокомпетентности. Когда в постнатальный период такие телята суперинфицируются цитопатогенным БД, это приводит к появлению клинически выраженной болезни, обычно заканчивающейся летально. Не цитопатогенные штаммы вызыва­ют латентную персистентную инфекцию КРС без образования AT, что предрасполагает к развитию тяжелого клинически выраженного заболевания после заражения цитопатогенным штаммом ВД. Цитопатогенные штаммы вируса попадают в организм извне или появ­ляются в результате мутации эндогенного нецитопатического штамма.

Болезнь слизистых оболочек с тяжелой диареей, выделениями из носа, язвами на слизи­стой оболочке рта иногда заканчивается летально. Смерть обычно наступает через 1-3 нед. Основная причина снижения репродуктивной способности коров при ВД-БС - это нарушение оплодотворения. ВД оказывает иммуносупрессивное действие, связанное с по­давлением защитной функции и разрушением инфицированных лимфоцитов и лейкоцитов (клеток-мишеней), что в полевых условиях резко снижает устойчивость телят и повышает тяжесть неонатальных диарей и респираторных заболеваний.

Распространение повреждений при БС связано со способностью прямого некротического воздействия вируса на эпителиальные клетки ЖКТ. Вирус также воздействует на эндотели-альные клетки сосудов, особенно в кишечнике и лимфоидной ткани. Наиболее часто у вирусоносителей возникает хроническое течение болезни. Патогенез хронической болезни слизистых не определен, но он во многом сходен с таковым при остром течении болезни Как и при остром течении ВД-БС может быть вызвана как нецитопатогенным, так и цитопа­тогенным штаммами вируса. Предполагают, что различия в антигенности суперинфи-цирующего цитопатогенного вируса дают различную клиническую картину у персистентно инфицированных животных. В одном случае это может проявляться острым те­чением, когда суперинфицированный вирус обладает близкой гомологией с персистентно инфицирующим нецитопатогенным штаммом, в другом - латентным течением без клиниче­ских симптомов. Между 2-мя этими крайностями может встречаться течение болезни, опи­сываемое как хроническое. Хроническое течение характеризуется отсутствием аппетита, по­терей массы тела, прогрессирующим истощением и задержкой развития животного. Диарея может быть постоянной и перемежающейся Может наблюдаться хроническая пневмония, часто появляются носовые и глазные истечения. Могут развиваться аллопеции (обычно в области шеи) и гиперкератозы. Хронические эрозии часто обнаруживают в ротовой полости, на коже промежности, препуции, вульве, вокруг рудиментарных пальцев, межпальцевой щели и пяточной части копытца. В этих случаях обычны секундарные бактериальные ин­фекции. Животные с хронической ВД-БС могут прожить до 18 мес и, в конце концов, поги­бают от тяжелого истощения или секундарной инфекции.

Влияние вируса на плод. Плоды КРС очень чувствительны к заражению ВД из-за сво­ей агамма-глобулинемии, иммунологической незрелости и наличия во многих органах не­дифференцированных клеток. Цитопатогенные штаммы вируса ПВО повреждают плаценту и плод. При заражении коров шт. NADL и овец шт. ВД-3 наблюдается ранняя смерть эм­брионов, аборты, мертворождения, недоразвитость плодов, малая масса родившихся телят, наличие у них вирусной персистенции и иммунологической толерантности. На 80-90-й день стельности изменения выявлялись в легких плода и коже, при инфицировании на 140-150-й день возникала дисплазия сетчатки и гипоплазия мозжечка, вызванная непосредственным повреждением вирусом этих органов. При заражении суягных овец шт. ВД-3 ягнята рожда­лись слабыми, с курчавой шерстью У них наблюдался тремор, персистентная виремия, иммунологическая толерантность и гипомиелинизация.

Конгенитальные аномалии. В 1986-97 гг в Японии были зарегистрированы 25% конгенитальных аномалий на ферме молочного скота голштино-фризской породы Часть коров абортировали, у 43% родились телята с нарушением ЦНС. Инфицирование происходило между 90-150 дн беременности. Инфицирование после 150 дн беременности не отражалось на  иммунотолерантности плода к ВД-БС. Такие телята оставались на всю жизнь пер-систентно инфицированными. Иммунотолерантность и персистентная инфекция встречают­ся естественно и могут быть воспроизведены экспериментально. Точная стадия развития плода, когда инфекция может вызвать иммунотолерантность, неизвестна, однако приблизи­тельно она возникает в сроки 100-125-дн стельности. Кроме того, показано, что иммуното­лерантность и персистенция обусловлены только не цитопатогенными штаммами ВД. Инфицирование коров в период 50-100-дн стельности может привести к смерти плода с последующей его мумификацией, абортом или мертворождением. Освобождение от плода может произойти в промежутке от нескольких недель до месяца после заражения, однако в стационарно неблагополучных стадах процент таких случаев низок В стадах, где преобладают коровы, не имеющие AT к ВД КРС, этот процент может достигать 30. Инфицирование плода примерно 100-150-дн стельности может привести к появлению врож­денных дефектов у новорожденных телят. В этот период вирус поражает ство­ловые клетки развивающихся систем.

Связь биотипов вируса с клиническим проявлением заболевания. Воздействие и взаимодействие 2-х биотипов вируса, описанных ранее, в последние 6 лет стало предметом пристального изучения и вызывает не только научный, но и практический интерес к рас­шифровке патогенеза ВД-БС КРС. При остром течении инфекции первично вирус проникает через слизистую носа или рта, затем распространяется по лимфоидной системе организма Некоторые полевые штаммы хорошо адаптируются к росту на слизистой оболочке носовой полости. Эта способность быстрой репродукции в слизистых оболочках рта и носа мо­жет объяснить возникновение слюнотечения, неглубоких эрозий, язв, а также катарального воспаления тонкого кишечника, что характеризует острую инфекцию Дальнейшие ослож­нения острой инфекции встречаются, когда к ВД-БС КРС присоединяются другие патогены Многократно отмечали смешанные инфекции с возбудителем ИРГ, респираторно-синцитальной инфекцией. ВД-БС в ассоциации с ротавирусной и коронавирусной, или сальмонеллезной  инфекциями проявляется в виде тяжелой формы болезни с энтеритным синдромом. Некоторые эпителиальные ткани поддерживают репликацию ВД Его АГ был обнару­жен в кератоцитах языка, кожи и губ и это может быть связано с образованием эрозии в ротовой полости, на носовом зеркальце, что характерно для хронического течения болезни Необходимость антигенной гомологии между персистирующим и суперинфицирующим био­типом вируса стала решающей для развития клиничски выраженной формы ВД-БС и инду-цирования персистенции и иммунотолерантности. Выявлено, что VII биотип имеет тро­пизм к мезентериальным лимфоузлам и что при последующем развитии поражений этот биотип вируса быстро переходит в пейеровы бляшки, вызывая их поражение и диарею. Патогенез хронического течения болезни объяснить трудно. В подавляющем боль­шинстве случаев персистентно инфицированные животные не проявляют хроническую фор­му болезни и этот синдром экспериментально не воспроизводится. В патогенезе БС первоначально не цитопатогенный вирус заражает плод и приводит к развитию персистентной виремии у телят. БС у таких телят может возникнуть при суперин­фекции "гомологичным" цитопатогенным вирусом, образовавшимся в результате мутации По мнению Becker J.C., БС - это спорадическая форма ВД, возникающая обычно у жи­вотных в возрасте от 6 мес до 2-х лет. Заболевает менее 5% животных, но летальность дос­тигает 100%. Хроническая болезнь может развиваться у телят при суперинфекции гете­рогенным цитопатогенным биотипом вируса с персистентной виремией. У персистент-но инфицированных быков ВД постоянно контаминирует сперму, которая служит источни­ком заражения чувствительных к вирусу телок, но инфекция не всегда передается потомству вертикально.

