Сведения о результатах публичной защиты (Роль HIF1-зависимой регуляции пентозофосфатного пути в обеспечении реакций мозга на гипоксию), страница 2

Теоретическая значимость результатов диссертационной работы О.В. Ветрового связана с расширением современных представлений о молекулярных механизмах нарушения функций мозга, вызываемых тяжелой гипоксией и с расшифровкой последовательности биохимических процессов. лежащих в основе нейропротекгивных эффектов посткондиционирования. Практическая значимость работы О,В.Ветрового связана с необходимостью разработки новых эффективных способов коррекции последствий ишемического инсульта — болезни, являющейся одной нз основных причин смерти и нарушения качества жизни.

Полученные диссертантом результаты могут послужить теоретической основой для разработки эффективных фармакологических препаратов, оказывающих направленное действие на ключевые звенья повреждаю щих механизмов. Кроме того, полученные диссертантом результаты могут быть использованы при чтении лекций по нейрохимни в биологических и медицинских вузах, Диссертация Ветрового Олега Васильевича на тему «Роль Н!Г1-зависимой регуляции пентозофосфатного пути в обеспечении реакций мозга на гипоксню» полностью соответствует требованиям п. 9 «Положения о порядке присуждения ученых степеней», утвержденного постановлением Правительства Российской Федерации от 24.09.13 г. № 842 !в действующей редакции от 02.08.201б г.)„предъявленным к диссертации на соискание ученой степени кандидата наук.

а ее автор Ветровой Олег Васильевич заслуживает присуждения ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.01.04 — биохимия. Отзыв содержит 2 вопроса: 1) В работе при рассмотрении путей образования восстановленных форм НАДФ основное внимание обращено на начальные реакции пентозофосфатного пути окисления глюкозы. Каков, по мнению диссертанта, вклад других НАДФ-зависимых реакций восстановления в поддержании пула НАДФН в клетках мозга? 2) Диссертантом убедительно продемонстрирована иейропротекториая роль иигибитора фактора Н!Р-!.

Является ли этот эффект иейроспецифичиым или может проявляться в других тканях, например, при коррекции последствий инфаркта миокарда? На вопросы в отзыве диссертант дал следующие ответы: 1) Известно, что в цитозоле клеток мозга ферменты пеитозофосфаз ного пути, глюкозо-бфосфат дегилрогеиаза и 6-фосфоглюкоиат дегидрогеиаза, являются основными ферментами восстановления НАДФ. Но также поддержание пула НАДФН обеспечивается малик-эизимом и НАДФН-зависимой формой изоцитратдегидрогеиазы. Вопрос о возможности регуляции этих ферментов в ответ на гипоксию требует дополнительных исследований. 2) Н1Р-1 функционирует во всех тканях организма, в связи с чем исследованный механизм потенциально может реализовываться и в других тканях.

Соискатель имеет 67 опубликованных работ по теме диссертации, в том числе 10 стаей, опубликованные в рецензируемых научных изданиях, 7 из которых рекомендованы ВАК Мииобриауки России, 57 тезисов в материалах всероссийских и международных конференций. Наиболее значительные работы по теме диссертации: О,В. Ветровой, Е.А.

Рыбникова. Т.С. Глушенко, К.А. Баранова, М.О. Самойлов «Умеренная гипобарическая гипоксия в режиме посткоидициоиироваиия повышает экспрессию Н1Р-1а и эритропоэтииа в СА1 поле гиппокампа крыс, переживших тяжелую гипоксию», Нейрохимия. том 3 1, номер 2, 20 ! 4, стр. '1 34-139. О.В. Ветровой, Е.А. Рыбникова. Т.С. Глущенко„М.О. Самойлов «Влияние гипоксического посткоидициоиироваиия иа экспрессию противоапоптотического белка Вс1-2 и иейротрофииа ВОЫР в СА! поле гиппокампа крыс, переживших тяжелую гипоксию», Морфология, том 145, номер 2, 20!4, стр. 16-20.

О. Ъе(готоу. Е. Тирко«а, К. Бапеча, Е. Ко(гуайо»а, М. Хепйо, Е. КуЬп!Ьояа "Ыецгорго(ес(!«е сйес! оГ Ьу!юЬапс Ьурох!с роа(сопгййошпй В ассошрагйед Ьу дпа рго(есбоп алд йргй рсгох!г(а(!оп сйапдез (п га( Ь!рросатрцз", Ыеигозс!епсе Ье((егз, ъо1. 639, 2017, рр. 49 — 52. О,В. Ветровой. Е.А. Рыбникова, М.О. Самойлов. «Церебральиые механизмы гипоксического/ишемического посткоцлиционироваиия», Биохимия, том 82.

номер 3, стр. 542-551, 2017. На автореферат диссертации поступило 7 отзывов. Все отзывы положительные. Отзывы прислали: 1. Чернышева Мариыа Пввловыа, доктор биологических наук. доцент, профессор кафедры общей физиологии ФГБОУ ВО «Санкт-Петербургский государственный университет», г. СанктПетербург. Отзыв положительный, содержит ! вопрос: 1) Известно, что траискрипциоииый фактор Н1Р-! активирует транскрипцию многих генов, в том числе геи белка р53„проапоптотического «стража генома», Не может ли при использованной парадигме постгипоксического коидициоиирования Н1Р- ! через р53 способствовать уменьшению числа нейронов гиппокампа и иеокортекса? 2. Лукьянова Людмила Дмитриевиа, доктор биологических наук, профессор.

