Автореферат (Адаптивные свойства уропатогенных escherichia coli), страница 3

– к 7, Proteus spp. – к 11,Pseudomonas spp. – к 12, Morganella morganii – к 7 и Acinetobacter baumannii – к13 антибиотикам.Большинство выделенных штаммов E. coli были чувствительны книтрофурантоину и тобрамицину, однако остальные антимикробные препаратыбыли малоэффективны в отношении данного возбудителя.Среди выделенных штаммов Klebsiella spp.

60,7% были чувствительны книтрофурантоину, а в отношении остальных исследованных антимикробныхпрепаратов большинство выделенных штаммов были устойчивы.10ВотношенииEnterobacterspp.выявленаэффективностьнитрофурантоина для 65,2%, ципрофлоксацина и тобрамицина – для 52,2%штаммов.50% выделенных штаммов Proteus spp. были чувствительны кципрофлоксацину и тобрамицину, обнако в большинстве своем проявилиустойчивость к нитрофурантоину.В отношении штаммов Pseudomonas spp. наибольшая активность былаотмечена для ципрофлоксацина, к которому были чувствительны 66,7%выделенных микроорганизмов.Два из трех выделенных штаммов M. morganii были чувствительны кципрофлоксацину, тобрамицину и представителям цефалоспоринов–цефтазидиму, цефотаксиму и цефокситину. Выделенные штаммы A. baumanniiпроявили высокую устойчивость к большинству из исследованныхантимикробных препаратов.Таким образом, проведенный анализ спектра чувствительностивыделенных условно-патогенных бактерий позволил установить, чтобольшинство из них характеризуются множественной резистентностью кантибиотикам и антимикробным химиотерапевтическим препаратам.ВысокийуровеньустойчивостипредставителейсемействаEnterobacteriaceae к цефалоспоринам III поколения и к комбинированномупрепарату амоксиклаву позволил предположить наличие у данныхмикроорганизмов БЛРС.Определение наличия бета-лактамаз расширенного спектрау уропатогенных E.

coli по фенотипическим признакамПредварительная оценка позволила установить, что при ИМП вбольшинстве случаев от больных выделялись бактерии E. coli, в связи с этимБЛРС были определены для штаммов этих микроорганизмов. Первоначальныйскрининг устойчивости к цефалоспоринам показал, что 65 штаммов E. coli(58,5%) проявили устойчивость к цефтазидиму, который считается маркеромБЛРС.Использование метода «двойных дисков» показало, что из 111идентифицированных клинических штаммов E.

coli способностьюпродуцировать БЛРС обладал 51,4% изолятов (табл. 6).Полученные результаты свидетельствуют о невозможности использованиябета-лактамных антибиотиков группы пенициллинов и цефалоспоринов длялечения заболеваний, вызванных штаммами-продуцентами БЛРС.Таблица 6 – Частота индикации штаммов E. coli, продуцирующих БЛРСКоличествоКоличество штаммов E.

coli, продуцирующих БЛРС, абс. / %штаммовпервоначальныйфенотипический подтверждающийE. coli, абс. / %скринингтест111 / 10065 / 58,557 / 51,411Поскольку большинство выделенных от больных штаммов E. coliпроявили устойчивость к антибиотикам ряда цефалоспоринов, которые частоприменяются для лечения ИМП, представляло интерес определить спектрнаиболее эффективных препаратов в отношении продуцентов БЛРС. Былоустановлено, что выделенные клинические штаммы E. coli, продуцирующиеБЛРС, характеризуются различной степенью чувствительности к тестируемымантимикробным препаратам.

Наибольшая чувствительность этих штаммовбыла отмечена для антибиотиков ряда карбапенемов (имипенем),аминогликозидов (амикацин и тобрамицин) и представителя рядахимиотерапевтических препаратов группы нитрофуранов – нитрофурантоина(χ2 = 208,9; p < 0,05) (табл. 7).Таблица 7 – Спектр чувствительности к антимикробным препаратамE. coli, продуцирующих БЛРСКоличество штаммовГруппа антибиотиковКарбапенемНитрофуранСульфониламидХинолоны ифторхинолоныАминогликозидыПенициллиныЦефалоспориныАнтибиотикЧувствительныхабс.574416171257452133191415007IPMFSXTCIPNAAKTOBGMAMCPIPAMPFXCAZCTXCRO%100772830211007937583325260012Устойчивыхабс.0134140450123624384342575750%023727079021634267757410010088Таким образом, было установлено, что большинство штаммов E.

coli,выделенных от больных с признаками ИМП, согласно результатамфенотипического теста, характеризовались способностью к продукции БЛРС.Следовательно, для лечения заболеваний, вызванных штаммамипродуцентами БЛРС, необходимо учитывать антибиотикограмму, апрепаратами выбора могут быть антибиотики ряда карбапенемов иаминогликозидов, а также нитрофурановые препараты.12Определение генов устойчивости к антибиотикам с использованиемполимеразной цепной реакцииОпределение гена антибиотикорезистентности ctx-m проводили дляклинических штаммов уропатогенных E. coli, частота выделения которых отбольных с ИМП была самой высокой и для которых предварительнофенотипическим методом были определены БЛРС.

