Диссертация (Генетические полиморфизмы, ассоциированные с развитием криоглобулинемии у больных хроническим гепатитом С)

Московский Государственный Университет им. М.В. ЛомоносоваФакультет фундаментальной медициныНа правах рукописиАртемова Марина ГеннадьевнаГенетические полиморфизмы, ассоциированные с развитиемкриоглобулинемии у больных хроническим гепатитом С14.01.04 – внутренние болезниДИССЕРТАЦИЯна соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучный руководитель:Академик РАН, профессор Н.А. МухинМосква 20172ОГЛАВЛЕНИЕСПИСОК СОКРАЩЕНИЙ .....................................................................................................

4ВВЕДЕНИЕ .............................................................................................................................. 6ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ....................................................................................... 111.1.Хронический гепатит С. Эпидемиология. Роль внепеченочных проявлений .................. 111.2. Криоглобулинемия и криоглобулинемический васкулит при хроническом гепатите С .... 121.2.1. Криоглобулины. История открытия ..................................................................................

121.2.2. Эпидемиология криоглобулинемии и криоглобулинемического васкулита ................. 151.2.3. Патогенез криопреципитации и эндотелиального повреждения .................................... 181.2.4. Клинические проявления .................................................................................................... 211.3. Современный подход к генетическим исследованиям в медицине ...................................... 231.3.1.

Связь генетических вариаций с наблюдаемым фенотипом ............................................ 231.3.2. Архитектура генетических исследований ......................................................................... 241.3.3. Оценка генетического риска в клинической практике ................................................... 251.4. Генетические аспекты патогенеза криоглобулинемии и криоглобулинемическоговаскулита при хроническом гепатите С .......................................................................................... 261.5. Влияние криоглобулинемии и криоглобулинемического васкулита на прогнозхронического гепатита С .................................................................................................................. 351.6.

Терапия криоглобулинемического васкулита, ассоциированного с хроническимгепатитом С ........................................................................................................................................ 36ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ............................................. 392.1. Группы исследованных больных ..............................................................................................

392.2. Методы обследования больных ................................................................................................ 422.3. Методы исследования генотипов ............................................................................................. 422.4. Выделение геномной ДНК ........................................................................................................ 442.5. Методы статистического анализа .............................................................................................

49ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ .................................. 533.1. Клинико-лабораторная характеристика пациентов ................................................................ 5333.1.1. Результаты терапии хронического гепатита С препаратами прямогопротивовирусного действия у больных криоглобулинемией ................................................... 583.2. Анализ носительства вариантных аллелей исследованных генов у больных с развитиемкриоглобулинемии и криоглобулинемического васкулита .......................................................... 653.2.1 Выбор ДНК-полиморфизмов для анализа.......................................................................... 653.2.2.

Анализ взаимосвязи вариантных аллелей исследованных генов с развитиемкриоглобулинемии и криоглобулинемического васкулита ....................................................... 673.2.3. Модель прогноза генетических рисков возникновения криоглобулинемическоговаскулита и бессимптомной криоглобулинемии.

....................................................................... 733.3. Выявление факторов риска развития криоглобулинемического васкулита уобследованных больных ................................................................................................................... 78ЗАКЛЮЧЕНИЕ И ВЫВОДЫ ..............................................................................................

88ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ ............................................................................... 90СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ ..................................................................................................... 914СПИСОК СОКРАЩЕНИЙАЛТаланиновая трансаминазаАСТаспарагиновая трансаминазаБСКГбессимптомная криоглобулинемияВГСвирус гепатита СВИЧвирус иммунодефицита человекаВ-НХЛВ-клеточная неходжкинская лимфомаГЦКгепатоцеллюлярная карциномаДНКдезоксирибонуклеиновая кислотагДНКгеномная дезоксирибонуклеиновая кислотаИМТиндекс массы телаИФНαинтерферон альфаКВкриоглобулинемический васкулитКГкриоглобулинемияЛЗлимфопролиферативные заболеванияМКГНмезангиокапиллярный гломерулонефритПВТпротивовирусная терапияГРгенетический рисккПЦРполимеразная цепная реакция в реальном времениРНКрибонуклеиновая кислотаРФревматоидный фактор5СКВсистемная красная волчанкаУВОустойчивый вирусологический ответФНОфактор некроза опухолиХГНхронический гломерулонефритХГСхронический гепатит СBAFFВ-лимфоцитарный активирующий фактор (B-cell activating factor)BVASБирмингемский индекс активности васкулита (Birminghamvasculitis activity score)GnomADGenome aggregation databaseGWASполногеномный поиск ассоциаций (Genome-Wide AssociationStudies)HapMapкарта гаплотипа (Haplotype Map)GRгенетический риск (genetic risk)6ВВЕДЕНИЕАктуальность работыХроническая HCV-инфекция является основным этиологическим факторомразвития криоглобулинемии (КГ) и криоглобулинемического васкулита (КВ) [1,2].

