Автореферат (Молекулярно-генетические аспекты развития гестоза у женщин северо-западного региона Hоссии), страница 6

Для поиска сочетаний вариантов исследуемых полиморфных сайтов,ассоциированных с риском гестоза, нами был использован метод MDR [Ritchie M.D. et al., 2003].В результате анализа установлены три статистически значимые MDR-модели, причем наиболееценной в диагностическом плане оказалась четырехлокусная модель, включающая полиморфныесайты генов PAI1 rs1799768 (-675 5G>4G), AGT rs699 (704T>C), AGTR2 rs11091046 (3123C>A) иADRB2rs1042714(79C>G)(χ2=67,7226,р<0,0001),котораяхарактеризоваласьвоспроизводимостью 90,0% и точностью предсказания 79,0%.Чувствительность модели составила76,0%, специфичность - 82,0%. Несмотря на сравнительно высокий диагностический ипредиктивный потенциал, в рамках построенной модели был выявлен только один вариантгенотипа (PAI1 (rs1799768) 5G4G + AGT (rs699) TT + AGTR2 (rs11091046) CC + ADRB2(rs1042714) CG), частота которого в группе с гестозом значительно отличалась от таковой вгруппе сравнения (1,75,910,1% против 0,00,00,0%, p=0,0204, ОШ=12,04; 95%ДИ:0,68-213,83).

Тем неменее, метод MDR подтвердил связь изменений в нуклеотидной последовательности генов PAI1 иAGTR2 с риском гестоза, а также показал, что определенный вклад в формированиипредрасположенности к развитию патологического процесса могут вносить вариации в генах AGTи ADRB2.Поскольку некоторые генетические варианты показали ассоциацию с риском определенныхклинических форм гестоза, нами дополнительно был проведен сравнительный анализ частот ихсочетаний в соответствующих подгруппах больных и группе сравнения. Выявлено статистическизначимое увеличение частоты генотипа PAI1 (rs1799768) 5G4G + ITGA2 (rs1126643) CC вподгруппе больных с сахарным диабетом (27,039,351,6%) по сравнению с группой женщин безосложнений беременности (4,210,216,2%) (p<0,0001; pcor<0,0003; ОШ=5,71, 95%ДИ: 2,48-13,12).Сочетание PAI1 (rs1799768) 5G4G + LPL (rs328) CC чаще встречалось в подгруппе больных сзаболеваниями щитовидной железы (49,463,677,8%) по сравнению с выборкой женщин безосложнений беременности (24,233,743,2%) (p=0,0010; pcor=0,0030; ОШ=3,45, 95%ДИ: 1,65-7,23).Установлено, что генотип PAI1 (rs1799768) 5G5G + MTHFR (rs1801133) CC обладаетпротективным эффектом в отношении развития гестоза у женщин с гипертонической болезнью(0,00,00,0% против 10,618,225,8% в группе сравнения) (p=0,0002; pcor=0,0006; ОШ=0,04, 95%ДИ: 0,000,64).Полученные результаты подтверждают данные литературы о важной роли межгенныхвзаимодействий в патогенезе гестоза [Tempfer et al., 2004; Vefring et al., 2004; Dalmaz et al., 2006;Баранов и др., 2009; Халфорд-Князева и др., 2013] и свидетельствуют об аддитивном эффектесочетаний вариантов rs1799768 гена PAI1 (-675 5G>4G) с вариантами rs1126643 гена ITGA2(807C>T), rs1801133 гена MTHFR (677C>T) и rs328 гена LPL (1595С>G) при развитииопределенных форм патологии.Прогностическая значимость выявленных генетических маркеров гестоза.

В таблице 5представлены результаты оценки прогностических качеств вариантов исследуемых полиморфныхсайтов, ассоциированных с риском возникновения гестоза или его отдельных клинических форм(генетических маркеров риска гестоза), с помощью ROC-анализа (Receiver Operator Characteristic15analysis). Для большинства выявленных генетических маркеров риска гестоза, значения AUCоказались довольно низкими (AUC=0,52-0,59), что свидетельствует о небольшойдискриминационной способности этих маркеров. Наибольшее прогностическое значение имеютмаркеры раннего гестоза (APOA1 (rs4938303) AA), гестоза на фоне заболеваний почек (AGTR2(rs11091046) СС), гипертонической болезни (MTHFR (rs1801133) CC; MTHFR (rs1801133) CT) исахарного диабета (ITGA2 (rs1126643) CT).

