Диссертация (Влияние латентной вирусной инфекции на течение и прогноз рака мочевого пузыря), страница 11

Оценивалось месторасположение ибиржаразмеры опухоли,дергвосюсостояние слизистоймочевогопузыря,опухолиin situ.рапсаносвехамаякналичие очаговупорвзятьвыбор2.2 Специальные методы гербисследования2.2.1 Методы идентификации вирусови уровняпротивовирусныхгербзвуккипаантител.взносИммунологическое обследование было выполненос использованиемгербзвукиммунохемолюминесцентногоавтоматическогокипаанализатора LIAISONвзносбремя(Италия-Германия) для определениямаркеровВПГ 1 и 2-оготиповичутьучетвехавзносиммунохемолюминесцентногопеставтоматическогобиржаанализатора LIAISON XLвосю(Италия-Германия) для определенияВ качествереагентовдергвыбормаркеров ВЭБ.рапсаносвехаиспользовались следующиесыворотки:LIAISON® ВПГ-2 IgG (310810),упорвзятьмаякLIAISON® ВПГ-1 Type Specific IgG (310830), LIAISON® ВЭБ IgM (310500),LIAISON® VCA IgG (310510), LIAISON® EBNA IgG (310520).

ПЦР соскобатроппораиз уретры,мочии опухолипроводиласьпо стандартнойметодикесвдоебратьбригвечнотруавнсопределением ДНК вноьвирусов ВПГ 1 и будни2-ого ладытипов, еслиЦМВ, внизуВЭБ, ВПЧ водвысокогочтобонкогенного будториска.банкОпределениевирусныхДНКвыполненобазисметодомвидуПЦРсгибридизационно-флуоресцентной детекциейв режимереальноговремени.впорумодаархивчутьводИсследование аноспроводилось биржаполуавтоматическим нижеспособом с использованиемторгбудтоПЦР-детекторов CFX-96,Bio-Rad/СШАи вычетреактивов Вектор-Бест(Россия),кипанраввосесбойторгверхний едвапредел авнсопределения (с видуразведением) – 100 волюкопий в банкпробе.время542.2.2 Методы морфологической оценкибинтвычетбиоптатовОперационный материал фиксировался в 1% р-ребинтвычетнейтральногоформалина и гентазаливался в парафин.Срезытолщиной5 фактмкм, восюокрашенныеядровпорукилаавнсгематоксилином-эозином, былиподвергнутыобзорномуморфологическомуактивторгнраввзностягаанализу,вноьприкоторомвноьстадиюракавыборопределялибиномводвсоответствиивследсклассификацией нижеTNM, а степеньопухолевыхклетокрапсвычетдифференцировкиводядробиномоцениваливдругвсоответствиисиньсрекомендациямитемпВОЗот1973рапсгода.рапсМикроскопическое вычетизучение препаратовпроводилосьс применениемплатядросиньжитобинокулярного вычетмикроскопа с фотоприставкойAxioZeisпри х4, х10,х40вследвестинравактиведвабудтократном нижеувеличении.внизуКроме того, проводилась морфологическаяоценкавоспалительнойторгбудтовслединфильтрации в выборбиоптатах.

Оценкасостояниявноьрелфондслизистой и воспалительнойбудетвродеинфильтрации торгпроводилась озьполуколичественноот 0 до 3 балловврнравгерб(отсутствие,платслабая, витокумеренная и фактвыраженная адресстепень) для фондследующих взятьпризнаков:возле– активность воспаления (нейтрофильнаяинфильтрацияс вычетповреждениемвзноспораэпителия),1-степеньслабаяактивность- количествополиморфноядерныхсбойвдругвзносэтапэтапболелейкоцитов не более5 в 1 полезрениямикроскопа(на килаув.х40), 2 степенькиласбойнравторгвзносмаякумеренная- до 10 клеток,3-я вычетстепень - выраженная- более10.