В патогенезе ВД-БС первыми поражаются нейтрофилы, затем инфицируются макрофа­ги, отмечается 2-кратное уменьшение числа Т-супрессоров с сохранением числа Т-хелперов без изменений. Увеличивается содержание общего белка и IgG, а снижение числа В-лимфоцитов и моноцитов бывает переходящим и нормализуется к 30-му дню. Поскольку вирус реплицируется во всех главных субпопуляциях лимфоцитов и в других клетках, ре­зультатом могут быть лейкопения, что является продолжением инфекции; повреждаются В-клетки и Т-клеточные субпопуляции. В- и Т- клетки повреждаются вследствие воздействия ВД и их способность противостоять другим инфекциям утрачивается.

Согласно концепции патогенеза ВД-БС клинически выраженное заболевание воз­никает только у животных, которые инфицируются вирусом на ранней стадии беременности и рождаются с персистирующей вирусной инфекцией и специфической иммунотолерантностью. Врожденные дефекты могут развиваться, когда инфекция плода происходит на про­межуточных сроках стельности. Плод может быть инфицирован внутриматочно на поздних строках стельности, при этом инфекция не персистирует и у плода вырабатываются AT. По-стнатальная инфекция проявляется в виде субклинических заболеваний с нормальным им­мунным ответом.

ДИАГНОСТИКА

Диагноз ставят на основании клинических, эпизоотологических данных и лабораторных методов исследования. Однако эпизоотологические данные, симптомы болезни и характер патологических изменений дают основание лишь заподозрить болезнь. Поскольку ВД-БС напоминает многие другие болезни (чуму, инфекционный язвенный стоматит, грибковый стоматит, ПГ-3, катаральную лихорадку КРС, паратуберкулез и алиментарные отравления), лабораторные исследования в диагностике имеют решающее значение. При ди­агнозе на ВД-БС следует учитывать следующее: заболевают отдельные животные в возрасте 3-36 мес, типичные клинические изменения проявляются поражением слизистых оболочек или кровянистым поносом с эрозией или без эрозии слизистых мембран, все заболевшие животные погибают в течение нескольких дней, у больных животных нет специфических AT в крови, хотя остальное поголовье имеет их в высоких титрах.

Лабораторная диагностика ВД-БС включает: 1) обнаружение в патологическом мате­риале (мазках, отпечатках, срезах), полученном от больных животных АГ в РИФ; 2) выде­ление возбудителя из патологического материала в культуре клеток ТБ, ПЭК или ЛЭК и его идентификация в РН или РИФ; 3) выявление AT в сыворотке крови больных и переболев­ших животных (ретроспективная диагностика) в РСК и РН.

Лабораторную диагностику ВД-БС проводят с использованием набора диагностикумов (ТУ 4621-529-79), выпускаемых биологической промышленностью. Ее ведут параллельно с исследованием материала на ПГ-3, аденовирусную (адено 1 и 2), PC и ИРГ. Предварительный диагноз на ВД-БС КРС ставят на основании положительных резуль­татов обнаружения АГ в патологическом материале в ИФ и ПЦР с учетом эпизоотологических и клинических данных, а также патологоанатомических изменений. Окончательный диагноз ставят на основании: совпадения результатов ИФ с ПЦР, выделением и идентифи­кацией вируса; совпадения результатов ИФ с обнаружением AT в 30% и более вторых проб парных сывороток в титрах не ниже 1:4 в РСК и 1:16 в РН; обнаружения 4-кратного и более прироста AT в парных пробах сывороток. Предварительный диагноз ставят в ветеринарных лабораториях в течение 2-3 дн, окончательный - до 30 дн.

Выделение вируса.

Взятие и подготовка материала. В лабораторию направляют патологический матери­ал от больных животных, взятый в первые 2-3 дня при выраженных симптомах болезни, или от животных, убитых с диагностической целью в острой стадии заболевания. От боль­ных животных берут 15-20 проб следующего материала: смывы со слизистой оболочки но­совой полости, получаемые путем введения стерильного ватно-марлевого или поролонового тампона в носовые ходы; пробы крови в первые 3 да болезни и через 3 нед от тех же живот­ных с соблюдением правил асептики в стерильные пробирки по 8-10 мл; соскобы с изъязв­ленных или эрозированных участков слизистых оболочек ротовой полости и носового зер­кала, взятые жесткими ватно-марлевыми тампонами или скальпелем. Тампоны с материа­лом помещают в стерильные пенициллиновые флаконы или пробирки с 2-3 мл стерильного физиологического р-ра или р-ра Хенкса,  содержащего 500-1000 ЕД/мл антибиотиков (канамицина, мономицина, неомицина, пенициллина, стрептомицина и др.). Из крови после свертывания стерильно сливают 3-4 мл сыворотки и доставляют в лабораторию.

От животных, убитых с диагностической целью, берут с соблюдением правил асептики кусочки легких с бронхом (на границе пораженного и здорового участков), селезенки, сре-достенные, бронхиальные и брыжеечные лимфоузлы, миндалины, пораженные участки сли­зистых оболочек носовой и ротовой полостей, трахеи, ЖКТ, а также пробу крови. Кусочки материала массой до 20 г помещают в стерильную, плотно закрывающуюся посуду. Легче вирус выделить в начале болезни и в период обострения из крови, легких, различных участ­ков тонкого кишечника (в особенности из клеток слизистой оболочки 12-перстной кишки), лимфоузлов и селезенки. При хроническом течении болезни его удается регулярно выделять из разных отделов кишечника, но не из крови. Исследование носовых смывов и фекалий в этих случаях также дает отрицательные результаты, хотя в отдельных случаях вирус удава­лось выделять из фекалий даже через 5 мес после болезни. В начале болезни в период подъ­ема температуры от больных животных берут пробы крови в р-р цитрата натрия или гепа-рина и помещают их в термос со льдом. Из крови экспериментально зараженных животных выделяли вирус с 1-14-го да после заражения. Выделяли его также из тканей абортирован­ных или мертворожденных плодов, плаценты и околоплодной жидкости.

Заражение культур клеток. Вирус выделяют в первичных субкультурах клеток эм­бриона КРС (ПЭК, ЛЭК, СЭК) или ТБ. Изолят считается выделенным в случае, если он вы­зывает стабильное однотипное ЦПД не менее чем в 2-х последовательных пассажах. В этом случае возможна его идентификация в РН. В первичных культурах клеток почки эмбриона коров первые ЦПИ обнаруживают через 2-5 дн после инокуляции. Они выражаются в появ­лении мелкозернистой инфильтрации в клетках фибробластоидного типа. По мере развития инфекции клетки постепенно отторгаются от поверхности стекла, но некоторые долго со­храняются, образуя островки клеток эпителиоидного типа В конце концов на стекле остает­ся только сеть зернистого материала.

