Автореферат (Патоморфологические изменения у осетровых рыб при экспериментальной и спонтанной герпесвирусной инфекции)

На правах рукописиЕлеев Эльдар ЛеонидовичПАТОМОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ У ОСЕТРОВЫХ РЫБ ПРИЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ И СПОНТАННОЙ ГЕРПЕСВИРУСНОЙИНФЕКЦИИ06.02.01 Диагностика болезней и терапия животных,патология, онкология и морфология животныхАВТОРЕФЕРАТдиссертации на соискание ученой степеникандидата биологических наукМосква – 2018РаботавыполненавФедеральномгосударственномбюджетномобразовательном учреждении высшего образования «Московская государственнаяакадемия ветеринарной медицины и биотехнологии – МВА имени К.И. Скрябина»Научный руководитель:Грищенко Леонид Ивановичдоктор ветеринарных наук, профессорОфициальные оппоненты:Капустин Роман Филипповичдоктор биологических наук, профессоркафедры морфологии и физиологииФГБОУВО«Белгородскийгосударственнй аграрный университетимени В.Я.

Горина»Казарникова Анна Владимировнадокторбиологическихнаук,и.о.заведующей лаборатории ихтиологииФГБУН «Федеральный исследовательныйцентр Южный научный центр Российскойакадемии наук»Ведущая организация:Федеральное государственное бюджетноеучреждение «Федеральный центр охраныздоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»)Защита состоится «19» июня 2018 г. в___на заседании диссертационного совета Д220.042.02 при ФГБОУ ВО МГАВМиБ – МВА имени К.И. Скрябина по адресу:109472, г.

Москва, улица Академика Скрябина, д. 23. Тел: 8(495)377-93-83.С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке ФГБОУ ВО «МГАВМиБ– МВА имени К.И. Скрябина» по адресу:109472, г. Москва, улица АкадемикаСкрябина, д. 23. и на сайте: www.mgavm.ruАвтореферат разослан «__»___________2018 г. и размещён на сайте ФГБОУ ВОМГАВМиБ – МВА имени К.И. Скрябина: http://www.mgavm.ru и на сайте ВАК приМинистерстве образования и науки РФ: http://vak.ed.gov.ruУченый секретарьдиссертационного совета Д 220.042.02,кандидат ветеринарных наук, доцентАбрамов Павел Николаевич1.ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫАктуальность темы.

Осетроводство является важной отраслью мировойаквакультуры. При этом, как и при культивировании других видов рыб, важнымилимитирующими факторами развития осетровых хозяйств являются болезни, изкоторых большую опасность представляют вирусные инфекции (Winton, J. R., 2016).В настоящее время у осетров выделено около 10 видов вирусов, входящих всемейства Adenoviridae, Papovaviridae, Iridoviridae и Alloherpesviridae.

Почти все ониобнаружены в Северной Америке, главным образом в Канаде и США, а также вЕвропе (LaPatra S.E. et al., 2014; Hanson, L. et al., 2011, 2016; Hedrick, R.P. et al., 1990,1991; Yu-ping Hua, Di Wang, 2005; Watson, L.R. et al., 1995).В России до недавнего времени инфекционным болезням, особенно вирусныминфекциям осетровых рыб, уделялось мало внимания. Литературные данныепоказывают, что преимущественно изучались незаразные, инвазионные болезни ибактериальные инфекции (Акимова Н.В.

и др., 2004; Казарникова А.В., 2007;Микряков В.Р. и др., 2009; Наумова А.М. и др., 2012; Bauer, O.N., Voronin V.N., 2001;Galeotti M. et al., 2015). Только в 2006 г., после выделения герпесвируса отсибирского осетра (Acipenser baerii) в одном из хозяйств Европейской части РФ,появились первые научные работы на данную тему (Щелкунов А.И., Щелкунов И.С.,2010; Щелкунов И.С.