заслуженный деятель науки, чл.-корр. РАН, руководитель отдела патофизиологии, и.о. заведующего лабораторией биоэнергетики и проблем гипоксии ФГБНУ «НИИ общей патологии и патофизиологии» РАН. г. Москва. Отзыв положительный, замечаний не содержит, содержит 3 рекомендации; 1) Целесообразно в дальнейшем проводить работу на фенотипах животных с разной толерантностью к гипоксии, так как известно, что защитно-адаптационные механизмы к гипоксин формируются у них неодинаково. 2) Следует учитывать, что срочная экспрессия гипоксического транскрнпцнонного фактора Н!Р-! а, ответственного за экспрессию более 150 генов, в том числе и участвующих в формировании срочных механизмов адаптации, индуцнруется одномоментно с действием гипоксни и зависит от ее тяжести.

Выбранный диссертантом режим тяжелого гипокснческого воздействия индуцирует экспрессию фактора лишь в первые 15 мин н в последующие 4ч происходит резкое снижение его уровня сравнительно с исходным. Поэтому для окончательных выводов о роли Н! Р-1а в регуляции ПФШ необходимы измерения динамики содержания этого белкового фактора в клетке в процессе эксперимента. 3) Учитывая, что, согласно данным литературы, в условиях выбранного диссергантом режима гипоксического посткондиционнрования срочная экспрессия Н!Г-1а достигает максимальных значений уже через б0 мии, после чего его уровень возвращается к норме.

целесообразно проверить возможность сокращения длительности этого воздействия без потери его положительных эффектов, т.е. его оптимизации. 3. Макаревич Павел Игоревич, кандидат медицинских наук, заведующий лабораторией генно- клеточной терапии Института регенеративной медицины, медицинский научно-образовательный центр ФГБОУ ВО «Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова», г. Москва. Отзыв положительный, содержит 2 замечания: 1) Возможным ограничением является тот факт, что ингибиторы топонзомеразы 1 являются производными камптотецина и могут не только вызывать снижение скорости биосинтеза Н!Р-1, но и иметь другие мишени.

в том числе, по механизму, связанному с их способностью индуцировать разрывы ДНК. 2) возможно„для углубления развиваемой автором концепции ему могут потребоваться в дальнейшем опыты на трансгенных или нокаутных животных, так как использование химических ингибиторов 1и пяо, как было отмечено выше, не всегда позволяет добиться однозначных выводов. 4. Гуляева Наталья Валерьевна, доктор биологических наук, профессор, заместитель директора по научной работе, заведующий лабораторией функциональной биохимии нервной системы ФГБУН «Институт высшей нервной деятельности и нейрофизиологии» РАН, г. Москва. Отзыв положительный„замечаний не содержит. б. Наливаева Наталья Николаевна, доктор биологических наук, ведущий научный сотрудник лаборатории сравнительной физиологии и патологии ЦНС ФГБУН «Институт эволюционной физиологии и биохимии им.

И.М. Сеченова» РАН, г. Санкт-Петербург. Отзыв положительный, содержит 1 замечание: 1) К числу мелких недочетов автореферата можно отнести не очень удачное обозначение экспериментальных групп животных на рис. 2 н 4 (ТГ«3ПостК+1) и отсутствие детального пояснения к предложенной автором схеме действия Н!На и ПостК. б, Зарубина Ирина Викторовна, доктор биологических наук, профессор, преподаватель кафедры фармакологии ФГБ ВОУ ВО «Военно-медицинская академии им. С.

М. Кирова», г. СанктПетербург. Отзыв положительный, замечаний не содержит. 7. Дерхо Марина Аркадьевна, доктор биологических наук. профессор, зав. кафедрой естественнонаучных дисциплин ФГБОУ ВО «Южно-Уральский ГАУ», г. Троицк. Отзыв положительный. содержит 2 вопроса: 1) Как Вы думаете. почему гиппокамп и неокортекс крыс при тяжелой гипоксии по разному реагируют на посткондиционирование умеренной гипобарической гипоксин, как по концентрации Г-б-ФДГ, так и Н1г1? 2) Хотелось бы, чтобы автор сформулировал практическую значимость своих исследований. На вопрос в отзыве М,П. Чернышевой диссертант дал следующий ответ: 1) Известно, что позитивная регуляция белка р53 транскрипционным фактором Н1Р1 происходит в случае недостаточной активности модифицирующих его протеинкиназ, в частности протеинкиназы АЫ.

В тоже время в литературе имеются сведения о повышении активности АК! в результате воздействий умеренной гипоксией, что может объяснять отсутствия проапоптотического действия Н1г! при увеличении его количества в ответ на воздействие гипоксическим посткондиционированием. На рекомендации в отзыве Л.Д. Лукьяновой диссертант дал следующие ответы: ! ) Согласен, в дальнейших экспериментах целесообразно учитывать гетерогенность выборки животных по устойчивости к гипоксии.

2) В ближайших экспериментах, направленных на продолжение изучения вопроса о механизмах регуляции пентозофосфатного пути, запланировано изучение в том числе и ранних эффектов Н!г ! 3) Согласен. Более того, предполагается проверка гипотезы о достаточности единичного сеансапосткондиционирования для оказания терапевтического эффекта. На замечания в отзыве П.И.

Макаревича диссертант дал следующие ответы: 1) Действительно. в исследованиях по изучению ннгибнровання Н1Р! при посткондициоиировании, результаты которых не вошли в диссертацию, мы наблюдали токсичность топотекана при курсовом применении. Однако, используемая дозировка препарата в случае однократной инъекции не давала эффектов на фрагментацию ДНК ни у контрольных животных. нн у крыс, переживших тяжелую гипоксию. Тем не менее вопрос о потенциальной токсичности топотекана непосредственно и постинсультный период требует детального исследования.