При использовании вторичных культур клеток цитопатические изменения появляются почти одновременно во всех клетках монослоя, причем они становятся удлиненными, угло­ватыми и кажутся переплетенными. В окрашенных препаратах клеточного монослоя при наличии цитопатических изменений обнаруживают вакуолизацию протоплазмы и измене­ние ядер, выражающиеся в сокращении мембраны, пикнозе и кариорексисе.

Серологическая идентификация

ИФ. Аналогична таковой при диагностике аденовирусной инфекции. Этим методом АГ ВД обнаруживают в клетках слизистой оболочки прямой кишки, селезенки, легких и лимфоузлов экспериментально зараженных животных. Изучено распределение АГ ВД-БС в тканях животных остром и хроническом течениях болезни. В лимфоидных тканях АГ рас полагается в клетках системы фагоцитирующих мононуклеаров. Между первоначальным обнаружением АГ в слизистой кишечника, кератинизированном эпителии верхних отделов пищеварительной системы и кожи и прогрессированием патологических признаков имеется скрытый период. ИФ биопсийного материала слизистых оболочек ротовой и носовой полостей пригодна для ранней прижизненной диагностики вируса диареи. ИФ для обнаружения АГ вируса в клетках из носоглоточных смывов - надежный и быстрый способ выявления животных, пер-систентно инфицированных вирусом. При исследовании препаратов обращают внимание на свечение АГ в цитоплазме не разрушенных клеток. Яркая зеленая флюоресценция в виде гранул или диффузного свечения цитоплазмы не менее чем в 10% клеток позволяет оценить препарат как положительный. Предварительный диагноз ставят при наличии не менее 30% положительных препаратов от общего количества исследованных проб. Удобным оказался непрямой метод ИФ с использованием конъюгированных Fab-фрагментов AT из гиперим­мунной свиной сыворотки против ВД-БС КРС Специфическая флюоресценция вирусного АГ в культуре бычьих макрофагов обнаруживалась в цитоплазме клеток Для идентифика­ции не цитопатогенных изолятов метод ИФ практически единственный. При наличии ЦПД в культурах клеток, зараженных изолятом, и положительной флюоресценции проводят окон­чательное типирование вируса в РН.

РН. Это основной метод идентификации вируса. Новые изоляты возбудителя ВБ-БС, не обладающие цитопатогенной активностью, могут быть идентифицированы при помощи ги­периммунной сыворотки к вирусу диареи по подавлению феномена экзальтации вируса НБ, который используют для индикации подобных штаммов.

РДП. Обеспечивает быструю и точную постановку диагноза, однако пока чувствитель­ность метода невелика, и его следует использовать в комплексе с другими методами лабора­торной диагностики и идентификации возбуди теля Приготовление испытуемого АГ и ме­тодика постановки РДП описаны ранее . Антисыворотку для РДП готовят на КРС Для иммунизации животных используют цитрированную кровь, взятую асептически от экс­периментально зараженных животных в период подъема температуры. Кровь вводят внут­ривенно (некоторым животным делают несколько таких инъекций). Кровь берут через 60-90 дн после инокуляции.

Выявление вируса ПЦР. Данный метод рекомендован для быстрой диагностики ВД-БС. После цикла обратной транскрипции образцы ткани инфицированной культуры клеток подвергают амплификации с использованием праймеров, обеспечивающих репликацию оп­ределенного сегмента гена белка gp48 ВД. Для обнаружения амплифицированных последо­вательностей используют электрофорез в ПААГ и гибридизацию с биотинилированным ДНК-зондом на последовательности г                                                                                                               енома вируса лейкоза. При идентификации молочных стад, инфицированных вирусом ВД-БС КРС, также предложен метод ПЦР для работы с пробами молока.

ИФА. ИФА позволяет легко идентифицировать культуры клеток, инфицированные ВД. Идентификация с помощью монАТ в практическом диагностическом применении не разра­ботана. Однако получено 5 монАТ  против вируса ВД-БС КРС с ВН-активностью, которые позволили разделить изоляты ВД на 4 группы По­лучена и изучена панель монАТ против Singer-изолята, с помощью которой были обнару­жены полипептиды мол м 56-58 кД и доказано, что гликопротеин, локализуется на поверх­ности вирионов и является носителем нейтрализующих эпитопов. Анализ с панелью монАТ показал АГ гетерогенность среди изолятов этого вируса.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика

Серодиагностика заболевания затруднительна, так как при хроническом течении инфек­ции AT обнаруживаются непостоянно и бывают в невысоких титрах. Диагноз на про­шедшую инфекцию, а также латентное вирусоносительство обычно ставят при помощи РН в культуре клеток, определяя титры AT в сыворотках реконвалесцентов. Для этого лучше ис­следовать парные сыворотки, взятые с интервалом 3-4 нед. При диагностике скрытого тече­ния инфекции чаще используют сыворотки крови убойного скота, поступающего с клиникой не диагностированной инфекции кишечного и респираторного трактов. Обычно в таких слу­чаях процент положительных сывороток (титры от 1:16 до 1 : 128) варьирует в широких пре­делах и может достигать 30-50 (иногда до 80) У клинически здоровых животных процент положительных проб может колебаться от 6-8 до 20-30. Динамика появления и угасания титров ВНА недостаточно изучена. Перед исследованием сыворотки прогревают в водяной бане при температуре 57-58°С 30 мин.

В США разработан быстрый количественный метод титрования ВД КРС. Он состоит в микротитровании с использованием цитопатогенных и не цитопатогенных изолятов вируса и перевиваемой линии клеток бычьей почки - МДВК. Для этого серийные разведения вируссодержащей жидкости и суспензию клеток в концентрации 1-Ю⁵ в среде с 2% сыворотки крови лошади заливают в лунки пластин Terasaki и проводят микротитрование в НИФ, ко­торую учитывают на дне лунок пластин, используя водно-иммерсионный объектив микро­скопа. Вирус также титруют и по бляшкообразованию. Специфическую флюоресценцию в клетках наблюдали уже через 12 ч после заражения, окончательные результаты считали че­рез 72 ч инкубирования. Результаты титрования вируса по бляшкам и в микротитровании совпадали. Микротитрование вируса по ИФ имеет преимущества над стандартным методом титрования по бляшкам, меньше времени и материалов и особенно незаменимо при титровании не цитопатогенных изолятов ВД.

РН. Её ставят методом разведения испытуемых сывороток с постоянной дозой стан­дартного вируса в культуре клеток ПЭК или ТБ. Положительными считают сыворотки с титром AT 1:16 и выше, в парных сыворотках - повышение титра AT во второй пробе в 4 раза и более. При экспериментальном заражении у всех телят через 15-61 день обнаружива­ли ВНА в титре 1:64 - 1.1024 Реакция, суть которой заключается в подавлении образования бляшек AT исследуемой сыворотки, оказалась пригодной для серологических исследований при ВД-БС. После получения гомогенного слоя клеток культуру промывают 1 раз фосфат­ным буферным р-ром и заражают 15 мл суспензии вируса в таком разведении, чтобы в 1 мл ее содержалось около 20 БОЕ. После адсорбции вируса при 37°С в течение 30 мин суспен­зию отсасывают и наносят на культуру 15 мл агара После застывания агара на его поверх­ности раскладывают кружки фильтровальной бумаги, насыщенной неразведенной иссле­дуемой сывороткой. После 4 дн инкубации при 37°С учитывают результаты. Доказательст­вом того, что исследуемая сыворотка содержит AT, служит отсутствие повреждения слоя клеток вокруг насыщенного ею кружка фильтровальной бумаги, что обнаруживается в виде венка клеток.