и др. 2007). В течение последних лет изучены молекулярногенетические,физико-химическиеибиологическиесвойствавыделенногогерпесвируса (Калабекова Ф.С., 2012; Прокаева И.Б., 2012; Shchelkunov I.S. et al.,2009;Shchelkunov I.S., 2010). Он отнесен к роду Ictalurivirus семействаAlloherpesviridae порядка Herpesvirales. Наиболее хорошо он репродуцируется вперевиваемых культурах клеток сибирского осетра SSO-2 и белого осетра WSS-2 притемпературе 15оС. Установлено, что данный вирус обладает тропизмом к эпителиюобщего (кожного) покрова и в наибольших количествах накапливается в слизи.Степень разработанности теми. В зарубежной литературе описаны восновном клинические признаки и патологоанатомическиеизменения пригерпесвирусных инфекциях американских осетровых рыб, а также имеются краткиесообщения о патогистологических изменениях (общего) кожного покрова уамериканских белого и тупорылого осетров (Acipenser transmontanus, Acipenser3brevirostrum) (LaPatra S.E.

et al., 2014; Watson, L.R. et al. 1995). В тоже время, пригерпесвирусной инфекции сибирского осетра и его гибридов патоморфологическиеизменения практически не изучены, а сведения о патогистологических изменениях влитературе отсутствуют,что препятствует расшифровкепатогенеза, раскрытиюсущности данной болезни и определению ее нозологической принадлежности.Цель и задачи исследований. Цель работы - установить патоморфологическиеизменения и патоморфогенез при экспериментальной и спонтанной герпесвируснойинфекции осетровых рыб.Для достижения цели были поставлены следующие задачи:изучить патоморфологические изменения при герпесвирусной инфекциисибирского осетра, вызванной штаммом SK 1/0406 и изолятом SIz6/0311 вэкспериментальных условиях;изучить патоморфологические изменения при герпесвирусной инфекциигибрида русского и сибирского осетров, вызванной штаммом SK 1/0406 вэкспериментальных условиях;провести сравнительную оценку патогенного действия штамма SK1/0406 и изолята SIz6/0311 при экспериментальном заражении сибирского осетра иего гибрида с русским осетром;изучить патоморфологические изменения при спонтанномтечениигерпесвирусной инфекции осетровых рыб в сравнении с её проявлением вэкспериментальных условиях;раскрыть основные стороны патогенеза болезни и установить критериидля разработки ее диагностики.Научнаяхарактеристикамикротруктурныеновизнаисследований.Впервыеклинико-морфологическойизмененияворганахданакартины,принаиболееподробноестественномполнаяизученытечениииэкспериментальном воспроизведении герпесвирусной инфекции сибирского осетра иего гибрида с русским осетром, раскрыты основные стороны патоморфогенезаболезни.

Установлено, что изученные изоляты герпесвируса, выделенные от больныхосетров из разных регионов, обладают аналогичными патогенными свойствами,вызывают у естественно больных и экспериментально зараженных рыб сходныепатологоморфологические изменения. Герпесвирусная инфекция сибирского осетра4вызывает тяжелые дистрофические и некротические изменения не только общего(кожного) покрова, но и внутренних органов: печени, почек, кишечника, чтопозволяет рассматривать ее как системную (генерализованную) форму болезни.Теоретическая и практическая значимость работы.Полученные результаты комплексных патоморфологических исследованийвносят вклад в сравнительную патологию герпесвирусных инфекций животныхразных систематических групп: рыб разных таксонов, а также высших позвоночныхживотных.Научно обосновано и экспериментально подтверждено положение о том, чтогерпесвирусную инфекцию сибирского осетра следует считать самостоятельнойнозологической единицей – «герпесвирусная болезнь сибирского осетра», этопозволяет включить её в национальный перечень опасных болезней животных.Установлены характерные клинические и патоморфологические признаки болезни:десквамативный дерматит, очаговая гиперплазия эпидермиса, стабильное появлениеузелковых утолщений кожного покрова в виде бляшек на разных участках тела иплавниках, пятнистые кровоизлияния в жучках, некротический распад эпидермиса иобразование мелких язв, белковая дистрофия и фокальный некроз паренхимы печени,гиалиново-капельная дистрофия эпителия мочевых канальцев, катаральный энтеритспиральной кишки и др.

