Диссертация (Структура и пероксидазная функция комплекса цитохрома c с кардиолипином в водной среде и в неполярном окружении)
Описание файла
Файл "Диссертация" внутри архива находится в папке "Структура и пероксидазная функция комплекса цитохрома c с кардиолипином в водной среде и в неполярном окружении". PDF-файл из архива "Структура и пероксидазная функция комплекса цитохрома c с кардиолипином в водной среде и в неполярном окружении", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "биология" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве РНИМУ им. Пирогова. Не смотря на прямую связь этого архива с РНИМУ им. Пирогова, его также можно найти и в других разделах. , а ещё этот архив представляет собой кандидатскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени кандидата биологических наук.
Просмотр PDF-файла онлайн
Текст из PDF
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ«МОСКОВСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМ.М.В.ЛОМОНОСОВА»ФАКУЛЬТЕТ ФУНДАМЕНТАЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫНа правах рукописиВладимиров Георгий КонстантиновичСТРУКТУРА И ПЕРОКСИДАЗНАЯ ФУНКЦИЯ КОМПЛЕКСАЦИТОХРОМА C С КАРДИОЛИПИНОМ В ВОДНОЙ СРЕДЕ И ВНЕПОЛЯРНОМ ОКРУЖЕНИИСпециальность 03.01.02 – БиофизикаДиссертация на соискание ученой степеникандидата биологических наукНаучный руководитель:академик РАН, проф., д. б. н.,Владимиров Юрий АндреевичМосква, 2018ОГЛАВЛЕНИЕСписок сокращений ................................................................................................ 61Введение.........................................................................................................
7Актуальность работы........................................................................ 7Цели и задачи .................................................................................... 8Теоретическая и практическая значимость работы ...................... 9Научная новизна работы ................................................................ 10Положения, выносимые на защиту ............................................... 10Личный вклад автора ......................................................................
11Апробация результатов исследования .......................................... 12Публикации ..................................................................................... 122Обзор литературы ....................................................................................... 132.1Апоптоз и липидная пероксидация ............................................... 132.1.1 Роль апоптоза в развитии болезней человека ....................
132.1.2 Апоптоз по митохондриальному пути ............................... 142.1.3 Липидная пероксидация и апоптоз ..................................... 152.1.4 Возможность активации апоптоза в раковых клетках ...... 152.1.5 Окислительный стресс ......................................................... 182.1.6 Действие продуктов ЛПО на мембраны.............................
212.2Структура комплекса цитохрома с с кардиолипином................. 222.2.1 Цитохром c ............................................................................ 222.2.2 Кардиолипин ......................................................................... 252.2.3 Взаимодействие цитохрома c с кардиолипином ............... 2722.2.4 Гипотезы о структуре комплекса Цит-КЛ ......................... 282.2.5 Получение Цит-КЛ в неполярной среде ............................ 342.3Пероксидазная функция комплекса Цит-КЛ ...............................
342.3.1 Комплекс Цит-КЛ как апоптоген ........................................ 392.4Активированная хемилюминесценция как метод изученияобразования свободных радикалов при ЛПО .............................. 402.4.1 Химические и физические активаторы ХЛ ........................ 402.4.2 Химические активаторы ...................................................... 402.4.3 Физические активаторы .......................................................
412.4.4 Изохинолизиновые кумарины ............................................. 413Материалы и методы исследования .......................................................... 453.1Реагенты ........................................................................................... 453.2Аппаратура ...................................................................................... 453.3Подготовка объектов исследования .............................................. 463.3.1 ПриготовлениекомплексаЦит-КЛвнеполярномрастворителе .......................................................................... 463.3.2 Приготовление изолированных митохондрий из печеникрыс ........................................................................................ 473.4Методы исследования структуры цитохрома c в комплексе скардиолипином................................................................................
483.4.1 Спектрофотометрическоеопределениесостоянияжелезосерных связей в ЦитС............................................... 483.4.2 Измерение спектров поглощения смеси для регистрацииХЛ пероксидазных реакций, катализируемых Цит-КЛ .... 493.4.3 Измерение спектров флуоресценции.................................. 5033.4.4 Методдинамическогосветорассеяниядляизученияразмера частиц комплекса Цит-КЛ .....................................