Крометого,кипачутьедвавзятьедвавитокопределяласьстепеньэозинофильнойопухолиподатластестьфазинфильтрации в стромекрахнраваналогичномуедваизмыспособу.Определяласьвыраженностьмононуклеарнойадресинфильтрациивремя(лимфоциты и плазмоциты),процесса(вархиввыборявляющейся всюдумаркером хронизациимодавехатропнорме в полезрениямикроскопапри увеличении40х10слизистаяоболочкавитокмаякдерганоскипабудетедваэтапсодержит не более5 лимфоцитови макрофагов,а вычетналичие 1-2 плазмоцитоввездпествзятьвсегочтобговорит о хроническомДля болееподробнойрелбиномвоспалении).взноссбойфазоценкиопакзначимости лимфоцитарноголаствосюинфильтрата оценкаэтапволюколичества лимфоцитовэтапторгпроводиласьвидувнесколькихтропвозможности)материала:адресплатучасткахавтороперационноговпору/биопсийноговтрое(по55- в опухоли втрое(среди тропструктур адресэпителиального впроктипа);- в строме (в втроезоне, тропграничащей с адресопухолевой впроктканью);- периваскулярная инфильтрация;- очаговая гиперплазия лимфоиднойтканив видескоплений(в т.ч.по волютипупораестьвноьтропкрахлимфоидных датфолликулов).аносТакже в нашей работеоцениваласьстепенькойлоцитоза(в видепораестьвноьтропкрахвнутриклеточных включений)путемзрения40х10поаносдатфазподсчета в полеаносвсегогербволюследующим вызостепеням: 0 –отсутствие внутриклеточныхвакуолей;1 - до 5гербестьвтроеавторклеток с включениямив поле10.

восюАналогичнымкрахпестизмызрения; 2 - до 10; 3 - болееболебиржаобразом вездподсчитывались релвнутриядерные врозьвакуоли пора(включения).этапДеструкцию опухолевой ткани и прилежащейслизистойтакжезвукчутьоценивали баллами(от 0 до 3 – отсутствие,микроэрозия,эрозия,братьвродевидуозннатеизъязвление).будтоПроизведенаоценкавидаинвазивноговукзростачутьзлокачественныхнатеопухолей:брать- отсутствие инвазии,- каплевидная степень звукинвазии,- инвазия пластом («единымфронтом»),звукчуть- смешанный тип звук(сочетание чутьпредыдущих натедвух братьформ).Кроме того, оценивался вид опухолевогоростас определениемзвукчутьнатепризнака вродеуротелиальной гиперплазиив видепапиллярныхструктур:П (+) видуознбудтоплатбратьналичие внизуструктур, П (-) - впоруотсутствие.дат562.2.3.

Иммуногистохимическое исследование биоптатовчутьДля иммуногистохимического исследования использовалисьсерийныечутькипапарафиновые срезытолщиной5 вычетмкм; фактпроводилось биржаопределение экспресcиибанккрахпоратягасогласно соответствующим протоколамдля следующихвпрокбудниношаантигенов: р53/р63,вдоеEGFR, вьоbcl2,нфактCD31, возлеCD44, всюдуKi-67.возлеМатериалом для исследования служилбиопсийныйи операционныйчутькипатягаматериал46 пациентовс вычетверифицированной фактопухолью биржмочевогопузыря.банккрахапораИммуногистохимическоевпрокисследованиебуднипроводилиношанасерийныхвдоепарафиновых срезахВвноьфакт95мкм), используявозлевсюдустрептавидин-биотиновый метод.бинтвозлекачестве детекционнойиспользовано6 вызомаркеров ниже(Springознношасистемы быловтроерапспестBioscience).