Среди сочетаний генетических маркеров самыйвысокий диагностический потенциал показали комбинации генотипов изученных полиморфныхсайтов PAI1 (rs1799768) 5G4G + LPL (rs328) CC и PAI1 (rs1799768) 5G4G + ITGA2 (rs1126643) CCпри прогнозировании гестоза у женщин с заболеваниями щитовидной железы и сахарнымдиабетом, соответственно. Величины AUC для указанных генетических маркеров находились впределах значений 0,61-0,65, что свидетельствует об их средней диагностической ценности припрогнозировании риска соответствующих форм гестоза и возможности использования этихмаркеров в качестве тест-систем в медицинской практике.Таблица 5 – Значения AUC для вариантов изученных полиморфных сайтов, ассоциированныхс риском развития гестозаКлиническая форма гестозаГенетический маркерAUC (95%ДИ)F7 (rs6046) AA0,52 (0,46-0,58)PAI1 (rs1799768) 5G5G0,56 (0,49-0,62)Гестоз в целомPAI1 (rs1799768) 5G4G0,57 (0,51-0,64)PAI1 (rs1799768) 5G4G + AGT (rs699) TT + AGTR20,53 (0,47-0,59)(rs11091046) CC + ADRB2 (rs1042714) CGАД≥160/110 мм.рт.ст.ITGA2 (rs1126643) TT0,59 (0,51-0,66)Ранний гестозAPOA1 (rs4938303) AA0,62 (0,53-0,70)MTHFR (rs1801133) T0,58 (0,52-0,63)MTHFR (rs1801133) CCГестоз на фоне0,65 (0,57-0,72)гипертонической болезниMTHFR (rs1801133) CT0,64 (0,56-0,71)PAI1 (rs1799768) 5G5G + MTHFR (rs1801133) CC0,59 (0,51-0,67)AGTR2 (rs11091046) С0,58 (0,52-0,66)Гестоз на фоне заболеванийпочекAGTR2 (rs11091046) СС0,61 (0,54-0,68)SCARB1 (rs5888) T0,57 (0,51-0,63)Гестоз на фоне ожиренияSCARB1 (rs5888) TT0,59 (0,51-0,67)LPL (rs328) СG0,57 (0,49-0,66)Гестоз на фоне заболеванийщитовидной железыPAI1 (rs1799768) 5G4G + LPL (rs328) CC0,65 (0,56-0,73)ITGA2 (rs1126643) CTГестоз на фоне сахарного0,61 (0,54-0,68)диабетаPAI1 (rs1799768) 5G4G + ITGA2 (rs1126643) CC0,65 (0,57-0,72)Примечание - AUC – площадь под ROC-кривой (area under the ROC curve), 95%ДИ - 95%-ыйдоверительный интервал, жирным шрифтом выделены значения AUC>0,6.Ассоциация вариантов исследуемых полиморфных сайтов с клинико-лабораторнымипоказателями при гестозе.

Для установления возможного влияния изменений впоследовательности исследуемых генов на особенности клинических проявлений гестоза данныегенотипирования были сопоставлены с результатами клинико-лабораторных исследований. Длябольшинства генов были обнаружены неслучайные ассоциации их полиморфных сайтов сизменчивостью клинических параметров у пациенток с гестозом.Так, выявлена ассоциация между rs1800790 гена FGB (-455G>A) и уровнем сахара(H=13,8808, p=0,0010), альбумина (F=4,4601, p=0,0157) в крови, временем рекальцификацииплазмы (F=3,3241, p=0,0422), а также протромбиновым индексом (H=9,3164, p=0,0095).Установлена связь замены 1565T>C в гене ITGB3 (rs5918) с уровнем сахара (p=0,0249) и фибринмономерных комплексов (p=0,0086) в крови.

Найдена ассоциация замены 704T>C в гене AGT(rs699) с концентрацией натрия (H=8,4012, p=0,0150), кальция (H=11,4546, p=0,0033), уровнемобщего холестерина (H=6,5940, p=0,0370), холестерина липопротеинов высокой плотности(H=8,7427, p=0,0126) и холестерина липопротеинов низкой плотности (H=8,0401, p=0,0180) вкрови, с состоянием новорожденных по шкале Апгар на 1 минуте (H=7,0360, p=0,0297).Установлена связь вариантов rs5186 гена AGTR1 (1166A>C) с уровнем фибриногена (H=8,2153,p=0,0164) и содержанием фибрин-мономерных комплексов (H=7,1779, p=0,0276), rs2368564 генаREN (83G>A) с уровнем триглециридов (p=0,0371. критерий Манна-Уитни), rs1799722 гена BKR2(-58T>C) - с уровнем сахара (H=6,4143, p=0,0405) и кальция (H=6,5640, p=0,0376), rs1800779 гена16-Альбумин, г/л-Фактор Виллебранда, ед/мл-H=7,2063p=0,0272-NR1H2rs2695121(-103C>T)--LPLrs328(1595С>G)Калий, ммоль/лСистолическое АД, мм.рт.ст.SCARB1rs5888(1050C>T)PAI1rs1799768(-6755G>4G)-Общая щелочная фосфатаза, ед/лH=6,7671p=0,0339-ПараметрAGTR2rs11091046(3123A>C)ITGA2rs1126643(807C>Т)NOS3 (-786T>C) с уровнем фактора Виллебранда в крови (H=7,4422, p=0,0242).

