Автореферат (Современные методы контроля качества зубных паст и ополаскивателей лечебно-профилактического назначения), страница 3

Качественный анализЭМ герани проводили в рамках стандартизации по ОФС 1.5.2.001.15 «Эфирные масла» ГФ XIIIиздания (таблица 3). В результате проведенного исследования разработаны методикиидентификации репрезентативных компонентов лечебно-профилактических добавок в составезубных паст и ополаскивателей для полости рта «SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебныетравы».Рисунок 2 – Хроматограмма водноспиртового экстракта шалфея,предназначенного для введения в составзубной пасты и ополаскивателя SPLAT«Лечебные травы» (метод ГХ анализа наПИД)Рисунок 3 – Хроматограмма настойкилистьев шалфея лекарственного на спиртеэтиловом 95% (1:10) (метод ГХ анализа наПИД)11Таблица 1Сравнительная таблица химического состава летучей фракции листьев шалфеялекарственного из водно-спиртового экстракта и настойки на спирте 95%(1:10)№ВеществамаркерыРастворсравнения(настойка листьев шалфеялекарственного на спиртеэтиловом 95% (1:10))Испытуемый раствор (водно-спиртовойэкстракт шалфея, предназначенный длявведения в состав зубной пастыи ополаскивателя «SPLAT (СПЛАТ)Medical Herbs / Лечебные травы»)№ пика на время№ пика на времяхроматограмме удерживания,хроматограмме удерживания,сексек1α-пинен12,3612,412β-Пинен22,6522,523Лимонен33,0633,074Линалоол43,8343,7053,955Камфора64,3854,436Борнеол+туйоны 74,666*5,88**85,107Борнилацетат96,5778,10107,8589,51119,41910,67Примечание: *туйоны были обнаружены только в водно-спиртовом экстракте шалфеяРисунок 4 – Хроматограмма водноспиртового экстракта цветков ромашки,предназначенного для введения в составзубной пасты и ополаскивателя «SPLAT(СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы»(метод ГХ-МС)Рисунок 5 – Хроматограмма настойкицветков ромашки аптечной на спиртеэтиловом 95% (1:10) (метод ГХ-МС)12Таблица 2Сравнительная таблица химического состава летучей фракции цветков ромашкиаптечной по данным ГХ-МС-анализа№Вещества-маркерыРаствор сравнения(настойка цветков ромашкиаптечной на спирте этиловом95% (1:10))№ пика нахроматограмме12345678910времяудерживания,сек361.9438.2469.7515.7553.7608.9630.3642.9662.997Лимонен73Борнеол124Карвон150Эвгенол177α-фарнезен201Спатуленол244Кадинен260α-Бисаболол276Оксид бисаболола291АОксид297668.7кариофилленаКачественный ГХ-МС анализ ЭМ гераниИспытуемый раствор(водно-спиртовой экстрактромашки, предназначенный длявведения в состав зубной пастыSPLAT «Лечебные травы»)№ пика навремяхроматограмме удерживания,сек54361.5114469.6147553.6179608.8201642.8215668.2216668.3С учетом современных тенденций использования ГХ-МС-анализа в стандартизации ЭМпроведение данного исследования для оценки подлинности ЭМ герани в рецептуре компанииSPLAT было сочтено целесообразным.

Масс-спектр представляет собой фундаментальнуюхарактеристику конкретного вещества, поэтому идентификацию гераниола в ЭМ геранипроводили по двум его характеристическим ионам (m/z 41 и 69) масс-спектра (рисунок 7).Качественный ГХ анализ ЭМ гераниКачественный ГХ-МС анализ ЭМ гераниРисунок 6 – Хроматограмма ЭМ герани,предназначенного для введения в составзубной пасты и ополаскивателя «SPLAT(СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы»(метод ГХ анализа на ПИД)Рисунок 7 – Хроматограмма ЭМ герани,предназначенного для введения в составзубной пасты и ополаскивателя «SPLAT(СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы»методом ГХ-МС13Таблица 3Результаты стандартизации ЭМ герани по ГФ XIII издания№Показатели качества1Описание2Подлинность3Растворимость4Спирт этиловый567891011121314Общаяфармакопейнаястатья ГФ XIIIиздания (ОФС)ОФС.1.5.2.0001.15«Эфирные масла»ОФС.1.2.1.2.0004.15.«Газоваяхроматография»ОФС.1.5.2.0001.15«Эфирные масла»Результаты испытаний ЭМгераниПодвижная прозрачная жидкостьярко-желтого цвета с сильнымприятным своеобразным запахом,напоминающим аромат камфорыгераниол, цитронеллол, нераль,гераниальрастворимо в 2,5 мл спиртаэтилового 95%;растворимо в 1,10 мл эфирадиэтилового;не обнаруженОФС.1.5.2.0001.15«Эфирные масла»Испарение с фильтровальнойЖирные и минеральные ОФС.1.5.2.0001.15бумаги в срок менее 24 ч безмасла», в том числе «Эфирные масла»остаткаосмолившиеся вещества0,004%Остаток эфирного масла ОФС.1.5.2.0001.15«Эфирные масла»после выпариванияОФС.1.5.2.0001.15не обнаруженаВода«Эфирные масла»ОФС.1.2.1.0012.15не выше – 12 ºСТемпература«Температуразатвердеваниязатвердевания»ОФС.1.2.1.0014.150,8950 г/см3Плотность«Плотность»ОФС.1.2.1.0018.15α20D = -9,20º×мл ×дм-1×г-1Оптическое вращение«Поляриметрия»n20D = 1,4675Показатель преломления ОФС.1.2.1.0017.15«Рефрактометрия»ОФС.1.5.2.0001.152,31 мг КОН на 1 г ЭМКислотное число«Эфирные масла»ОФС.1.2.3.0007.15Ip = 1,13 ммольПерекисное число«Перекисное число»ОФС.1.2.1.2.0004.15.Содержание гераниола в ЭМКоличественное«Газоваягерани 15,75±0,5369г/100гопределениехроматография»Качественный и количественный анализ ополаскивателя для полости рта«SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы»Качество ополаскивателя для полости рта «SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебныетравы» было подвержено путем идентификации репрезентативных компонентов/специфичныхвеществ-маркеров лечебно-профилактических добавок, указанных в его составе: наличиеборнеола, борнилацетата, α-пинена и камфоры является косвенным доказательством наличия в14образце эфирномасличной фракции водно-спиртового экстракта листьев шалфея, фарнезена –водно-спиртового экстракта цветков ромашки, цитронеллола, гераниола – ЭМ герани.

