Диссертация (Влияние компонентов сигнального пути HEDGEHOG на пролиферацию и химиорезистентность низкодифференцированных глиом), страница 2

Впервые при помощи методикиизмерения электрического импеданса показано, что ингибирование и стимулированиесигнального пути HН влияет на чувствительность клеток линии U-251 MG к исследуемымхимиотерапевтическим препаратам. Было показано, что сигнальный путь HН влияет намультилекарственную резистентность клеток опухолевых линий U-251 MG и U-87 MG,принимая участие в формировании фенотипа клеток боковой популяции.Теоретическая и практическая значимостьБыло показано, что сигнальный путь HH влияет на пролиферацию и химиорезистентностьклеток низкодифференцированных глиом.

Таким образом, этот сигнальный путь может7рассматриваться в качестве мишени при лечении низкодифференцированных глиом, но тольков подгруппе Нedgehog сигналинг-зависимых глиом. Разработанный подход качественнойоценки активности сигнального пути является предпосылкой для разработки количественныхкритериев оценки активности сигнального пути HH как в стандартных клеточных линиях, так ив первичных культурах опухолевых клеток, полученных после оперативного вмешательства.Метод измерения электрического импеданса может быть использован для оценки влияниядругих ингибиторов сигнального пути и оценки влияния НН сигнального пути начувствительность клеток к различным химиотерапевтическим препаратам.

Это будетспособствовать подбору комбинаций ингибиторов НН сигнального пути и наиболееэффективных цитотоксических препаратов, что, в свою очередь, будет способствоватьразвитию персонифицированных подходов в терапии низкодифференцированных глиом.Положения, выносимые на защиту:1.Экспрессия GLI1 в клетках линий глиом превышает экспрессию в клетках культурыастроцитов человека. Оценивать эффекты воздействия транскрипционных факторов GLI1 иtGLI1 на процессы пролиферации и химиорезистентности только при помощи ПЦР вреальном времени невозможно.2.Компоненты сигнального пути Hedgehog способны оказывать влияние на клеточнуюпролиферацию низкодифференцированных глиом.3.Предложенное сочетание методов измерения электрического импеданса и проточнойцитофлуориметрии позволяет оценить влияние циклопамина на пролиферацию и HHсигналинг-опосредованное цитотоксическое действие в отдельности.4.Предложенный подход качественной оценки активности сигнального пути Hedgehog можетприменяться дополнительно к описанным в литературе методам оценки его активности.5.КомпонентысигнальногопутиHedgehogспособныоказыватьвлияниенамультилекарственную резистентность низкодифференцированных глиом, в том числе и наформирование фенотипа клеток боковой популяции.Личный вклад автораАвтором самостоятельно были проведены: анализ научной литературы, все описанныениже исследования, а также статистический анализ полученных результатов.8Методология и методы исследованияВ работе применяли современные молекулярно-биологические методы (выделениесуммарной РНК, синтез кДНК и проведение полимеразной цепной реакции в реальномвремени), методы проточной цитофлуориметрии на клеточном сортере Beckman MoFlo XDP итехнологиюизмеренияэлектрическогоимпедансадляанализапролиферацииижизнеспособности клеток на приборе xCELLigence.Степень достоверностиДостоверность полученных данных основана на выполнении работы в соответствии спринятыми стандартами проводимых исследований, а также в соответствии с рекомендациямипроизводителей оборудования, реактивов и расходных материалов.

Работа выполнена надостаточном экспериментальном материале. Статистическая обработка полученных данныхосуществлялась с помощью пакета прикладных программ Statistica 7.0 и Microsoft Excel 2010.Апробация, внедрение, публикацииМатериалы диссертации были представлены на IX – X Международных (XVIII – XIXВсероссийских) Пироговских научных медицинских конференциях студентов и молодыхученых (Москва, 2014 – 2015), VIII Московском международном конгрессе «Биотехнология:состояние и перспективы развития» (Москва, 2015), VII Международной научной конференцииScience4Health (Москва, 2016), Международном конгрессе «Биотехнология: состояние иперспективы развития» (Москва, 2019).Результаты диссертационной работы были внедрены в научно-исследовательскуюдеятельность лаборатории нейрохимии ФГБУ «НМИЦПН им.

В.П. Сербского» МинздраваРоссии и лаборатории клеточных технологий ФГБУ «ФНКЦ ФМБА России».По материалам работы опубликовано 10 печатных работ, в том числе 6 статей в ведущихроссийских рецензируемых журналах и 4 тезиса докладов.Апробация диссертации была проведена на совместном заседании кафедры и отделамедицинских нанобиотехнологий МБФ ФГБОУ ВО РНИМУ им. Н.И. Пирогова МинздраваРоссии и отдела фундаментальной и прикладной нейробиологии ФГБУ «НМИЦПН им. В.П.Сербского» Минздрава России.9Объем и структура диссертацииДиссертация изложена на 123 машинописных страницах.

Состоит из введения, обзоралитературы, материалов и методов, результатов, обсуждения, заключения, выводов, спискасокращений и условных обозначений и списка литературы. Диссертация иллюстрирована 23рисунками и 1 таблицей. Список литературы включает 271 источник, в том числе 5отечественных и 266 зарубежных.10Глава 1.

