Автореферат (Патофизиологическое значение ацетилхолина в пролиферации опухолевых клеток толстой кишки in vitro и in vivo), страница 4

Микрофотографии образцов толстой кишкина расстоянии 1 см от индуцированной язвы:А и Б – окраска по Массону. А – «интактные», ×150; Б – «язва», ×150;окраска гемотоксилином-эозином; В – «АОМ», ×150; Г – «язва+АОМ», ×150;1 – полип, 2 – зона отслаивания слизистой оболочки, 3 – белковые отложения18Обобщая полученные данные о состоянии СОТК, можно констатировать наличие активного роста полипов и тубулярно-ворсинчатыхаденом в группе «язва+АОМ». Важным изменением СОТК в этойгруппе можно считать сочетание гиперпластических полипов, имевших высокую степень дисплазии и аденокарценом.СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА КОНЦЕНТРАЦИЙ MMP-3, ММР-9 И EGFВ КРОВИ И ОБРАЗЦАХ ТКАНЕЙ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ МОДЕЛЯХПровели количественное определение концентрации ММР-3, ММР9 и EGF в образцах крови, СО слепой и ободочной кишки. Полученныеданные представлены в табл.

7. Установлено, что для каждого биологического маркера существуют свои достоверные различия, и они зависят как от типа тканей, так и от места взятия образцов. Для ММР-9статистически значимые различия были выявлены между группой«интактные» и группой «язва» (р = 0,03) в случае исследования материала слепой кишки. Для крови показано статистически значимое изменение при сравнении «интактных» и «АОМ» (р = 0,0079). Тенденцию к различиям концентраций ММР-9 для тканей толстой кишки(ободочная) определяли при сравнении групп «интактные» и «язва+АОМ», а также «интактные» и «язва» (р=0,05).

Далее было проведено парное сравнение между экспериментальными группами. Определяли различия концентраций ММР-3, ММР-9 и EGF. При парномсравнении групп определено наличие статистически значимых различий при сравнении «АОМ» vs «язва+АОМ» для EGF (ободочная кишка) р=0,03; для MMP-3 (слепая кишка) р=0,02.Показано, что маркером изменения структурной организацииСОТК может являться ММР-3 и ММР-9 для слепой кишки. Значимость определения EGF в сыворотке крови ввиду его низких концентраций у крыс мы не считаем перспективным.Таким образом, в экспериментах in vivo показано значимое влияниевоспаления при инициации опухолевого роста.

Установлена связь воспаления и изменения концентрации Ах в тканях. Выявленное синергичное действие изменения концентрации Ах, ММР-3 и ММР-9, атакже EGF может быть использовано для дальнейших исследованийопухолевого роста на фоне воспаления в патофизиологических экспериментах.19Таблица 7Концентрация ММР-3, ММР-9 и EGF в различных биологических образцахСреднее определяемое количество вещества, в образцах (пг/мг ткани)Группа и количество образцовМесто полученияобразцаСл.

кишкаИнтактные (n=25)20АОМ (n=25)Язва (n=35)Язва+АОМ (n=15)ММР-3ММР-9EGFМе (25;75)%Ме (25;75)%Ме (25;75)%4,0 (3,6;5,5)4,3(4,1;12,7)0,13 (0,1;0,2)Т. кишка3,3 (3,3;3,7)3,2 (2,5;6,4)0,4 (0,3;0,4)Кровь0,07 (0,07;0,09)0,1 (0,06;0,1)Не детектируетсяСл. кишка4,0 (3,6;5,5)4,3 (4,1;12,7)0,13 (0,10;0,18)Т. кишка3,3 (3,3;3,7)3,15 (2,5;6,4)0,37* (0,35;0,4)Кровь0,08 (0,07;0,09)0,095 (0,06;0,1)Не детектируетсяСл. кишка4,46 (3,45;4,64)3,5 * (2,8;3,8)0,1 (0,1;0,3)Т.