РСК. Ставят микрометодом с использованием микротитратора Такачи или Титертека При их отсутствии возможна постановка РСК в пробирках в общем объеме 0,5 мл.

РДП. Не нашла широкого применения в ветеринарной диагностической практике при обнаружении AT в сыворотках животных. ПА появляются в сравнительно поздние сроки (3-4 нед) после инфицирования и могут сохраняться 4 мес (титры AT до 1.16).

ELISA. В 500 раз чувствительнее РН, менее трудоемок и быстрее выполним. В качестве АГ использовали вирус, концентрированный ПЭГ и очищенный градиентным равновесным ультрацентрифугированием.

Дифференциальная диагностика

При постановке диагноза на ВД-БС необходимо исключить ИРГ, аденовирусную ин­фекцию, ПГ-3, злокачественную катаральную лихорадку, ящур, паратуберкулезный энтерит и др. Ввиду того, что ВД-БС может проявляться в различных формах (от острой до латент­ной), часто ассоциируется с такими инфекциями, как ПГ-3, аденоинфекция, хламидиозы и др., для окончательного диагноза необходимы лабораторные исследования. Лишь в качестве подозрения на ВД-БС следует учитывать быстрое распространение в стаде болезни, сопро­вождающейся лихорадкой, диареей, эрозиями в ротовой полости и ранней лейкопенией.

               ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА.

Переболевание ВД-БС сопровождается развитием иммунитета. Однако у некоторых жи­вотных возможны рецидивы, которые связывают с недостаточностью иммунитета Образо­вание иммунитета сопровождается повышением уровня ВНА и других AT, что используют для оценки напряженности иммунитета после вакцинации. ВНА образуются также у плодов при заражении матерей во 2-й половине беременности. У телят установлен выражен­ный колостральный иммунитет. Титр материнских AT в сыворотке крови телят снижается и исчезает в течение 3-7 мес после приема молозива. Реконвалесценты сохраняют невоспри­имчивость к повторному заражению в течение 2-3 лет Однако у них образуется нестериль­ный иммунитет и такие животные длительное время являются вирусоносителями. При хро­ническом течении инфекции на фоне иммунодепрессивного действия ВД возникает истоще­ние иммунной системы, поэтому у животных обнаруживают низкий титр ВНА. Новорожденные телята приобретают пассивный иммунитет к ВД через молозиво матери, так как Ig не проникают через плаценту стельных коров. Продолжи­тельность колострального иммунитета у телят составляет 4-6 нед. В слизистой оболочке ЖКТ под воздействием ВД появляются Ig класса А, причем, образование их в значительном количестве происходит только в том случае, если вирусный АГ непосредственно воздейст­вует на слизистую оболочку. Секреторные AT образуются в слизистых носовой полос­ти при аэрозольном применении аттенуированного вируса. Развитие ВД-БС происходит в результате специ­фической иммунологической толерантности при инфицировании плода.

Большинство сывороточных AT относится к классам Igd и IgG₂, что является типич­ным для инфекции. Установлено, что животные, не имеющие высокий уро­вень AT, невосприимчивы к реинфекции, однако, у некоторых из них после несколь­ких месяцев болезни титр ВНА в сыворотке низок, но через некоторое время отмечено его возрастание. Это происходит, по-видимому, вследствие нескольких случаев заражения и показывает, что иммунитет после естественной инфекции не пожизненный. Нет прямой корреляции между титрами ВНА и сроками выделения вируса от больных животных. ВНА могут быть комплементзависимыми и комплементнезависимыми В ответ на первичную ес­тественную инфекцию происходит накопление AT 1-го типа, титр их быстро снижается и через 6 мес приближается к титру комплементнезависимых AT. Различия могут быть использованы в ретроспективной диагностике с целью определения срока переболевания животного.

Проблемы специфической профилактики ВД-БС имеют свои особенности, обусловлен­ные её патогенезом. Наиболее существенная из них - внутриутробная передача вируса и длительная его персистенция у клинически здоровых животных-реконвалесцентов при на­личии специфических AT. Профилактика инфекции заключается в индикации и удалении животных с персистирующей инфекцией и вакцинации иммунокомпетентных.

Применение инактивированных вакцин. Инактивированная вакцина впервые была лицензирована в США в 1981 г., испытана в полевых условиях с положительными резуль­татами. В настоящее время инактивированные вакцины готовят из шт. Орегон C-24V, Singer и Нью-Йорк-1. В качестве адъюванта используют ГОА. Инактивированная вакцина из шт. Singer через 7 дн после повторного введения вызывала у телят образование ВНА в высоких титрах и защищала их от экспериментальной инфекции вирулентным iirr.New-York-1. Вакцинация глубоко стельных коров инактивированной вакциной против ВД-БС обеспечивает создание колострального иммунитета у их потомства; пассивные AT сохраня­ются в высоком титре до 40-45-дн возраста и обеспечивают защиту животных от экспери­ментального заражения. Двукратная вакцинация 7-10-дн телят с интервалом 11 дн на фоне колострального иммунитета не ведет к существенному повышению титра AT и не усиливает защиту при экспериментальном заражении. Однако AT у таких телят сохраняются дольше, чем у невакцинированных. Двукратная вакцинация 7-10-дн серонегативных телят с интер­валом 11 дн к 40-45-дн возрасту вызывает образование AT в более низких титрах, т.е. обес­печивает создание менее напряженного иммунитета по сравнению с животными, имевшими пассивный иммунитет. Вакцина оказалась эффективной при двукратном применении в дозе 2 мл с интервалом в 21 день; продолжительность иммунитета 1 год. В настоящее время инактивированные вакцины против ВД-БС получают все большее признание. Инактивированной вакцине также свойственны определенные недостатки - они менее иммуногенны при 1-кратном введении поэтому необходима ревакцинация и увеличение до­зы введения, особенно при вакцинации молодых животных Продукция секреторных AT и интерферона при введении инактивированных вакцин значительно понижена или отсутству­ет.

Применение живых вакцин Разработано множество стратегий использования живых вакцин Применение модифицированных живых вакцин полезно в крупных стадах, которые выпасаются на больших площадях или содержатся в откормочных комплексах, так как для иммунизации модифицированными живыми вакцинами требуются малые дозы при 1-кратном введении Наряду с довольно высокой эффективностью, живые вакцины имеют рад существенных недостатков, в т ч они могут вызывать аборты В результате проникновения в плод вакцинный вирус ВД-БС может вызвать его инфицирование, сопровождающееся аномалиями развития и абортами. Живые вакцины обладают определенным имму-нодепрессивным действием, что может привести к активации других агентов бактериальной и вирусной природы Кроме того вакцинный вирус может длительное время персистировать, что приводит к широкому рассеиванию вируса во внешней среде, создает опасность его риверсии и препятствует проведению диагностических мероприятий.

