Автореферат (Блокаторы медленных кальциевых каналов новые возможности использования в качестве регуляторов образования соединительной ткани), страница 2

Следует учитывать, что БМКК - большая и достаточнонеоднородная по химической структуре группа лекарственных средств, включающаявысокоспецифичныефенилалкиламина,прениламина,вотношениибензотиазепина,дифенилпиперазины)медленныхкальциевыхдигидропиридина)препараты,иканалов(производныенеспецифичные(производныесущественноразличающиесяфармакокинетическим параметрам и фармакодинамическим свойствам.поВероятно, БМККразных химических групп обладают разной активностью в отношении регуляции формированиясоединительной ткани. Данные о влияние разных БМКК на процессы фиброгенеза при спайко5и рубцовообразовании немногочисленны, противоречивы и требуют дальнейших исследований(Ishii N., 2012; Kawamura A. с соавт., 2014; Ohya S.

с соавт., 2016).Все выше изложенное явилось основанием для проведения исследований действияБМКК на формирование соединительной ткани при спайко- и рубцовообразовании (от созданияадекватной экспериментальной модели патологического процесса до выявления механизмовдействия БМКК на молекулярном, клеточном, органном и организменном уровнях, сопределением наиболее эффективного препарата, дозового режима и способов его введения), атакже возможности использования вновь выявленных свойств лекарственных средств группыБМКК для более рационального их применения, создания новых лекарственных форм.Цель исследованияВыявить закономерности и особенности фармакодинамики блокаторов медленныхкальциевых каналов в качестве регуляторов образования соединительной ткани при спаечномпроцессе в брюшной полости и формировании патологических кожных рубцов.

Разработатьоптимальный состави технологию оригинальногоантирубцового крема с верапамилом,обосновать его эффективность и безопасность.Задачи исследования1.Для проведения фармакодинамических исследований на крысах и кроликахсоздать модель перитонеального спайкообразования, провести мониторинг спаечного процессаи разрастания соединительной ткани в брюшной полости с определением функциональнойактивности фибробластов и макрофагов.2.Изучить дозозависимое влияние БМКК нифедипина, дилтиазема и верапамилана пролиферативную и анаболическую активность перитонеальных фибробластов и макрофаговкрыс с использованием клеточных технологий.3.Исследовать экспрессию транскрипционного фактора NF-κB в перитонеальных идермальных фибробластах и влияниеБМККнифедипина, дилтиазема и верапамила намолекулярные механизмы регуляции активности разных типов фибробластов.4.Среди исследуемых БМКК определить наиболее эффективный препарат дляпредотвращения избыточного фиброгенеза; обосновать дозовый режим его внутрибрюшинноговведения крысам, оптимальный для профилактики образования спаек при минимальнойвыраженности или отсутствии кардио- и гемодинамических эффектов5.Изучить влияние верапамила на распространенность спаечного процесса вбрюшной полости крыс и кроликов, морфологические характеристики спаек, биохимическиепоказатели и цитокиновый профиль перитонеальной жидкости.66.Разработать новую лекарственную форму – антирубцовый крем с верапамилом,обосновать выбор компонентов для противорубцовой композиции, провести технологическиеисследования по разработке оптимального состава крема.7.Экспериментально обосновать эффективность и безопасность применениеантирубцового крема с верапамилом для профилактики и лечения патологических кожныхрубцов.Научная новизнаВпервыесиспользованиемкомплексногоиразноуровневого(молекулярный,клеточный и организменный уровень) подхода на адекватной экспериментальной моделиобразования спаек в брюшной полости (патент 2260854 РФ) in vivo (крысы, кролики) и in vitro(первичная культура перитонеальных фибробластов крыс с гемоперитонеумом и перевиваемойкультуре дермальных фибробластов человека, производства Axol Bioscience), а также на моделиформирования патологических рубцов кожи доказано наличие у широко используемых вкардиологии лекарственных средств БМКК способности регулировать избыточное образованиесоединительной ткани при перитонеальном спайкообразовании и посттравматическомформировании келоидных и гипертрофических кожных рубцов.Показано, что моделирование гемоперитонеума приводит к образованию в брюшнойполости экспериментальных животных множественных соединительнотканных спаек ивызывает как in vitro, так и in vivo повышение (в среднем 6 – 10-кратное) пролиферативнойактивности фибробластов, их коллагенсинтетической функции, продукции гиалуроновойкислоты,усиливаетфункциональнуюактивностьмакрофагов,увеличиваятемпыихтрансформации из моноцитов, синтез провоспалительных цитокинов TNF- и IL-1.Изучение in vitro на первичных культурах перитонеальныхфибробластов крыспозволило установить факт прямого воздействия БМКК верапамила и дилтиазема наморфофункциональное состояние фибробластов и макрофагов.

Показано, что в основепредотвращения избыточного роста соединительной ткани верапамилом или дилтиаземомлежит снижение чрезмерной при гемоперитонеуме пролиферативной активности фибробластовимакрофагов,активностиядерногофакторатранскрипцииNF-κB,приводящегокингибированию процессов апоптоза, торможение продукции оксипролина и гиалуроновойкислоты,провоспалительных цитокинов.