кишка3,8 (3,5;4,2)5,0 (3,2;6,1)0,17 (0,08;0,30)Кровь0,09 (0,08;0,1)0,075 (0,06;0,7)Не детектируетсяСл. кишка3,0◊ (2,5;3,7)3,0 (2,48;4,73)0,07 (0,06;0,18)Т. кишка4,07 (3,0;5,3)5,4 (3,1;12,9)0,12 *◊ (0,08;0,18)Кровь0,09* (0,09;0,1)0,08 (0,07;0,13)Не детектируется* статистически значимые различия «интактные»vs «АОМ» ММР-3 (кровь) р= 0,079; «интактные» vs «язва» ММР-9 (слепаякишка) р=0,03; «интактные» vs «язва+АОМ» (ободочная кишка) р=0,005;◊ статистически значимые различия «АОМ» vs «язва+АОМ» EGF (ободочная кишка) р=0,03; MMP-3 (слепая кишка) р=0,02.3ЗАКЛЮЧЕНИЕРезультаты, полученные в ходе настоящего диссертационного исследования, позволяют подвести следующие итоги.In vitro на линии опухолевых клеток РТК человека SW620 было установлено, что Ах является слабым митогеном, а его эффекты носятвремя- и дозозависимый характер.

Максимальное действие он оказывает при концентрациях 10-6–10-4 М/лунка при 72 часах экспозиции.Полученные данные свидетельствуют о самостимуляции роста клеток,в частности, благодаря белку EGF и связанной с ним системе ММР-3,ММР-9. Установлено отсутствие влияния Ах на экспрессию молекулглавного комплекса гистосовместимости обоих типов.In vivo разработана модель индукции опухолевого роста на фоневоспаления, определены факторы, влияющие на рост полипов ТК укрыс с разным способом получения первичной трансформации клетокэпителия толстой кишки.In vivo разработана модификация химически индуцированного роста опухолей толстой кишки без применения детергентов.

Показано,что двукратное в/б введение АОМ с интервалом 14 дней провоцируетрост и развитие полипов толстой кишки. Установлено, что обнаружение полиполипоза на фоне применения канцерогена возможно толькопри микроскопии образца.Ах вовлечен в процесс заживления повреждения СО ТК. Изменение концентрации Ах в ранний послеоперационный период являетсямаркером воспалительного процесса, а его концентрация нарастает к3–5 дню, и снижается с 12 дня.Ацетилхолин изменяет синтез EGF, ММР-3 и ММР-9 в клеткахслизистой оболочки толстой кишки и способствует ускорению митоза.Практические рекомендации.

Для проведения экспериментального изучения ацетилхолина целесообразно использовать подход параллельного изучения эффектов от вещества: in vitro и in vivo симуляцию,что позволит определить изолированность эффектов от нейромедиатора и уточнить степень его влияния на патофизиологические условия визучаемой системе. При моделировании опухолевого роста в толстойкишке у крыс важным фактором является наличие скрытого воспалительного процесса. В этом случае маркером наличия воспалительнойреакции может быть определение концентрации ацетилхолина в образцах тканей экспериментальных животных.Перспективы дальнейшей разработки темы. Иммуногистохимическое исследование в образцах тканей толстой кишки для определения наличия рецепторов к ацетилхолину как маркера резистентности к факторамопухолевой супрессии является клинически значимой задачей.

Дальней21шее исследование влияния изменения концентрации ацетилхолина привоспалении толстой кишки и связанного с этим воспаления органов дыхания являются наиболее перспективным и легко осуществимым исследованием в экспериментальной работе и в клинической практике.СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ1. Лазебник Л.Б., Смирнова А.В., Трубицына И.Е. и др. Оценка антипролиферативной активности методом МТТ // Гастроэнтерология СанктПетербурга 2012 год: Мат. 14-го Междунар.

Славяно-Балтийского научногофорума «Санкт-Петербург – Гастро 2012», № 2–3, № 287 (тезисы).2. Лагутина Л.Д., Смирнова А.В., Трубицына И.Е. и др. Особенности про-ведения анестезии у крыс при полостных операциях // Экспериментальная иклиническая гастроэнтерология, 2012, № 5. – С. 62-65 * (статья).3. Смирнова А.В, Лазебник Л.Б., Трубицына И.Е. и др. Антипролиферативная активность диклофенака на клеточных опухолевых культурах //Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология, 2012, № 5. –С. 66-69 *(статья).4. Янова О.Б., Васнев О.С, Трубицына И.Е, Юдаков Д.В., Смирнова А.В.Изменения слизистой оболочки пищевода после гастрэктомии у крыс //Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология, 2012, № 8.