У стельных коров и персистентно инфицированных телят, кроме того аттенуированные штаммы возбудителя, как правило, индуцируют состояние иммунодепрессии. В связи с чем в поствакцинальный период отмечают повышение частоты секундарных, иногда ле­тально протекающих инфекций В связи с возможным нарушением эмбрионального разви­тия и возможного возникновения абортов, живыми вакцинами прививают только глубоко стельных коров. Идеально аттенуированные вакцинные штаммы наряду с высокой иммуногенностью не должны проникать через трансплацентарный барьер и вызывать состоя­ние толерантности у новорожденных телят, иммунодепрессию и гиперчувствительность к последующему заражению вирулентным штаммом вируса. Фирма Мерье (Франция) предложила новую живую вакцину из аттенуированного штамма ВД-БС, которая прошла широкие испытания на КРС всех возрастов и физиологических групп и оказалась безвред­ной и эффективной. Температурно-чувствительный аттенуированный шт RIT4350 ВД полу­чен в результате химического мутагенеза (обработка вирулентного шт CNCM1-198 ш vitro азотистой кислотой) Таким образом, решение проблемы с ВД-БС может быть достигнуто защитой плода от заражения в течение 1-й трети беременности. Для первичной иммунизации стад, в которых ранее вакцину не применяли, желательно использовать инактивированную вакцину.

Относительно практического применения живых вакцин имеются весьма разноречивые данные Вакцинация перед случкой предупреждает острую инфекцию в течение раннего пе­риода беременности. Однако живая вакцина обладает иммунодепрессивными свойствами, потенциально может вызвать поствакцинальную болезнь, оказать неблагоприятное воздей­ствие на плод Серьезные недостатки, свойственные живым вакцинам, послужили поводом для создания и совершенствования инактивированных препаратов, основным преимущест­вом которых является полная безвредность для стельных коров и молодняка. Однако они вызывают иммунологическую реакцию с образованием преимущественно гуморальных AT, которые у стельных коров накапливаются в сыворотке крови и в молозиве

Вакцинацию против ВД-БС целесообразно проводить до сезона респираторных болезней, чтобы свести до минимума иммунодепрессию, вызываемую поле­выми штаммами вируса

Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. При удачно выбранной схеме 2-кратной вакцинации иммунитет у животных сохраняется до 5 лет. У новорожден­ных телят он может быть различным, охватывать более 70% животных и длиться от 3,5 мес до года в зависимости от наличия пассивных AT или внутриутробного или неонатального образования иммунитета. У внутримышечно вакцинированных животных (живой вакциной из шт. Singer) ВНА выявляли на 23-й день после иммунизации, титр AT был 1:32-1:128. У подкожно привитых животных титр AT был 1:32-1:64. При заражении вирулентным виру­сом у вакцинированных животных наблюдали некоторое повышение температуры тела У коров, иммунизированных инактивированной вакциной на 7 мес стельности, средний титр ВНА составлял в крови 7,4+0,27 logs., в молозиве - 9,3+0,39 logz. У новорожденных телят (от вакцинированных коров) на 3-й день после выпойки молозива отмечали высокий титр AT -6,9+0,66 logj. При вакцинации коров на 7-8 мес стельности инактивированной вакциной в день отела выявляли высокий уровень AT в крови и молозиве (7,1-7,2 loga). Затем титр AT в крови начинал постепенно снижаться, но и через 6 мес (срок наблюдения) он сохраняла еще на довольно высоком уровне. ВНА сохранялись в молозиве и молоке до 7 да и полностью исчезали после 17 дн лактации. По данным разных исследователей, пассивный иммунитет у телят сохраняется до 2-6 мес и более. Установлено, что уровень IgG в сыворотке крови телят зависит от общего количества этого иммуноглобулина в молозиве Прямой связи между уровнем иммуноглобулинов и заболеваемостью телят установить не удалось, хотя у телят с уровнем IgG ниже 8 мг/мл диарея возникала чаще. Результаты исследований свидетельствуют, что вакцинация глубоко стельных коров обеспечивает создание колострального иммунитета у их потомства. Пассивные AT сохра­няются на высоком уровнедо 40-45-дн возраста и обеспечивают защиту жи­вотных от экспериментального заражения. Связь титров AT с вирусоносительством и вирусовыделением не изучена.

     Ветеринарно – санитарная оценка продукции неразработана.            

Семейство: Retroviridae.

Таксономическая структура семейства.

Семейство: Retroviridae

 Род: Alpharetrovirus, Betaretrovirus, Gammaretrovirus, Deltaretrovirus, Epsilonretrovirus,

  Lentivirus, Spumavirus

Характеристика вириона. Морфология. Вирион сферический (диаметр 80-100 нм) оболочечный, с гликопротеиновыми поверхностными выступами (8 нм в длину). Внутреннее ядро включает сферический нуклеокапсид (нуклеоид), расположенный эксцентрично у представителей рода Betaretrovirus, по центру – у Alpharetrovirus, Gammaretrovirus, Deltaretrovirus и Spumavirus, и в виде стержня или усеченного конуса у представителей рода Lentivirus. Существует два пути морфогенеза. Исторически, номенклатура, основанная на электронной микроскопии классифицировала членов родов Alpharetrovirus и Gammaretrovirus, которых сборка капсида происходит на плазматической мембране, как вирусы типа С. По отношению к членам рода Betaretrovirus сбрка их частиц типа А (незрелых капсидов) происходит в цитоплазме с последующим почкованием по морфологическому типу В (MMTV) или D (Mason-Pfizer monkey virus, M-PMV).

Вирионы чувствительны к нагреванию, детергентам и формальдегиду. Поверхностные гликопротеины могут быть удалены пртеолитическими ферментами. Относительно устойчивы к УФ облучению. Плавучая плотность 1,16-1,18 г/см³, S_20w  600S (в сахарозе).

Геном. Геном представлен димером молекул РНК (мономер РНК: односпиральная, линейная с позитивной полярностью, размер 7-11 kb), составляющих 2% сухого веса вириона. Мономеры связаны друг с другм водородными связями. Каждый мономер полиаденилирован и кэпирован по 3’- и 5’-концу, соответственно. Очищенная вирусная РНК не инфекционна. Каждый мономер комплементарно ассоциирован со специфической молекулой тРНК, в области (называемой сайтом связывания с праймером – primer binding site), расположенной ближе к 5’-концу РНК, и около 18 оснований по 3’-концу тРНК. РНК и фрагменты ДНК, клеточного происхождения могут оказаться в составе вириона.

Другие компоненты вириона. Протеины составляют около 60% сухой массы вириона. Два оболочечных протеина: SU (surface – поверхностный) и TM (transmembrane – трансмембранный), кодируются вирусным геном env. Внутренние негликозилированные 3-6 структурных протеинов кодируются геном gag. Расположение от N-конца: (1) MA (matrix-матрикс), (2) протеин, обнаруженный у некоторых вирусов, с неопределенной функцией, (3) CA (capsid protein – капсидный протеин), (4) NC (nucleocapsid – нуклеокапсид). Протеин МА часто ацилирован, с меристиловой частью, ковалентно связанной с аминоконцевым глицином. К другим протеинам относятся: протеаза (PR, кодируемая геном pro), обратная транскриптаза (RT, кодируемая геном pol) и интеграза (IN, кодируемая геном pol). У некоторых вирусов присутствует dUTPase (DU), роль которого не ясна. Липиды составляют около 35% сухого веса вириона, и являются производными клеточной мембраны. Углеводы составляют 3% сухого веса вириона. Обычно оба (реже один) поверхностных оболочечных протеина гликозилированы. В вирусной оболочке также обнаруживаются клеточные гликолипиды.