503.5Хемилюминесцентный анализ образования липидных радикаловкомплексом Цит-КЛ ....................................................................... 523.5.1 Окисление липидов, катализируемое комплексом Цит-КЛ,помещенным в неполярное окружение. ............................. 523.5.2 Окислениелипидоввмембранахмитохондрий,катализируемое комплексом Цит-КЛ ................................. 53Статистическая обработка данных .............................................................. 544Результаты исследований ...........................................................................
554.1Уточнение протоколов приготовления комплекса Цит-КЛ ....... 554.2Строение нанокомплекса Цит-КЛ в гидрофобном окружении.. 564.2.1 Размеры комплекса Цит-КЛ ................................................ 564.2.2 Конформация цитохрома с в комплексе Цит-КЛ .............. 624.2.3 Общее заключение по разделу ............................................ 674.3Механизмреакцийобразованиялипидныхрадикаловкомплексом Цит-КЛ .......................................................................
684.3.1 Метод кинетической активированной хемилюминесценциидля изучения реакций образования липопероксильныхрадикалов комплексом Цит-КЛ........................................... 684.3.2 Образование липопероксильных радикалов в реакциях,катализируемых комплексом Цит-КЛ ................................
794.3.3 Изучениемеханизмацитотоксическогодействиякомплекса Цит-КЛ на раковые клетки ............................... 845Обсуждение результатов ............................................................................ 8745.1Комплекс Цит-КЛ в разбавленных водных растворах и внеполярной среде имеет тот же стехиометрический коэффициентлипид:белок, что и в микрокристаллическом осадке.................. 875.2Размеры наносфер Цит-КЛ в неполярном растворителе менееоднородны, чем в микрокристаллах, но имеют те же средниевеличины .......................................................................................... 885.3В наносферах Цит-КЛ ЦитС имеет конформацию частичнорасплавленной глобулы..................................................................
915.4Образование наносфер Цит-КЛ происходит по принципу «всеили ничего»...................................................................................... 935.5Строение комплекса Цит-КЛ в гидрофобном растворителе и вмикрокристаллах Цит-КЛ совершенно одинаковы ..................... 955.6Реакцииокислениялипидовсобразованиемсвободныхрадикалов в присутствии раствора Цит-КЛ идут по механизмупероксидазного цикла..................................................................... 965.7Возможно и перспективно применение комплекса Цит-КЛ вкачестве действующего противоракового средства нового типа........................................................................................................... 986Выводы ....................................................................................................... 1017Список цитируемой литературы .............................................................
1045СПИСОК СОКРАЩЕНИЙАФК – активные формы кислорода;БКЛ – кардиолипин, выделенный из сердца быка;ДСР – динамическое светорассеяниеКЛ – кардиолипин;ЛПО – липидная пероксидацияМУР – малоугловое рассеяние рентгеновских лучейПНЖК – полиненасыщенные жирные кислотыПО – программное обеспечениеПОЛ – перекисное окисление липидов;ПХ – пероксидаза из корней хрена;ТОКЛ – 1,1',2,2'-тетраолеилкардиолипин;ФБ – фосфатный буферный раствор;ХЛ – хемилюминесценция;Цит-КЛ – комплекс цитохрома с с кардиолипином;ЦитC – цитохром с;ЭПР – электронный парамагнитный резонанс;ЯМР – ядерный магнитный резонанс;CAS – спектрофотометрическое титрование;TLS – спектроскопическое титрование с термической линзой>Fe∙∙∙S(Met80) – связь между гемовым железом и серой метионина,находящегося в 80-м положении61ВВЕДЕНИЕАктуальность работыАпоптоз – запрограммированная смерть клетки, один из важных процессоввмногоклеточныхорганизмах,необходимыйдляподдержанияжизнедеятельности тканей на всех этапах развития организма.