–С. 54-57 *(статья).5. Смирнова А.В, Трубицына И.Е., Варванина Г.Г. и др. Определениеантипролиферативной активности аспирина методом МТТ // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология, 2012, № 10. – С. 26–30 *(статья).6. Смирнова А.В., Трубицына И.Е. Ацетилхолин. Роль в канцерогенезетолстого кишечника. Обзор // Экспериментальная и клиническая гасроэнтерология, 2012, № 9. – C. 67-71 *(статья).7. Смирнова А.В., Трубицына И.Е., Ткаченко Е.В. и др. Изучение влиянияаспирина на экспрессию молекул главного комплекса гистосовместимости наопухолеволй линии SW620: Белорусско-Российская научно-практич.

конф. смеждунар. участием «Отечественные противоопухолевые препараты». –Минск, 23-25 мая 2013 года // Российский биотерапевтический журнал, 12(2)78, 2013 (тезисы).8. Смирнова А.В., Трубицына И.Е., Ткаченко Е.В. и др. Определениевлияния ацетилхолина на экспрессию молекул главного комплекса гистосовместимости у клеточной линии SW620: Белорусско-Российская научнопрактич. конф. с междунар. участием «Отечественные противоопухолевыепрепараты».

– Минск, 23-25 мая 2013 года (тезисы) // Российскийбиотерапевтический журнал, 12(2) 78, 2013 (тезисы).9. Смирнова А.В., Трубицына И.Е., Ткаченко Е.В. и др. Изучение влиянияацетилхолина на скорость пролиферации клеток SW620 методом МТТ:Белорусско-Российская научно-практич. конф. с междунар. участием«Отечественные противоопухолевые препараты». – Минск, 23-25 мая 2013года (тезисы) года // Российский биотерапевтический журнал, 12(2) 78, 2013(тезисы).2210.

Трубицына И.Е., Ткаченко Е.В., Смирнова А.В. и др. Баланс биогенных аминов и нейромедиаторов в слизистой оболочке желудка у крыс приэкспериментальной язве: I Национальный конгресс по регенеративноймедицине, 2013. – С. 248-249 (тезисы).11. Трубицына И.Е., Тимен Л.Я., Ткаченко Е.В., Смирнова А.В. и др.Заживление язвенного дефекта слизистой оболочки желудка у крыс:I Национальный конгресс по регенеративной медицине, 2013.

– С. 249-250(тезисы).12. Смирнова А.В., Трубицына И.Е., Ткаченко Е.В. и др. Влияние химически индуцированного воспаления толстой кишки при моделированииполипоза толстой кишки с использованием 1,2-азоксиметана // 41-я Научнаясессия ЦНИИГ «Расширяя границы» 5-6 марта 2015 год. – Гастроэнтерология,№ 2 (103). – Часть II, 2015 (тезисы).13. Ткаченко Е.В., Смирнова А.В., Варванина Г.Г. и др. Состояние тканейлегких крыс Wistar, при химической индукции полипов толстой кишки1,2-азоксиметаном // 41-я Научная сессия ЦНИИГ «Расширяя границы»5-6 марта 2015 год.

– Гастроэнтерология, №2 (103). – Часть II, 2015 (тезисы).14. Колдаева Е.Ю., Смирнова А.В., Липенгольц А.А., Григорьева Е.Ю.Использование ветеринарных препаратов для наркотизации животных приэкспериментальной томографии: Мат. ХII Всерос. научно-практич. конф.с междунар. участием «Отечественные противоопухолевые препараты» //Российский биотерапевтический журнал, 2015, № 1. – Т. 14. – С. 92 (тезисы).15. Смирнова А.В., Трубицына И.Е., Ткаченко Е.В. и др. Действие НПВСна слизистую оболочку тонкого отдела кишечника крым Wistar при химическииндуцированном 1,2-азоксиметаном канцерогенезе.

– Тезисы 42-й научнойсессии ЦНИИГ «Принципы доказательной медицины в клиническуюпрактику», 2016. – С. 7.16. Смирнова А.В., Трубицына И.Е., Ткаченко Е.В. и др. Количествоматриксных металлопротеиназ в слизистой оболочке слепой и ободочнойкишок крыс Wistar и морфологическая картина органа на фоне применения1,2-азоксиметана. – Тезисы 42-й научной сессии ЦНИИГ «Принципыдоказательной медицины в клиническую практику», 2016. – С. 7.* публикации в ведущих рецензируемых журналах согласно перечню ВАК.СПИСОК СОКРАЩЕНИЙАхАцетилхолинАОМ1,2-азоксиметанОКОпухолевые КлеткиРТКРак Толстой КишкиСОТКСлизистая Оболочка Толстой КишкиEGFэпидермальный фактор ростаММРматриксная металлопротеиназа23Резюме.