Полученыданные, свидетельствующие о связи изменений в нуклеотидной последовательности гена ADRB2rs1042713 (79C>G) и rs1042714 (46A>G) с концентрацией билирубина крови (H=9,4649, p=0,0088и H=7,5136, p=0,0234) и протромбиновым индексом (H=11,4311, p=0,0033 и H=8,7698, p=0,0125).Заслуживают внимание результаты изучения полиморфных сайтов, варианты которыхпоказали связь с риском гестоза при анализе ассоциаций (таблица 6).Таблица 6 - Связь вариантов полиморфных сайтов генов ITGA2 rs1126643, PAI1 rs1799768,REN rs2368564, AGTR2 rs11091046, SCARB1 rs5888, LPL rs328 и NR1H2 rs2695121 с клиническимипоказателями при гестозеH=8,7954p=0,0123F=4,2208p=0,0167-----------F=3,1994p=0,0482--F=4,2877 F=3,9419Антитромбин III, %p=0,0169 p=0,0231H=9,9549Вес плаценты, гp=0,0069F=5,3379Вес плода при рождении, гp=0,0059H=7,2500Индекс массы тела плода, кг/м2p=0,0267Примечание - в верхней части ячеек указаны значения критерия Крускала-Уоллиса (H) или критерияФишера (F), в нижней части ячеек указаны значения р, прочерк означает отсутствие статистическизначимых различий (p≥0,05).Выявлена связь замены 807C>Т в гене ITGA2 (rs1126643) с величиной систолического АД.

Угомозигот TT наблюдались более высокие значения систолического АД (160,0 (147,5-170,0)мм.рт.ст.) по сравнению с гомозиготами CC (150,0 (140,0-160,0) мм.рт.ст.) (p=0,0226) игетерозиготами CT (150,0 (140,0-160,0) мм.рт.ст.) (p=0,0159), что соответствует результатам,полученными нами при анализе ассоциаций.Обнаружена связь делеции -675 5G>4G в гене PAI1 (rs1799768) с уровнем фактораВиллебранда в крови беременных с гестозом. У пациенток с генотипом 5G4G выявлен самыйвысокий уровень фактора Виллебранда (2,5 (2,0-3,0) ед/мл по сравнению с гомозиготами 5G5G(1,9 (1,7-2,0) ед/мл или 4G4G (2,0 (1,9-2,8) ед/мл) (p=0,0170 и p=0,0908), что согласуется сданными наших более ранних исследований [Мозговая, 2003].Для rs11091046 гена AGTR2 (3123A>C) установлена ассоциация его вариантов с уровнемобщей щелочной фосфатазы и концентрацией калия в крови, а также с весом плаценты. Убеременных с гестозом, гомозиготных и гетерозиготных по аллели C, отмечено повышениеуровня общей щелочной фосфатазы (312,8 (241,7-394,7) ед/л и 252,3 (197,4-351,8) ед/л) и калия(4,29±0,11 ммоль/л и 4,32±0,09 ммоль/л) по сравнению с гомозиготами AA (235,2 (196,7-270,3)ед/л и 4,06±0,12 ммоль/л) (p=0,0034 и p=0,0167; p=0,0315 и p=0,0080).

Вес плаценты был выше угетерозигот AC и гомозигот CC (500,0 (430,0-610,0) г и 570,0 (530,0-690,0) г) по сравнению спациентками с генотипом AA (470,0 (410,0-560,0) г) (p=0,0337 и p=0,0061), что, по мнениюнекоторых авторов, может являться фактором риска развития гестоза [Гайдуков и Аверина, 2011].Для вариантов полиморфного сайта rs5888 гена SCARB1 (1050C>T) обнаружены неслучайныеассоциации с весом и индексом массы тела новорожденных. У пациенток, гомозиготных поаллели T отмечались большие значения веса (3480,0±341,4 г) и индекса массы телановорожденных (13,08 (12,2-14,4) кг/м2) по сравнению с гомозиготами CC (2765,9±265,2 г и 12,3(10,0-13,0) кг/м2) (p=0,0020 и p=0,0080) и гетерозиготами CT (3028,5±196,6 г и 12,3 (11,3-13,5)17кг/м2) (p=0,0262 и p=0,0551).