Организация генома и репликация. Вирион несет две копии генома. Инфекционный вирус имеет 4 основных гена, кодирующих вирусные протеины в следующем порядке: 5’-gag-pro-pol-env-3’. Некоторые ретровирусы содержат гены, кодирующие неструктурные протеины, играющие важную роль в регуляции экспрессии генов и репликации вируса. Другие могут нести влияющие на патогенез последовательности клеточного происхождения, которые могут быть включены в полноразмерный геном вируса (например, у вируса саркомы Рауса – Rouse sarcoma virus, RSV) или в виде замен при делециях вирусных последовательностей (например, у вируса саркомы мышей – Murine sarcoma virus). Такие делеции приводят к нарушению репликации вируса и зависят от нетрансформирующих вирусов-помощников, необходимых для образования инфекционного потомства. Во многих случаях последовательности клеточного происхождения образуют гибриды с генами вирусных структурных белков, которые транслируются в один химерный протеин.

Проникновение в клетку определяется взаимодействием гликопротеином вириона и специфическими рецепторами на клеточной поверхности, следствием чего является слияние вирусной оболочки и клеточной мембраны и эндоцитоз. Некоторые из клеточных рецепторов были идентифицированы. В проникновении вируса иммунодефицита человека (Human immunodificiency virus, HIV) в клетку принимают участие два рецептора: иммуноглобулин-подобный протеин с одним трансмембранным участком CD4 и хемокиновый рецептор, пронизывающий мембрану семь раз (CCR5 или CXCR4). Рецепторы для экотропных (Murine leukemia virus, MLV), амфотропных MLV и Gibbon are leukemia virus (GALV) связаны с участием в транспортировке мелких молекул и имеют сложную структуру с множественными трансмембранными доменами. Для вирусов лейкоза птиц (ALVs) идентифицировано два рецептора: для вирусов подгруппы А – мелкая молекула с одним трансмембранным доменом, отдаленно напоминающая клеточный рецептор для низкоплотностных липопротеинов, тогда как для вирусов подгруппы В – рецепторы семейства протеинов фактора некроза опухоли.

Репликация начинается с обратной транскрипции (при участии обратной транскриптазы, RT) вирионной РНК в кДНК, с использованием 3’-конца тРНК в качестве праймера. Синтез кДНК сопровождается разрезанием вирусной РНК (за счет RNAse H активности RT). Продукты гидролиза служат для первичного синтеза кДНК с негативной полярностью. Конечная форма двуспирального ДНК-транскрипта, образуемого из вирусного генома, содержит длинные концевые повторы (LTRs), состоящие из последовательностей с 3’- и 5’-концов вирусной РНК, фланкирующих сиквенс (R), обнаруженный по обоим концам РНК. Процесс обратной транскрипции характеризуется высокой частотой рекомбинации.

Ретровирусная ДНК интегрируется в хромосомную ДНК клетки, образуя провирус, при участии вирусного протеина IN. Слияние конца вирусной ДНК с клеточной сопровждается удалением двух оснований с концов вирусной ДНК и формированием короткого дуплекса клеточного сиквенса в сайте интеграции. Интеграция вирусного генома может происходить по многим сайтам клеточного генома. Однако однажды интегрировавшись, сиквенс уже не может изменить свою позицию внутри той же клетки. Карта интегрированного провируса колинеарна неинтегрированной вирусной ДНК. Интеграция предшествует вирусной репликации.

Интегрированный провирус транскрибируется клеточной РНК полимеразой II в вирионную РНК и мРНК в ответ на транскрипционный сигнал в вирусных LTRs. У вирусов некоторых родов транскрипция также регулируется вирусными трансактиваторами. В зависимости от вируса и генетической карты различают несколько классов мРНК. мРНК, включающая весь геном служит для трансляции генов gag, pro, pol (расположенных в 5’-половине РНК), продуктом которых является полипротеин-предшественник, разрезаемый до структурных протеинов, полимеразы, RT и IN, соответственно. Меньшие РНК, включающие 5’-конец генома, после сплайсинга с сиквенсом 3’-конца генома, и включающие ген env, участки U3 и R, транслируются в предшественники оболочечных протеинов. У вирусов, содержащих дополнительные гены, может происходить другой сплайсинг, но все такие РНК будут иметь общий 5’-концевой сиквенс. Спумавирусы уникальны в том, что могут использовать внутренний промотор, расположенный в гене env выше доступа к рамке считывания. Большинство первично транслированных продуктов представляют собой полипротеины, подвергающиеся протеолитическому разрезанию для приобретения функциональной активности. Продукты генов gag, pro и pol обычно являются вторичными после первичной трансляции продуктов. Для трансляции pro и pol используются обходные трансляционные терминирующие сигналы.

Сборка капсида происходит либо на плазматической мембране (вирусы большинства родов), либо как внутрицитоплазматические частицы (Betaretrovirus и Spumavirus), и высвобождаются из клетки почкованием. Полипротеиновый процессинг внутренних протеинов происходит попутно или последовательно с созреванием вириона.

Антигенные свойства. Протеины содержат типо- и группоспецифические антигенные детерминанты. Некоторые из типоспецифических детерминант участвуют в антитело-обусловленной нейтрализации вируса. Группоспецифические детерминанты являются общими у членов одной серогруппы или могут встречаться у членов разных серогрупп внутри рода. Показана слабая перекрестная активность между представителями разных родов. Эпитопы, определяющие Т-клеточный ответ обнаружены у многих структурных протеинов. Антигенные свойства неиспользуются в классификации вирусов.

Биологические особенности. Ретровирусы распространены среди позвоночных как экзогенные агенты. Эндогенные провирусы, являющиеся результатом произошедшего когда-либо инфицирования герминативных клеток, наследуются по законам Менделя. Ретровирусы связаны с различными болезнями: лейкемии, лимфомы, саркомы и другие опухолевидные процессы тканей мезодермального происхождения; карцинома печени, почек, молочных желез; иммунодифециты (СПИД); аутоиммунные болезни; болезнь нижних двигательных нервов и многие другие остро протекающие болезни. Некоторые ретровирусы непатогенны. Распространение может быть горизонтальное (через кровь, слюну, половые контакты и т.п.) и вертикальное (прямое инфицирование плода; инфицирование через молоко, или при прохождении через родовые пути). Эндогенные ретровирусы наследуются в виде провирусов.

Род: Alpharetrovirus. Типовой вид: Avian leukosis virus (ALV) (вирус лейкоза птиц).

Сборка вирусных частиц происходит на плазматической мембране, по морфологии С-типа. Молекулярная масса протеинов: МА ± 19х10³; р10 ± 10х10³; СА ± 27х10³; NC ± 12х10³; PR ± 15х10³; RT ± 68х10³; IN ± 32х10³; SU ± 85х10³; TM ± 37х10³. Геном 7,2 кб (1 мономер). Расположение генов: gag-pro-pol-env. Дополнительных генов нет. LTR около 350 нуклеотидов, из которых 250 составляют участок U3, 20 – сиквенс R, 80 – участок U5. Вирусы широко распространены и являются экзо- и эндогенными вирусами уток и других видов птиц. Изоляты ALV подразделяются на подгруппы А-J по различию в используемых клеточных рецепторах. Отдаленное сходство сиквенсов выявлено у эндогенных вирусов птиц и млекопитающих. Инфекция ассоциируется с малигнизацией и другми болезнями (истощение, остеопороз). Выделено много онкоген-содержащих вирусов.

Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный сиквенс. Аминокислотный сиквенс (генных продуктов). Спектр естественных хозяев. Разный онкогенез (если есть).