Выявлена дозовая зависимость установленногоэффекта: наибольшей фармакологической активностью обладал верапамил в концентрации0,0001 мл-1. Нормализующий эффект верапамила оказался более значимым (в среднем на 35,5%,р<0,05), чем у дилтиазема в той же концентрации. Нифедипин фармакологической активностив отношении перитонеальных фибробластов и макрофагов не демонстрировал.7Впервыеустановлено,чтонезависимооттипакультивируемыхклеток(перитонеальные фибробласты крыс или дермальные фибробласты человека) под действиемБМКК происходят однотипные изменения молекулярных механизмов их активации –ингибирование ядерного фактора транскрипции NF-κB.

Наличие у верапамила угнетающеговлияния на NF-kB объясняет универсальность его антипролиферативного действия вотношениифибробластоввсоставесоединительнотканныхобразованийразличнойлокализации.In vivo, в экспериментах по изучению фармакодинамики верапамила, подтвержденадоказанная in vitro эффективность лекарственной модуляции функций перитонеальныхфибробластов и клеток их микроокружения.тела)верапамиладляУстановлена оптимальная доза (0,1 мг/ кг массывнутрибрюшинноговведения,оказывающаявыраженныйфармакологический эффект в отношении избыточной продукции соединительной ткани,пролиферативной и анаболической активности перитонеальных фибробластов и макрофагов ине вызывающая значимых изменений кардио- и гемодинамики.Патогенетически обоснована целесообразность использования верапамила как средствапрофилактики и лечения спаечной болезни и гипертрофических и келоидных рубцов кожи.Доказанная оптимизация функций фибробластов и образования соединительной ткани поддействием верапамилапутем влиянияна кальциевый обмен, а также универсальностьдействия БМКК на молекулярные механизмы регуляции перитонеальных ифибробластовдермальныхобосновывают разработку лекарственной формы верапамила накожногоприменения для профилактики и лечения патологических кожных рубцов.Разработан антирубцовый крем (патент 2290919 РФ), содержащий 0,25% растворверапамила, ланолин и вазелин, димексид при определенном количественном соотношениикомпонентов, обоснованном теоретически и подтвержденном стендовыми испытаниями.

Наоснованиирезультатовтехнологическихибиофармацевтическихисследованийбылосуществлен выбор оптимальной концентрации верапамила и предпочтительной основы крема,проведена оценкаантирубцового крема в качестве средства предупреждения избыточногофиброгенеза. При экспериментальном изучении динамики клинических, биомикроскопическихи морфологических изменений в патологических рубцах кожи установлена эффективностькрема, содержащего верапамил, при щадящем, безболезненномспособе его применения.Клинический эффект проявлялся формированием физиологического рубца, уменьшениемплощади рубцовой поверхности, изменением цвета рубца, исчезновением болевых ощущений.Морфологическим и биомикроскопическим методами доказан факт более раннего структурногосозревания рубца без гипертрофии. С использованием данного способа фармакологического8воздействия удалось контролировать процесс избыточного рубцевания, добиться оптимальныхморфологических, функциональных и косметических результатов.Теоретическая и практическая значимость работыРабота носит фундаментальный и прикладной характер.

В результате проведенныхисследований определены новые свойства широко используемых в кардиологии классическихБМККвотношениирегуляцииобразованиясоединительнойткани,изученыфармакодинамические характеристики, выявлен наиболее эффективный дляизбыточного фиброгенеза препарат – верапамил,ихрегуляциичто легло в основу создания новойлекарственной формы - антирубцового крема с оценкой эффективности его применения.Для изучения механизмов формирования перитонеальных спаек и исследованийлекарственных средств коррекции избыточного роста соединительной ткани созданаадекватнаяуниверсальная модель спайкообразованияна основе введения аутокрови вбрюшную полость разных видов животных (патент 2260854 РФ).Вразработанноймоделиспомощьюфармакологическая эффективность действияклеточныхтехнологийопределенаразличных групп БМКК: производныхфенилалкиламина (верапамил), бензотиазепина (дилтиазем), дигидропиридина (нифедипин) наобразование заместительной соединительной ткани путем регуляции функции основных клетоксоединительной ткани - фибробластов и клеток их микроокружения.Выявлено, что верапамил является наиболее эффективным препаратом для регуляцииизбыточногофиброгенезасуниверсальныммеханизмомдействиянаразныетипыфибробластов (перитонеальные фибробласты крысы и дермальные фибробласты человека).Обоснован дозовый режим (0,1 мг/ кг массы тела) внутрибрюшинного введения верапамила,оптимальныйдляпрофилактикиизбыточногоростасоединительнойтканиприспайкообразовании с отсутствием кардио- и гемодинамических эффектов.Разработана новая лекарственная форма верапамила для местного воздействия наформирующийся гипертрофический/келоидный рубец – антирубцовый крем (патент 2290919РФ).