Общийвид хроматограммы представлен на рисунке 8 и таблице 4. Самые интенсивные пики приходятсяна четыре основные вещества: цимол, борнеол, камфору, терпинен, лимонен, цитронеллол, доликоторых составляют 52%, 22%, 5%, 4%, 3%, 2% соответственно.Таблица 4Химический состав извлечения изополаскивателя для полости рта «SPLAT(СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы»№ Время,КомпонентПлощадь,мин%1 2,247,56242 2,38α-пинен0,33973 2,67Бета-Пинен0,59244 3,03Лимонен2,46105 3,09Цимол52,43916 3,34Терпинен3,82577 3,660,41708 4,46Камфора4,9134Рисунок 8 – Хроматограмма извлечения из9 4,622,6313ополаскивателя «SPLAT (СПЛАТ) Medical10 4,71Борнеол21,8672Herbs / Лечебные травы» (метод ГХ анализа11 5,44Цитронеллол1,4353на ПИД)12 5,80Фарнезен0,0986Содержание гераниола в извлечении из13 5,91Гераниол0,5077ополаскивателя SPLAT «Лечебные травы»14 6,69Борнилацетат0,9091при проведении ГХ-анализа на ПИД100,0000составило 7,08±0,0453мг/100г (0,007%).Концентрация гераниола в извлечении из ополаскивателя «SPLAT (СПЛАТ) MedicalHerbs / Лечебные травы» (0,007%) соответствует значениям минимально подавляющейконцентрации (МПК) ЭМ герани для оказания антибактериального действия на биопленкиполости рта, а также диапазону нормируемых значений синтетического гераниола в СГПР[0,001;001].

Содержание гераниола в ополаскивателе в 1,5 раза больше, чем в одноименнойзубной пасте, что объяснятся их разным способом применения, а, следовательно, разнымвоздействием на развития биопленок в полости рта.Качественный и количественный анализ зубной пасты«SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы»Аналогичный подход по идентификации репрезентативных компонентов лечебнопрофилактических добавок эфирномасличного ЛРС был применен к стандартизации зубнойпасты (рисунки 9, 10, таблица 5).

Репрезентативными компонентами зубной пасты «SPLAT(СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы» являются гераниол и цитронеллол. Согласнорезультатам ГХ анализа самые интенсивные пики (пики с наибольшей площадью) приходятся нацитронеллол, гераниол, цимол и камфора, доли которых составляют 76,82%, 3,23%, 11,81%,156,26% соответственно (таблица 5). Согласно результатам ГХ-МС-анализа, самые интенсивныепики приходятся на ментол, его изомеры, эвкалиптол, а также значимые величины имеют пикицитронеллола, гераниола. Концентрация гераниола составила 0,002%, что соответствуетдиапазону нормируемых значений синтетического гераниола в СГПР [0,001;001] (рисунок 12).Рисунок 9 – Хроматограмма извлечения иззубной пасты «SPLAT (СПЛАТ) MedicalHerbs / Лечебные травы» (метод ГХ анализана ПИД)Рисунок 10 – Хроматограмма зубной пасты«SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебныетравы» методом ГХ-МСТаблица 5Химический состав извлечения из зубной пасты «SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs /Лечебные травы» по данным ГХ анализа№12345678910Время,мин2,372,663,073,293,664,474,745,515,836,10КомпонентАльфа-ПиненБета-ПиненЦимолЦинеолТерпиненКамфораЦитронеллолГераниолГераниальНеральВысота, мв3,5283,748127,7720,8271,29348,614390,9265,7432,7532,223587,427Площадь,мв*мин0,08110,11853,03750,02350,03451,610219,75510,83000,12820,094825,7133Высота,%0,60050,638021,75110,14080,22018,275866,54890,97770,46870,3785100,0000Площадь,%0,31530,460911,81290,09150,13436,262076,82813,22780,49860,3686100,0000Ширин, сек2,322,961,602,962,362,203,567,523,043,20Полученные концентрации гераниола в ЭМ герани и СГПР сравнивали со следующимизначениями МПК ЭМ герани, при которых пеларгония оказывает сильный антибактериальныйэффект по отношению к пародонтопатогенным микроорганизмам: 1000 мкг/мл (1,12 мг/г сучетом ρ(ЭМ герани) = 0,89г/мл) к Streptococcus mutans, 0.72 мг/мл (0,81мг/г) к S.