КГ выявляется у 25-50% больных хроническим гепатитом С (ХГС), у части изних (около 10-15%) развивается криоглобулинемический васкулит (КВ),варьирующий в своих проявлениях от спорадических петехиальных высыпанийдо жизнеугрожающих состояний [3, 4].Несмотря на успехи современной противовирусной терапии (ПВТ), ееприменение ограничивается высокой стоимостью препаратов. Также, в последнеевремя появляются публикации о сохранении КГ после достижения авиремии нафоне лечения препаратами прямого противовирусного действия (ППД) [5, 6].Таким образом, элиминация вируса не гарантирует отсутствие рецидива КВ, атерапия больных КВ по-прежнему представляет собой значительные трудности.Причины формирования КГ и КВ только у части больных ХГС, остаютсянеизученными.

Накопленные данные позволяют отвергнуть вклад фактороввируса в развитие КГ и сосредоточиться на поиске особенностей организмачеловека. Принимая во внимание значительную географическую вариабельностьраспространения КГ, выделен особый вклад генетических факторов в развитие КГиКВ[7].Учитывая,чтовосноведанныхзаболеванийлежитиммуновоспалительная реакция, большую актуальность имеют работы поизучению генетических особенностей иммунной системы.Согласнопоследнимрезультатамзарубежныхисследований[8],полногеномный поиск ассоциаций выявил однонуклеотидные полиморфизмы врегионе HLA 6й хромосомы, ассоциированные с КВ.

Каждая дополнительнаякопия аллеля G в позиции rs9461776 и аллеля А (rs2071286) увеличивала рискразвития КВ в 2,16 и 2,15 раз, соответственно. В данном исследовании не7изучались генотипы пациентов с бессимптомной КГ. Также исследование быловыполнено с участием пациентов, проживающих на территории с наибольшейраспространенностью КГ.В настоящее время нет исследований, посвященных генетическим аспектамHCV-ассоциированных КВ и КГ с привлечением пациентов из РоссийскойФедерации.

В связи с этим, актуальным является изучение генетических рисковразвития КГ и КВ, что позволит персонифицировать подход к тактике ведения илечения пациентов с ХГС.Цель исследованияИсследовать связь генетических полиморфизмов в ДНК-локусе HLA сразвитием HCV-ассоциированных криоглобулинемии и криоглобулинемическоговаскулита.Задачи исследования1.

Изучить ассоциации генетических полиморфизмов с развитием HCVассоциированных криоглобулинемиии криоглобулинемического васкулитапутем генотипирования полиморфизмов rs2071286 и rs9461776.2. Сравнить частоты риск-ассоциированных аллелей в группах бессимптомнойкриоглобулинемии и криоглобулинемического васкулита.3. Построить прогностическую модель генетического риска манифестациикриоглобулинемии и криоглобулинемического васкулита.4. Оценить сочетанное влияние генотипов исследуемых полиморфизмов иклинико-демографических показателей на развитие и особенности течениякриоглобулинемии и криоглобулинемического васкулита.8Научная новизнаВпервые изучена и получена ассоциация генетических полиморфизмов сразвитием HCV-ассоциированных криоглобулинемии и криоглобулинемическоговаскулита у пациентов российской популяции.Проведена оценка особенностей течения заболевания в зависимости относительства полиморфных маркеров исследуемых генов.Предложена генетическая модель риска манифестации криоглобулинемииикриоглобулинемическогоиммунологическихваскулита,(персистенцияатакжепрогнозированиякриоглобулинемии)исходовтерапиипрепаратами прямого противовирусного действия.Практическая значимостьОпределеныполиморфизмы,ассоциированныесразвитиемкриоглобулинемии и криоглобулинемического васкулита, а также построенапрогностическая модель развития данных заболеваний.Определены факторы,негативно влияющие на элиминацию криоглобулинов после достиженияавиремии.