Диссертация (Особенности иммунитета у недоношенных новорожденных детей с респираторными нарушениями инфекционного и неинфекционного генеза), страница 2

Определить фенотип фагоцитарных клеток по экспрессии поверхностныхрецепторов к ростовым факторам (CD114, CD116) и опсонинам (CD11b, CD16,CD64),патоген-распознающихрецепторов(TLR2,TLR4),антиген-презентирующей молекулы HLA-DR в пуповинной и периферической крови7недоношенных детей без признаков инфекции или с врожденной пневмонией, всравнении со здоровыми доношенными новорожденными.2. Оценить интенсивность фагоцитоза, зимозан-индуцированной и РМАиндуцированной продукции активных форм кислорода клетками цельной кровиноворожденных детей с учетом их гестационного возраста и генеза дыхательныхнарушений.3. Охарактеризоватьноворожденныхдетейсубпопуляционныйисследуемыхсоставгруппилимфоцитовопределитьвкровиинтенсивностьэкспрессии рецепторов к ростовым факторам (CD267, CD268) на В-клетках.4. Определить содержание иммуноглобулинов классов G и M в плазме кровиздоровых доношенных новорожденных, недоношенных детей с врожденнойпневмонией и без таковой.5.

Оценитьуровеньпровоспалительных(IL-6,IFNγ,TNFαидр.),противовоспалительных (IL-4, IL-10 и др.) цитокинов, хемокинов (IL-8, IP-10 идр.) и ростовых факторов (G-CSF, GM-CSF, VEGF и др.) в плазме кровиноворожденных исследуемых групп.6. Выявить маркеры ранней диагностики внутриутробной пневмонии унедоношенных новорожденных детей.7. Сравнитьнедоношенныхпоказателидетейсврожденногодыхательнымииадаптивногонарушениямииммунитетауинфекционногоинеинфекционного генеза при рождении и на 3 сутки жизни.Научная новизнаНа основании фенотипического анализа клеток врожденной и адаптивнойиммунной системы, определения функциональной активности фагоцитов,секреторной активности продуцирующих цитокины клеток иммунной системыпроведена комплексная оценка степени дифференцировки и функциональнойактивности иммунных клеток у новорожденных в зависимости от гестационноговозрастаиналичияОхарактеризованилифенотипотсутствияуВ-лимфоцитовнихуврожденнойздоровыхпневмонии.доношенных8новорожденныхинедоношенныхдетейсдыхательныминарушениямиинфекционного и неинфекционного генеза.

Выявлены особенности иммунитета унедоношенныхноворожденных:низкаяфагоцитарнаяибактерициднаяактивность клеток врожденного иммунитета, повышенное содержание незрелыхCD19+CD27–IgM+IgD– В-клеток и CD19+CD5+ В1 лимфоцитов на фоне низкогоколичества CD27+ В-лимфоцитов памяти, среди которых преобладают клетки, вкоторых не произошло переключения классов иммуноглобулинов, – что можетобусловливать высокий риск развития у них инфекционно-воспалительныхзаболеваний.Впервые при сравнительной оценке фенотипа и функциональных свойствфагоцитов и лимфоцитов пуповинной и периферической венозной кровинедоношенных новорожденных установлено, что течение процесса раннейнеонатальной адаптации у преждевременно родившихся детей без признаковинфекции сопровождается повышением патоген-распознающего потенциалафагоцитов, содержания Т-клеток, в том числе Т-хелперных и Т-регуляторных, ихемокинов IL-8 и IP-10 в плазме крови, снижением количества В-лимфоцитов.

Нафоне течения врожденной пневмонии к 3 суткам жизни в крови недоношенныхдетей существенно снижается концентрация провоспалительных (IL-1b, IL-6, IL12, IFNγ, TNFα), противовоспалительных (IL-4, IL-13) цитокинов и ростовыхфакторов (GM-CSF, VEGF, FGF-basic, PDGF-bb), возрастает интенсивностьпродукции активных форм кислорода фагоцитами, происходит усилениеэкспрессии рецептора Fas/APO-1 на лимфоцитах, увеличивается содержание«непереключенных» В-клеток памяти с фенотипом CD19+CD27+IgM+IgD+.Практическая значимостьНа основании результатов исследования пуповинной крови здоровыхдоношенных новорожденных определены референсные значения поглотительнойспособности и интенсивности оксидативного взрыва фагоцитов, содержаниясубпопуляций клеток врожденного и адаптивного иммунитета и экспрессии наних поверхностных рецепторов.9Показано,чтометододновременногоопределенияинтенсивностиэкспрессии CD64 на нейтрофильных гранулоцитах и зимозан-индуцированнойпродукции активных форм кислорода фагоцитами пуповинной крови обладаетвысокой чувствительностью (75%), специфичностью (80%), положительной иотрицательной прогностической значимостью (85,7% и 66,7% соответственно)длядифференциальнойдиагностикигенезадыхательныхнарушенийунедоношенного ребенка при рождении, а значение площади под кривой, равное0,800, позволяет использовать данный метод в клинической практике.Положения, выносимые на защиту1.

У недоношенных новорожденных детей по сравнению со здоровымидоношенными отмечается низкая функциональная активность нейтрофильныхгранулоцитов и моноцитов, недостаточность гуморального звена иммунитета,преобладание незрелых В-клеток и В1 лимфоцитов. Субпопуляционный состав Тлимфоцитов и содержание плазменных хемокинов, провоспалительных ипротивовоспалительныхцитокиноввпуповиннойкровинезависятотгестационного возраста.2.