Например, вирус лейкоза птиц может быть легко отличен от вируса саркомы Рауса, так как не имеет онкогена, и кодирует только gag, pol и env. Репликация дефектных альфаретровирусов может быть отличена от вируса саркомы Рауса по различным делециям участков генов gag, pol и env и наличию уникальных для каждого онкогенов. Вирус саркомы Рауса кодирует онкоген src, тогда как вирус миелобластоза птиц, например, кодирует онкоген myb. Спектр хозяев, определяемый взаимодействием поверхностных гликопротеинов и клеточных рецепторов обычно используется для определния штаммов внутри вида.

Виды (9 видов):

Род: Betaretrovirus.Типовой:Mouse mammary tumor virus(MMTV)(вирус опухоли молочной железы мыш).

Характерные особенности.Вирионы MMTV имеют морфологию типа В (эксцентрично расположенное ядро, выступы на поверхности вириона). Другие члены рода имеют морфологию типа D (менее плотные поверхностные выступы и цилиндрический кор). Сборка капсида происходит в цитоплазме (образуя структуру, называемую частицами типа А), после чего они транспортируются и отпочковываются через цитоплазматическую мембрану. Молекулярная масса протеинов: МА ± 10х10³; р21 ± 21х10³; СА ± 27х10³; NC ± 14х10³; DU; PR ± 15х10³; RT; IN; SU ± 52х10³; TM ± 36х10³. Размер генома 8-10 kb (1 мономер). Организация для MMTV: gag-pro-pol-env-sag. У MMTV есть дополнительный ген sag, продуктом которого является суперантиген. У MMTV размер LTR составляет 1300 нуклеотидов, 1200 нуклеотидов, кодирующие регион U3, 15 нуклеотидов – R, 95-120 нуклеотидов – U5, длина которых  у всех видов рода.

В данный род входят экзогенные, передающиеся вертикально (с молоком) и эндогенные вирусы мышей, так же как и экзогенные, передающиеся горизонтально, и эндогенные вирусы приматов и овец. Вирусы мышей ассоциированы с карциномой млочной железы и Т-лимфомами, тогда как экзогенные вирусы приматов ассоциированы с иммунодефицитными болезнями; Jaagsiekte virus (JSRV) ассоциирован с раком легких у овец. Онкоген-содержащие вирусы не выявлены.

Критерии подразделения на виды внутри рода.

Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный сиквенс. Аминокислотный сиквенс (генных продуктов). Спектр естественных хозяев.

            Некоторые ретровирусы приматов довольно различны между собой, хотя и относятся к одному виду благодаря рекомбинации с геном env гаммаретровирусов. Наиболее дивергентные из них эндогенные Squirrel monkey retrovirus (SMRV) и Langur virus (LNGV), которые не могут инфицировать клетки из тканей органов приматов. Несколько серологически различных штаммов существует у вида Mason-Pfizer monkey virus (M-PMV). Mouse mammary tumor virus (MMTV) выделен  как отдельный вид, благодаря наличию уникального участка, кодирующего sag и очень отличающегося гена env. Ovine pulmonary adenocarcinoma virus (JSRV) также выделен как отдельный вид на основе оценки степени нуклеотидной дивергенции. Сходные эндогенные провирусы были идентифицированы и у других млекопитающих (грызуны, приматы).

Виды (5 видов):

Род: Gammaretrovirus. Типовой : Murine leukemia virus (MLV) (вирус лейкемии мышей).

Характерные особенности. Вирион имеет морфологию типа С, со слаборазличимыми поверхностными выступами. Плотный кор расположен в центре. Сборка капсида происходит на внутренней поверхности мембраны одновременно с почкованием. Молекулярная масса протеинов: МА ± 15х10³; р12 ± 12х10³; СА ± 30х10³; NC ± 10х10³; PR ± 14х10³; RT ± 80х10³; IN ± 46х10³; SU ± 70х10³; TM ± 15х10³. Геном 8,3 kb; расположение генов: gag-pro-pol-env.Дополнительных генов нетРазмер LTR составляет 600 нуклеотидов, 500 нуклеотидов – регион U3, 60 нуклеотидов – R, 75 нуклеотидов – U5.

Вирусы широко распространены, экзогенные (передаются горизонтально и вертикально) и эндогенные вирусы встречаются у многих млекопитающих. Вирусы ретикулоэндотелиозов включают несколько видов, выделенных у птиц, не имеют сходных эндогенных последовательностей. Сходные эндогенные последовательности обнаружены у млекопитающих. Вирусы ассоциируются с рядом таких болезней как малигнизация, иммуносупрессия, нейрологические нарушения и др. Выделено много онкоген-содержащих вирусов млекопитающих и вирусов группы ретикулоэндотелиозов.

Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный сиквенс и вирусный онкогенез. Антигенные свойства. Спектр естественных хозяев. Патогенность.

      Описаны вирусы ретикулоэндотелиозов млекопитающих, рептилий и птиц. Вирусы млекопитающих могут быть как способными к репликации и не имеющими онкогенов клеточного происхождения, так и дефектными по способности к репликации, имеющие разные клеточные онкогены.

Murine leukemia virus (MLV) может быть отличен от Gibbon ape leukemia virus (GALV) по дивергенции сиквенсов, различием в рецепторах, необходимых для проникновения в клетку, и ограниченной антигенной перекрестной реактивности в ELISA. Вирус саркомы мышей, дефектные по репликации отличается от MLVs и между собой по наличию клеточных онкогенов (Moloney sarcoma virus(mos) и Wooley monkey sarcoma virus (sis)) и потерей частей генов gag, pol, env.

Виды (17 видов):

Род: Deltaretrovirus.Типовой: Bovine leukemia virus(BLV)(вирус лейкемии (лейкоза) КРС).

       По морфологии и стратегии сборки вирион дельтаретровирусов сходен с таковым гаммаретровирусов: морфология типа С, слаборазличимыми поверхностными выступами, плотный кор расположен в центре; сборка капсида происходит на внутренней поверхности мембраны одновременно с почкованием. Молекулярная масса протеинов: МА ± 19х10³; СА ± 24х10³; NC ± 12-15х10³; PR ± 14х10³; RT; IN; SU ± 60х10³; TM ± 21х10³. Геном 8,3 kb; расположение генов: gag-pro-pol-env-tax-rex. Дополнительные гены: tax-rex, кодируют неструктурные протеины, участвующие в регуляции синтеза и процессинга вирусной РНК. Размер LTR составляет 550-750 нуклеотидов, 200-300 нуклеотидов – регион U3, 135-235 нуклеотидов – R, 100-200 нуклеотидов – U5. Экзогенные вирусы (с горизонтальной передачей) данного рода обнаружены только у небольшой группы млекопитающих. Родственных эндогенных вирусов не идентифицировано. Инфекции связаны с В- или Т-клеточными лейкемиями или лимфомами, так же как и с нейрологической болезнью (тропический спастический парапорез или HTLV-ассоциированная миопатия) с длительным латентным периодом с инцидентностью менее 100%. Онкоген-вирусов нет.

Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный сиквенс. Антигенные свойства. Спектр естественных хозяев. Патогенность. HTLV-1 и STLV-1 были отнесены в соответствующий кластер не по признаку спектра восприимчивых хозяев, а в соответствии с географическим распространением. Все описанные субтипы HTLV-1 наиболее вероятно возникли при межвидовой передаче от обезьян человеку. Например, Primate T-lymphotropic virus 1 (PTLV-1) отличается от Primate T-lymphotropic virus 2 (PTLV-2), впервую очередь, на основе филогенетических различий. Оба вируса имеют одинаковую кодирующую стратегию, но только PTLV-1 имеет отношение к болезни человека.