aureus, 0.36мг/мл (0,4мг/г) к Bacillus cereus и 0.72 мг/мл (0,81мг/г) к B. Subtilis, 1000 мкг/мл (1,12 мг/г) к S.sobrinus, 2000 мкг/мл (2,25 мг/г) к S. sanguinis, 2000 мкг/мл (2,25 мг/г) к S. salivarius, 1000 мкг/мл(1,12 мг/г) к L. casei. Но с учетом сложности оценки суммарного содержания ЭМ в СГПР былопредложено введение нового показателя качества «массовая доля гераниола» в НД напрофилактические зубные пасты и ополаскиватели для полости рта, содержащие в качестве16лечебно-профилактической добавки ЭМ герани. Это будет подтверждать эффективность икачество готовой продукции.Рисунок 11 – Хроматограмма ЭМ герани,Рисунок 12 – Хроматограмма извлечения изпредназначенного для введения в составзубной пасты SPLAT «Лечебные травы»зубной пасты SPLAT «Лечебные травы»Содержание гераниола в ЭМ герани составило Содержание гераниола в извлечении из15,75±0,5369г/100г (16%), что обеспечивает зубной пасты SPLAT «Лечебные травы» присильное антибактериальное действие.проведении ГХ-анализа на ПИД составило2,07±0,0142мг/100г (0,002%) (0,0207 мг/г).Количественный ГХ-МС-анализ зубной пасты«SPLAT (СПЛАТ) Medical Herbs / Лечебные травы» методом внутреннего стандартаСодержание гераниола в дихлорметановом извлечении из зубной пасты при проведенииГХ-МСанализасоставило1,08±0,0162мг/100г,чтоменьше2,07±0,0142мг/100г.Этосвидетельствуют о потерях ЭМ герани, в частности гераниола, в процессе подготовки пробы кГХ-МС анализу.

В этой связи для оценки стабильности зубной пасты использовали метод ГХ ссоответствующей ему пробоподготовкой. Общий вид хроматограммы представлен нарисунке 13.Рисунок 13 – Хроматограмма по полному ионному току дихлорметанового извлечения иззубной пасты SPLAT «Лечебные травы» с внутренним стандартом фенантреномОценка стабильности образцов зубной пасты различных серий, содержащих ЭМгераниДля унификации результатов исследования были использованы результаты раннеепроведенного количественного определения гераниола в ЭМ герани Bourbon (травы пеларгонииароматной herba Pelargonii graveolensis) (Франция) (рисунок 11).17Проведенный анализ доказывает отсутствие цитронелолла в пастах по окончанию 3 летхранения, при этом количественное содержание гераниола в течение всего срока годности, атакже по его истечению сохраняется на достаточном уровне, что свидетельствует о стабильностизубных паст, содержащих ЭМ герани.Рисунок 14 – Хроматограмма извлечения изРисунок 15 – Хроматограмма извлечения иззубной пасты SPLAT «Лечебные травы»зубной пасты SPLAT «Лечебные травы»1 год хранения2 год храненияКонцентрация гераниола в извлечении из Концентрация гераниола в извлечении иззубной пасты SPLAT «Лечебные травы» зубной пасты SPLAT «Лечебные травы»составила 2,07±0,0142мг/100г.составила 1,95±0,0145мг/100г.Рисунок 16 – Хроматограмма извлечения изРисунок 17 – Хроматограмма извлечения изпросроченной зубной пасты SPLATзубной пасты SPLAT «Лечебные травы»«Лечебные травы»серии 04/10/19, изготовленной в 2016 годуКонцентрация гераниола в извлечении из Концентрация гераниола в извлечении иззубной пасты SPLAT «Лечебные травы» зубной пасты SPLAT «Лечебные травы»составила 1,37±0,0136мг/100г.составила 4,759±0,0672 мг/100г (0,005%).Таким образом, количественное содержание гераниола в течение всего срока годности, атакже по его истечению сохраняется на достаточном уровне для проявления своих лечебнопрофилактических свойств (рисунки 14, 15, 16, 17).