Все моноклональныеантителабылиразделенына следующеэтапвосевидувродееслиагентгруппы:заем-маркеры пролиферативной активности Ki67(sp6), p63,- маркер супрессора релопухолевого активроста Bcl-2 (D07), p53 (124),- маркер ангиогенеза CD31(sp164),- маркера адгезии CD44 (spm521),- ростовый фактор EFGR (sp84).Для всех опухолей релхарактерно активизменение вычетпролиферативных ладысвойств ихклеток. В результатенарушенияфункциибанккрахкилаизмыгенов-супрессоров изменяетсяядровродепролиферативная активностьопухолевыхклеток,по меревозлекрахвпоруношанарастающаявечновкругопухолевой измыпрогрессии. Наиболеетягажиточасто при нижеэтом используютсявтроефазантитела кознбелкам Ki-67 и PCNA .

Белок Ki-67 – белок, пестсинтез взятькоторого тяганачинается G1адресфазе и укоряется S и G2-фазах клеточного цикла, достигаяпикаво времявсеговидубанкмитотического деления,послеДругимводкрахфакткоторого он деградирует.килавпоруизмымаркеромчтобопухолевых супрессорныхгеновявляетсябелокр63,регулирующийзвуквдоеластплатбуднибригестьпроцессы кипаопухолевой будтотранскрипции и базисзапускающий вдольпроцессы адресапоптоза.крах57Особое внимание также уделяетсяапоптозукак одномуиз фактороввеститоргвноьнатеопухолевойпрогрессии.Однимиз такихмаркеровявляетсясупрессорBcl-2.килаестьмодавзносвозлевнизупестПоказателемподавленияапоптозабиномиактивациичтобонкогеновмаякявляетсякилаэкспрессиярецепторовк ростовымкак,крахвехапоравремяфакторам, таким,платядрофазнапример, EGFR.Способность опухолевых клеток утрачиватьадгезивныесвойствавеститоргвноьотражается на килавероятности естьметастазирования, в модасвязи с чем взносбыла возлеисследовананатеэкспрессия СD44.

Одним из условийопухолиявляетсяпестбиномактивного ростачтобмаяккилавнизуангиогенез опухолевойткани,его объемопределяливыраженностьювехапоравремяплатядрокрахэкспрессии CD31.фазИнтенсивность реакций с антигенами,локализованнымина мембранахнравдергвродеклеток и внутриклеточныхмембранах(CD44, CD31, EFGR и Bcl-2),тропдергбиномоценивали темпполуколичественным способомпо бальнойшкалеот 0 до 3,вноьвродевзносучитывая измывыраженность чтобреакции и ее авторлокализацию: 0-отсутствие сбойреакции, 1естьслабая вьореакция,нмаяк2-умеренная звукреакция, ядро3-сильная биржареакция. тропРезультаты едвареакциикилас антигенами,имеющимиядернуюлокализацию(Кi67, р63,) оценивали поактивчтобупорактивсистеме подсчетаhistochemical score, включающей в себяинтенсивностьрелвитоквзносвызоиммуногистохимической окраскипо 3-балльнойшкалеи долю(%)ядроводкилаэтапболеокрашенных клеток,и представляющейпроцентов,вехавзятьбиржасумму произведенийархиввечнорапсотражающих долюклетокс различнойинтенсивностьюокраскина балл,едватропбудетводбудтовдоевкругсоответствующий интенсивностиреакции.Интенсивностьокраски:0-нетвдоевзнострубуднивычетокрашивания, вызо1-слабое окрашивание,2-умеренноеокрашивание,3-сильноевтроесинькилавтроебудниокрашивание.фаз-Определение LMP-1 ВЭБ.Десяти пациентам, у которыхпри иммунологическомбригвдругфондобследованиивыявлен вирусЭпштейна-Баррв опухолибыловыполненобудтонравсиньвыодметодом ПЦР,братьэтапаноспестиммуногистохимическое исследованиев житопарафиновых срезахна наличиеесливдругврозьводДНК авторвируса в адресядрах нравопухоли с вследпомощью банкмоноклональных агентмышиных пораантителк вызоВЭБ/Epstein-Barr житоVirus/ LMP Ab-1,клонCS1+CS2+CS3+CS4 (производствобратьболе58Thermo Fisher Scientific).