Виды (4 вида):

Род: Epsilonretrovirus.

Типовой вид: Walleye dermal sarcoma virus (WDSV) (вир дермальной саркомы (глаукомы)).

        Все представители рода являются экзогенными ретровирусами. Имеют сложную структуру. Размер генома 11,7-12,8 kb, расположение генов: gag-pro-pol-env-orfA-orfB; 1-3 ORFs, кодирующие преимущественно дополнительные протеины. ORFa (вирусный гомолог циклину D) присутствует у всех трех ретровирусов, вызывающих глаукому. Функции двух других ORFs у вирусов глаукомы или одной ORF у ретровируса змееголова не определены. Размер LTR ретровирусов рыб варьирует от 500 до 650 нуклеотидов, 450 нуклеотидов – регион U3, 80 нуклеотидов – R, 75 нуклеотидов – U5. Филогенетический анализ участка полимеразы показал, что ретровирусы глаукомы и окуней образуют группу вирусов, отличающихся от ретровирусов змееголова. Тем не менее, на данный момент, все ретровирусы рыб оказались в одной группе с ретровирусами типа С млекопитающих.

Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный сиквенс и вирусный онкогенез. Аминокислотный сиквенс продуктов генов. Спектр естественных хозяев.

Данный род состоит из трех видов ретровирусов рыб, различающиеся между собой на основе филогенетического разнообразия. В даный таксон включены два предполагаемых вида. С появлением дополнительных данных ретровирус змееголова может быть выделен в отдельный род. Вирус гиперплазии окуней был секвенирован только по гену полимеразы и остается в статусе предполагаемого, пока не будет получена дополнительная информация по сиквенсу.

Виды (3 вида):

Предполагаемые виды (2): Perch hyperplasia virus (PHV) (вирус гиперплазии окуней)

Snakehead retrovirus (SnRV) [U26458] (ретровирус змееголова).

Род: Lentivirus. Типовой вид: Human immunodificiency virus 1 (HIV-1) вирус иммунодефицита человека 1.

Вирион имеет характерную морфологию, с прямоугольным или конусовидным кором (нуклеоидом). Сборка вириона происходит на клеточной мембране. Молекулярная масса протеинов: МА ± 17х10³; СА ± 24х10³; NC ± 7-11х10³; PR ± 14х10³; RT ± 66х10³; DU (у всех кроме лентивирусов приматов); IN ± 32х10³; SU ± 120х10³; TM ± 41х10³. Размер генома 9,3 kb; расположение генов: gag-pro-pol-vif-vpr-tat-rev-vpu-env-nef. Кроме основных генов gag-pro-pol-env присутствуют дополнительные гены (например для HIV-1: vif, vpr, tat, rev, vpu и nef), продукты которых участвуют в регуляции и синтезе вирусной РНК и других репликативных процессах. У других вирусов могут быть дополнительные гены неструктурных белков (например у HIV-2: vpx). Размер LTR 600 нуклеотидов, 450 нуклеотидов – регион U3, 100 нуклеотидов – R, 80 нуклеотидов – U5.

В состав рода входят экзогенные вирусы (с горизонтальной и вертикальной передачей) человека и многих других млекопитающих. О существовании родственных эндогенных вирусов сведений нет. Лентивирусы приматов отличаются по использованию хемокинового рецептора, протеина CD4 и по отсутствию DU. Некоторые группы проявляют перекрестную активность по антигенам Gag (лентивирусы овец, коз и кошек). Вирусы, родственные Feline immunodificiency virus (FIV) были выделены от других крупных кошачьих (например, Puma lentivirus), а наличие антител к антигену Gag у львов и других крупных кошачьих свидетельствует о существовании других вирусов, близких FIV и лентивирусам овец и коз. Вирусы ассоциируются с различными болезнями, включая иммунодефициты, нейрологические нарушения, артриты и др. Онкоген-вирусов нет.

Критерии подразделения на виды внутри рода.Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный и аминокислотный сиквенс. Антигенные свойства. Спектр естественных хозяев. Патогенность.

На основе различий по спектру восприимчивых хозяев лентивирусы были подразделены на 5 групп (лентивирусы приматов, овец и коз, лошадей, кошек и КРС). Внтури группы лентивирусов приматов HIV-1 отличается от HIV-2, прежде всего по дивергенции нуклетидных сиквенсов, которая превышает 50%, и по наличию у HIV-2 гена vpx. Показана ограниченная перекрестная реактивность в ELISA на основе Gag-антигенов; по продукту гена env перекрестной активности нет.

 Виды (10 видов):

* - описана межвидовая передача SIV-sm (у содержащихся в неволе).

Род: Spumavirus. Типовой вид: Chimpanzee foamy virus (CFV) (пенящий вирус шимпанзе).

Характерные особенности. Вирион имеет характерную морфологию, со слабозаметными поверхностными выступами и центральным неплотным ядром. Сборка капсида происходит в цитоплазме, после чего он отпочковывается в эндоплазматическую сеть или через плазматическую мембрану. Для почкования капсида необходим протеин Env. Нет сведений о разрезании в инфекционном вирионе протеина-предшественника Gag до субъединиц MA, CA, NC. Молекулярная масса протеинов: Gag-предшественник ± 74х10³; N-концевой продукт разрезания Gag ± 70х10³; Pol-предшественник ± 127х10³; RT ± 80х10³; IN ± 40х10³; Env-предшественник ± 130х10³; SU ± 80х10³; TM ± 48х10³; Itas/Bel ± 35х10³; Bet (Bel-1/Bel-2 fusion protein) ± 60х10³; Env-Bet fusion protein ± 170х10³. Размер генома 11,6 kb; расположение генов: gag-pro-pol-env-tas-bet. Tas является ДНК-связывающим протеином с трансактиваторной функцией. Функции другого дополнительного протеина не известны. Размер LTR 1770 нуклеотидов, 1400 нуклеотидов – регион U3, 200 нуклеотидов – R, 150 нуклеотидов – U5. У вирусов КРС и кошек размер соответствует 950-1000 нуклеотидов. Спумавирусы могут использовать два сайта начала транскрипции: R в LTR и внутренний промотор (IP), расположенный выше дополнительных рамок считывания в гене env. Активность обоих промоторо зависит от Tas. Другим важным критерием отличия спумавирусов от представителей других родов семейства Retroviridae – экспрессия протеина Pol со сплайсированной субгеномной мРНК и присутствие в вирионе большого количества обратнотранскрибированной ДНК.

Вирусы распространены повсеместно, экзогенные, найдены у многих млекопитающих. Естественного инфицирования людей не зарегистрировано, отмечались редкие случаи заражения людей от нечеловекообразных обезьян. Есть данные о существовании родственных (но не близких) эндогенных вирусов. Многие изоляты вызывают характерную “пенистую” цитопатологию в культуре клеток. Болезней, ассоциированных со спумавирусной инфекцией, не отмечается. Онкоген-вирусов не обнаружено.

Критерии подразделения на виды внутри рода. Для подразделения на виды используются следующие критерии: Нуклеотидный и аминокислотный сиквенсы. Спектр естественных хозяев. Виды (5 видов):