У недоношенных детей с врожденной пневмонией обнаруживаютсяпризнаки системной воспалительной реакции, что выражается в активацииклеточного звена врожденного иммунитета и более высоком содержаниихемокинов, провоспалительных и противовоспалительных цитокинов в плазмепуповинной крови.3. Течение процесса ранней неонатальной адаптации у недоношенных детейбез признаков врожденной инфекции сопровождается повышением патогенраспознающего потенциала фагоцитов, усилением секреторной активностипродуцирующих цитокины иммунных клеток и увеличением числа Т-лимфоцитовв крови. У детей с врожденной пневмонией к 3-м суткам жизни снижаетсясодержание цитокинов в плазме крови, возрастает интенсивность продукцииактивных форм кислорода фагоцитами, повышается содержание В-клеток памяти,в которых не произошло переключения классов иммуноглобулинов.10Соответствие диссертации паспорту специальностиНаучные положения и результаты диссертации соответствуют формуле иобласти исследований специальности 14.03.09 – «клиническая иммунология,аллергология».Личный вклад автораАвтор непосредственно участвовал в выборе направления диссертационногоисследования.

Основной объем лабораторных исследований, формированиеэлектронных баз данных, статистическая обработка результатов, анализ иобобщение материала выполнены автором лично.Апробация работыДиссертационная работа обсуждена на заседании апробационной комиссииФГБУ «НМИЦ АГП им. В.И. Кулакова» Минздрава России.

Материалыдиссертационной работы представлены на 18-й Международной Пущинскойшколе-конференции молодых ученых «Биология – наука XXI века» (Пущино,2014), 14th International Symposium for Immunology of Reproduction "Progress InReproductive Immunology" (Варна, 2015), VIII Всероссийском образовательномконгрессе «Анестезия и реанимация в акушерстве и неонатологии» (Москва,2015), XVI Всероссийском научном форуме с международным участием имениакадемика В.И.

Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (СанктПетербург, 2017).Внедрение результатов работыПо теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, 6 из которых – визданиях, рекомендованных ВАК РФ для публикации материалов диссертаций насоискание ученой степени кандидата и доктора наук.Результаты диссертационного исследования внедрены в клиническуюработу отделения реанимации и интенсивной терапии новорожденных отделанеонатологии и педиатрии ФГБУ «НМИЦ АГП им.

В.И. Кулакова» Минздрава11Россииивпрограммулекцийкафедрынеонатологиифакультетадополнительного профессионального образования ФГБОУ ВО «РНИМУ им. Н.И.Пирогова» Минздрава России.Объем и структура диссертацииТекст диссертации изложен на 131 странице печатного текста, состоит извведения, обзора литературы, описания материала и методов, полученныхрезультатов, их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы,включающего 160 литературных источников, в том числе 44 на русском и 116 наанглийском языках.

Диссертация содержит 9 таблиц и 18 рисунков.12Глава I. Обзор литературы1.1.Особенности иммунной системы новорожденных детейПри физиологически протекающей беременности внутриутробное развитиеплода происходит в условиях низкой антигенной стимуляции, поэтому иммуннаясистема здоровых доношенных новорожденных во многом отличается отиммунной системы взрослых. Несмотря на то, что состояние неонатальнойиммунной системы не является иммунодефицитным, существующие механизмынаправленынасдерживаниеизбыточногоипостепенноеформированиенормергического иммунного ответа, в период внутриутробного развитиясупрессорная направленность иммунных реакций предотвращает развитиеиммунологического конфликта в системе «мать-плод».

У новорожденныхослаблены основные механизмы неспецифической защиты организма отпатогенных бактерий и вирусов, процесс антителообразования и цитотоксическиереакции Т-клеток. Данные особенности неонатальной иммунной системы делаютноворожденных чувствительными к развитию инфекционных заболеваний.Поскольку онтогенез иммунной системы коррелирует с гестационным возрастомплода, иммунная система недоношенных детей характеризуется количественными качественным дефицитом факторов врожденного и адаптивного иммунитета посравнению с детьми, родившимися в срок. Поэтому у недоношенныхноворожденныхчаще,чемудоношенных,отмечаетсягенерализацияинфекционного процесса, развивается сепсис [107].Несмотря на непрерывное совершенствование медицинских технологий,частота преждевременных родов (ПР) на сроке 22-36 полных недель гестации вразвитых странах находится в диапазоне 5% – 9% от общего числародоразрешений.

Показаниями к досрочному родоразрешению могут бытьосложнениябеременности,преэклампсия/эклампсия,внутрипеченочныйплацентыиплацентарнаяхолестаздругие)угрожающиеилижизниматеринедостаточность,беременных,значительноесахарныйHELLP-сндром,диабет,ухудшение(тяжелаяпредлежаниесостоянияплода.13РаспространеннойпричинойсамопроизвольныхПРявляетсяналичиеинфекционно-воспалительных заболеваний мочеполовой системы у беременнойженщины [27,72]. Дети, родившиеся раньше срока, часто имеют выраженныепризнаки морфофункциональной незрелости, предрасполагающие к нарушениюпроцессов ранней неонатальной адаптации [22]. Тяжесть осложнений, связанныхс недоношенностью, пропорциональна гестационному сроку, на которомпроизошли ПР.