В качестве отрицательногоконтроля БЛРС использовали эталонный штамм E. coli АТСС 25922.Результаты генотипической детекции гена устойчивости к антибиотикам ctx-mприведены на рисунке 2.Рисунок 2 – Результаты ПЦР-анализа образцов ДНК клинических штаммов E. coliна наличие гена ctx-mБыло установлено, что ген ctx-m, кодирующий БЛРС, размер которогосоставлял 590 пар нуклеотидов, обнаруживался у 37 клинических штаммов E.coli (63%), для которых предварительно было установлено наличие данныхферментов фенотипическим методом (рис. 3). Тетрахорический коэффициентсопряженности составил 0,67 (при p < 0,05).48,6%63,2%51,4%36,8%БЛРС -БЛРС +ctx-m +ctx-m -Рисунок 3 – Результаты определения гена устойчивости ctx-m у клиническихштаммов E.

coliТакже представляло интерес исследовать наличие генетическихдетерминант, кодирующих устойчивость к аминогликозидам, т.к. для леченияИМП в клинической практике широко применяют антибиотики этой группы.В исследованиях использовали 23 клинических штамма E. coli, для которыхбыла установлена устойчивость к тобрамицину и гентамицину.

Результатыгенотипической детекции гена устойчивости к аминогликозиднымантибиотикам aac(3)-II представлены на рисунке 4. Было установлено, чточастота встречаемости гена aac(3)-II среди исследованных штаммов E. coliпревышала 78% (рис. 5). Тетрахорический коэффициент сопряженностисоставил 0,86 (при p < 0,05).Рисунок 4 – Результаты ПЦР-анализа образцов ДНК клинических штаммов E. coliна наличие гена aac(3)-II20,7%78,3%21,7%79,3%123Рисунок 5 – Результаты определения гена устойчивости aac(3)-II у клиническихштаммов E.

coli (1 – штаммы E. coli, чувствительные к тобрамицину и гентамицину,2 – штаммы E. coli, устойчивые к тобрамицину и гентамицину,3 – штаммы E. coli, имеющие ген aac(3)-II)Таким образом, полученные результаты позволили установить наличие вгеноме клинических штаммов E. coli детерминант резистентности кантимикробным препаратам, находящим широкое применение для леченияИМП – бета-лактамным и аминогликозидным антибиотикам.14Определение гена fimH у клинических штаммов E.

coli, выделенныхот больных с признаками инфекций мочевыводящих путейВ исследованиях использовали 111 клинических штаммов уропатогенныхE. coli, у которых с помощью ПЦР было определено наличие гена fimH,кодирующего синтез пилей I типа.Было установлено, что частота встречаемости гена fimH, размер которогосоставлял 446 пар нуклеотидов (рис. 6), среди UPEC была высокой и составила63% (рис. 7).Рисунок 6 – Результаты ПЦР-анализа образцов ДНК клинических штаммов E.

coliна наличие гена fimHfimH+63%fimH37%Рисунок 7 – Результаты определения гена fimH у клинических штаммов E. coliТаким образом, было установлено, что большинство клиническихштаммов E. coli, выделенных от больных с признаками ИМП,характеризовались наличием гена fimH, кодирующего пили I типа, которыеобладают высоким сродством к рецепторам клеток мочевыделительнойсистемы и необходимы для их распознавания, присоединения и колонизацииуропатогенными бактериями.Изучение адгезивной активности штаммов E.

coli, отличающихсяпо наличию гена fimHПоскольку для большинства клинических штаммов E. coli, выделенных отбольных с признаками ИМП, было установлено наличие гена fimН,представляло интерес изучить влияние наличия данного гена на адгезивныесвойства бактерий.15В исследованиях использовали эталонный штамм E. coli ATCC 25922, атакже 20 клинических штаммов, выделенных от больных с признаками ИМП иотличающихся по наличию гена fimН.Оценка адгезивных свойств исследуемых штаммов бактерий позволилаустановить, что по показателю индекса адгезии микроорганизма (ИАМ)эталонный штамм E.

coli ATCC 25922 характеризовался как низкоадгезивный(табл. 8).Таблица 8 – Значения индекса адгезии микроорганизмов эталонногои клинических штаммов исследуемых бактерий№123456789101112131415161718192021Штаммы микроорганизмовE. coli ATCC 25922E. coli № 3 fimH E. coli № 7 fimH E. coli № 13 fimH E. coli № 14 fimH E. coli № 17 fimH E. coli № 22 fimH E. coli № 27 fimH E.

coli № 38 fimH E. coli № 39 fimH E. coli № 41 fimH E. coli № 45 fimH +E. coli № 56 fimH +E. coli № 59 fimH +E. coli № 67 fimH +E. coli № 72 fimH +E. coli № 79 fimH +E. coli № 85 fimH +E. coli № 87 fimH +E. coli № 92 fimH +E. coli № 96 fimH +Значения ИАМ2,1±0,342,8±0,17*2,2±0,262,96±0,83,34±0,49*1,86±0,061,99±0,182,72±0,07*3,72±0,32*2,62±0,12*3,57±0,46*5,04±1,01*6,88±0,81*7,22±0,54*5,84±1,04*4,28±0,24*6,12±0,32*6,02±0,38*5,62±0,32*7,0±0,93*5,82±0,22*Примечание:* – наличие достоверности при уровне значимости р < 0,05 поотношению к контролю.Клинические штаммы E. coli характеризовались различным уровнемадгезивной активности, который зависел от наличия гена fimH. Средиклинических штаммов, лишенных гена fimH, по степени адгезии было выявленодве группы бактерий: штаммы E.