Обзор литературы1.1 Опухоли головного мозгаВ 2007 году ВОЗ выпустила 4-ое издание классификации опухолей головного мозга,основанное на гистологических особенностях опухолей. Было выделено несколько групп:опухоли нейроэпителиального происхождения, опухоли черепных и спинномозговых нервов,опухоли мозговых оболочек, лимфомы и гематологические опухоли, дизэмбриогенетическиеопухоли, опухоли в области турецкого седла и метастатические опухоли [18].К опухолям нейроэпителиального происхождения относят такие группы заболеваний как:астроцитарные, олигоастроцитарные, олигодендроглиальные, эпендимальные опухоли, опухолихориоидного сплетения, нейрональные и смешанные нейронально-глиальные опухоли, опухолишишковидной железы, эмбриональные опухоли и другие нейроэпителиальные опухоли [18].Непосредственноолигодендроглиальные,подглиомамиэпендимальныепонимаютопухоли,астроцитарные,некоторыеолигоастроцитарные,смешанныенейронально-глиальные опухоли и астробластому, ангиоцентрическую глиому и хордоидную глиомутретьего желудочка, относящиеся к другим нейроэпителиальным опухолям [18, 19].В свою очередь, среди астроцитарных нейроэпителиальных опухолей выделяютследующиеопухоли:пилоцитарнаяастроцитома,пиломиксоиднаяастроцитома,субэпендимальная гигантоклеточная астроцитома, плеоморфная ксантоастроцитома, диффузнаяастроцитома, анапластическая астроцитома, глиобластома (гигантоклеточная глиобластома иглиосаркома) и глиоматоз головного мозга [18].Среди олигоастроцитарных опухолей выделяют олигоастроцитому и анапластическуюолигоастроцитому.

Среди олигодендроглиальных опухолей выделяют олигодендроглиому ианапластическую олигодендроглиому. К эпендимальным опухолям относят эпендимому,субэпендимому, миксопапиллярную эпендимому и анапластическую эпендимому [18].Опухоли головного мозга классифицируются по четырем степеням злокачественности.Степень злокачественности является ключевым фактором при выборе стратегии лечения и приопределении прогноза заболевания [18, 20].К 1-ой степени относят как правило доброкачественные новообразования с низкойпролиферативной активностью. Достаточной стратегией лечения является хирургическая11резекция.

К данным новообразованиям относят субэпендимальную гигантоклеточнуюастроцитому, пилоцитарную астроцитому, субэпендимому, миксопапиллярную эпендимому,ангиоцентрическую глиому и ганглиоглиому, табл. 1 [18].Ко 2-ой степени злокачественности относят заболевания с низкой пролиферативнойактивностью, для которых характерна клеточная атипия. Это такие опухоли, как диффузнаяастроцитома,пиломиксоиднаяастроцитома,плеоморфнаяксантоастроцитома,олигодендроглиома, олигоастроцитома, эпендимома и хордоидная глиома третьего желудочка.Заболевания второй степени злокачественности часто рецидивируют и способны переходить кследующейстепенизлокачественности.Такдиффузнаяастроцитомаможеттрансформироваться в анапластическую астроцитому и глиобластому. Трансформации могутнаблюдаться при олигодендроглиоме и олигоастроцитоме, табл.

1 [18].Для опухолей третьей степени злокачественности характерны клеточная анаплазия ивысокая пролиферативная активность. К данным опухолям относят анапластическуюастроцитому,анапластичекуюолигодендроглиому,анапластическуюолигоастроцитому,анапластическую эпендимому и анапластическую ганглиоглиому, табл. 1 [18].К 4-ой степени злокачественности относят наиболее агрессивные опухоли, для которыххарактерно обязательное наличие некроза и признаки предыдущих степеней злокачественности.Также может наблюдаться микрососудистая пролиферация и микропролиферация эндотелия. Ктаким опухолям относят гигантоклеточную глиобластому и глиосаркому, табл. 1 [18]. К 4-ойстепени злокачественности также относят и медуллобластому – эмбриональную опухоль,которая чаще встречается в детском возрасте. Чаще всего медуллобластома возникает в заднейчерепной ямке на уровне четвертого желудочка.

[4, 18].Биологическое поведение астробластомы варьирует, что не позволяет отнести данный типглиом к конкретной степени злокачественности [18, 19].Таблица 1. Классификация глиом по степеням злокачественности [18].ОпухольСтепень злокачественностиIIIАстроцитарные опухоли Субэпендимальная гигантоклеточная астроцитома* Пилоцитарная астроцитома* Диффузная астроцитома*IIIIV12 Пиломиксоидная астроцитома* Плеоморфная ксантоастроцитома* Анапластическая астроцитома* Гигантоклеточная глиобластома* Глиосаркома*Олигодендроглиальные опухоли Олигодендроглиома* Анапластическая олигодендроглиома*Олигоастроцитарные опухоли* Олигоастроцитома* Анапластическая олигоастроцитомаЭпендимальные опухоли Миксопапиллярная эпендимома* Субэпендимома** Эпендимома* Анапластическая эпендимомаДругие нейроэпителиальные опухоли Ангиоцентрическая глиома** Хордоидная глиома третьего желудочкаСмешанные нейронально-глиальные опухоли Ганглиоглиома Анапластическая ганглиоглиома**В 2016 году ВОЗ выпустила пересмотренное 4-ое издание классификации опухолейголовного мозга.