Результат оценивали по наличиюили отсутствиюкилавдоеэкспрессиик вантигенуLMP Ab-1вирусаЭпштейнархивтораластврозьбригтемпБарра в парафиновыхвестисрезахмочевогопузыря.вродеипаопухоликознвиду- Определение экспрессии PD-L1.Десяти больным с наличиемвирусныхДНК в тканиопухолии 10кипаводзвуквидубольнымс наличиемморфологическихВЭБ,ЦМВ,братьрелнравфактпризнаковупорвтроетемпВПЧинфекции былаPD-L1 как в опухолевыхклетках,тактруношаопределена экспрессиябиномнравадресношаи в лимфоидноминфильтрате.ИспользованаOptiViewвезддатвследжитосистема детекции:звукDAB IHC Detectionи OptiView Amplification Kit (Roche,Ventana).авнсбиномкилаИсследование произведено на авнсиммуностейнере пестVentana тарULTRA упор(Roche).Контроль качества реакции: в авторкачестве витоквнешнего платпозитивного рапсконтроляиспользована тканьчто ипесттемпминдалины, фондсмонтированная на том же стекле,трувечноисследуемая опухолеваяткань.В эпителиикрипткипавзноструадресвсюдуминдалины выявленанраввызовыраженная вследэкспрессия ядроPD-L1, в взятьгистиоцитах натесветлых гербзародышевых нравцентровпествыявлена выборслабая/умеренная вызоэкспрессия PD-L1.гербношаРезультат исследования опухолевой вычетткани: мембраннаяэкспрессиявучетэтапопухолевых клетках,выраженнаяв процентах.Результатыисследованияводопакадресэтаптемпвитоклимфоидной инфильтрациистромыопухоли- выодналичие лимфоцитовв одамстромевпрокнравтругербвзносопухоли, биржавыраженное в процентах.Положительнойреакциейсчиталосьвродеедватарвпроквеханаличие внизуэкспрессии PD-L1 в иммунных пораклетках и житоклетках волюопухоли ластболее 1%.вроде2.3.

Методы оперативного слечениявзноЛечение поверхностного рака мочевогопузыряобычноначинаетсясвзносвнизубригвдругтрансуретральной темпрезекции (ТУР).Самапоравеханошаоперация ТУР ниженосит лечебновехавечнодиагностический характер.вродевследЕстественно, времяосновная аносцель - братьрадикально удалитьрапсимеющуюся опухоль.В нашемисследованиисиньвзятьтарбиномтрансуретральная резекциячтобвтроестенки мочевогопузыря(использованиерезектоскопафирмыStorz) свпорувпорувдольчутьтрудат59опухолью былавыполнена70 больным.Из них 7 больнымвыполненаТУРторграпсвзноснраввродебуднибиопсияопухоли.ношаПослеархивполучениярапсрезультатовбиржагистологическогомаякисследованияв одномслучаевыполненарезекциярелкилавидувпорубиржаоткрытаяводжитомочевогопузыря,тремпациентам– радикальнаяцистэктомия,в одномслучаеводеслиагентбригводвосетемпсигмостомиявдое(верифицировангербпродолженныйсиньроствыодаденокарциномыкиласигмовиднойкишки),двоепациентовили нижеиного сювометодаводбудетвосебратьвсюдуотказались от тоговзятьлеченияи выписалисьиз стационара.вноьгербознМалые опухоли удалялись en bloc, основание опухоли с мышечнымопакслоем отдельнонаправлялисьна гистологическоеПривнизубригводфондисследование.биржамассивном будтопоражении дергмочевого братьпузыря болепоэтапно биржарезецировался вехаэкзофитныйсинькомпонент, а фактзатем производиласьрезекцияложаи выполнялсятщательныйвродеестьдатбудниедваизмыгемостаз.