Они являются базовыми для постановки предварительногодиагноза.Окончательнуюдиагностикугерпесвируснойболезниследуетосуществлять комплексно с обязательным выделением вируса и его идентификациисуществующими методами.Полученныеврезультатеисследованийматериалыиспользуютсяв«Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии –МВА имени К.И. Скрябина» при проведении практических занятий и чтении лекцийпо дисциплинам: «Болезни рыб» и «Вирусология».Методология и методы исследования. Для достижения цели и поставленныхзадач использованы общепринятые методические приёмы, позволяющие получитьдостоверные результаты.

В работе применяли современные вирусологические(постановка биопробы, вирусовыделение, расчёт титра вируса), гистологические,электронно-микроскопические методы исследований.5Положения, выносимые на защиту:1.Течение,клиническиепризнаки,патолого-анатомическиеимикроструктурные изменения при экспериментальной герпесвирусной инфекциисибирского осетра.2.Патоморфологическиеизмененияприестественномтечениигерпесвирусной инфекции.3.Системное патогенное действие герпесвируса на организм сеголетковсибирского осетра и его гибрида с русским осетром.4.Результаты комплексных исследований в диагностике и расшифровкепатоморфогенеза герпесвирусной болезни осетровых рыб.Апробация работыОсновные положения выполненной работы доложены: на Международнойучебно-методической и научно-практической конференции «Актуальные проблемыветеринарии, зоотехнии и биотехнологии» (МГАВМиБ имени К.И.

Скрябина,Москва, 2014 г.), IV Международной конференции «Проблемы иммунологии,патологии, охраны здоровья рыб и других гидробионтов» (Борок – Москва, 2015 г.).Объём и структура диссертации. Диссертация состоит из следующихразделов: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований,заключение, список литературы, приложения.Она изложена на 121 страницах текста и включает 13 таблиц, 65 рисунков.Список использованной литературы состоит из 212 источников, из них 193иностранных.Благодарности.Автор выражает благодарность научному руководителюГрищенко Л.И.

за всестороннюю помощь, профессору кафедры радиобиологиивирусологии имени академиков А.Д. Белова и В.Н. Сюрина д.б.н., профессоруЯрыгиной Е.Н., к.в.н., зав. кафедрой общей патологии Илиешу В.Д. за постоянныеконсультации; сотрудникам лабораторий: здоровья гидробионтов и биофизики ГНУ«ВНИИВВиМ», сотрудникам центра коллективного пользования электронноймикроскопии ФГБУН «Института биологии внутренних вод им.

И.Д. Папанина РАН»за помощь и поддержку в отдельных этапах работы.2.СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1 Материалы и методы6Работа выполнена в 2011 – 2016 гг. на кафедре мелкого животноводстваМГАВМиБ – МВА имени К.И. Скрябина и частично на базе лаборатории здоровьягидробионтов ГНУ ВНИИВВиМ РАСХН и ФГБУН ИБВВ им. И.Д. Папанина РАНвпорядке творческого сотрудничества. Эксперименты проводили в аквариальнойГНУ ВНИИВВиМ по единой схеме (рис.1).Объекты исследованияГибрид русского исибирского осетровСибирский осётрОпыт 2Опыт 1Контрольнаягруппа (n=6)Опытная группа(n=20)Заражение(штамм SK1/0406)Контрольнаягруппа (n=10)Опыт 3Естественнобольныерыбы (n=100)Опытнаягруппа (n=40)Заражение (изолятSIz6/0311), опыт 2Заражение(штаммSK1/0406), опыт 3Ежедневное наблюдение, регистрация симптомов и патизмененийОтбор больных рыб для патологоанатомического вскрытия ификсации патматериалаМетоды исследованийОпыт 1Опыт 2Патоморфологические исследованияОпыт 3Патоморфологические исследованияВирусологические исследованияВирусологические исследованияБактериологические исследованияБактериологические исследованияЭлектронно-микроскопические исследованияРис.

1. Схема проведения исследованийМатериалдляпатоморфологическихисследованийбылсобранотэкспериментально заражённых и естественно больных герпесвирусной инфекциейсеголетоксибирскогоосетраиегогибридасрусскимосетром.Дляэкспериментального воспроизведения герпесвирусной болезни поставлено 3 варианта7опытов. Опыт 1 поставлен нами самостоятельно с проведением всего комплексаисследований:экспериментальных,вирусологических,патоморфологических,бактериологических, электронно – микроскопических, гидрохимических.