Диссертация (Разработка состава и технологии пероральных пролонгированных гелей на основе производных акриловой кислоты), страница 10

Полученныйраствор имеет концентрацию 0,3350 мг/мл. Затем делают серию разведений, какуказано в таблице 2.5.Таблица 2.5 Серия разведений растворов ибупрофена в среде фосфатного буферас pH 6,8Уровень концентрации, %20406080100120140160180Объем0,335мг/млраствора ибупрофена, мкл100200300400500600700800900Объем фосфатного буферарН 6,8, мкл490048004700460045004400430042004100Для полученной серии разведений измеряют оптическую плотность при длиневолны 220±2 нм. Параллельно проводят измерение оптической плотностифосфатного буфера с pH 6,8, величину которой учитывают в ходе вычисленияоптической плотности ибупрофена.

На основе полученных данных строяткалибровочный график зависимости оптической плотности от концентрациираствора.2.2.2.8 Коррекция органолептических свойств ЛФДля определения вкуса был использован метод определения числовых индексови органолептический метод оценки корригентов А.И. Тенцовой [8].Метод определения числовых индексов используется для определенияосновного вкуса вещества. Группой добровольцев из пяти человек оцениваетсяосновной вкус по шкале от 0 до 5, где 0 – очень неприятный вкус, 5 – оченьприятный вкус.Метод, предложенный А.И. Тенцовой, позволяет вывести индекс вкуса, каксреднеарифметическое значение всех результатов.

Группой добровольцев из54двадцати человек оценивается вкус образцов геля по предложенной схеме.Учитываются показатели «сладость» (1 – не сладкий, 5 – очень сладкий), «наличиепослевкусия» (1 – отсутствует, 5 – присутствует сильное), «характер послевкусия»(1 – неприятный, 5 – очень приятный), «совместимость вкусов корригента и ЛВ» (1– несовместим, 5 – совместим), «вкус в целом» (1 – неприятный, 5 – приятный).2.2.2.9 Количественное определение нимесулида в ППГ методом ВЭЖХКоличественное определение нимесулида в ППГ проводили методом ВЭЖХ сУФ-детектированием в соответствии с требованиями ОФС 1.2.1.2.0005.15«Высокоэффективная жидкостная хроматография».Подвижная фаза. Компонент А. Ацетонитрил (ОФС 1.3.0001.15).Компонент Б. Для приготовления 1 л 0,1% раствора муравьиной кислоты в водедеионизированной в мерную колбу на 1000 мл пипеткой вносили 1 мл муравьинойкислоты, после чего в колбу добавляли около 100 мл воды деионизированной итщательно перемешивали.

После перемешивания объем колбы доводили тем жерастворителем до метки и тщательно перемешивали, получая 0,1% раствормуравьиной кислоты в воде деионизированной.Получение стандартного раствора нимесулида. На аналитических весах сточностью до 0,0001 г брали навеску, содержащую 10,03 мг нимесулида(стандартныйобразецнимесулидаEPN0845000).Навескуколичественнопереносили в мерную колбу на 100 мл и растворяли в метаноле, доводя объёмраствора до метки 100 мл. Концентрация нимесулида в полученном растворесоставляет 100,30 мкг/мл.

Из данного раствора путём разведения готовилирастворы с концентрациями нимесулида 50,15 мкг/мл и 5,02 мкг/мл, которые вдальнейшем использовали для приготовления калибровочных образцов.Получение испытуемого раствора. Для получения испытуемого раствора ППГнимесулида, навески массой 10,00 мг взвешивают на аналитических весах сточностью 0,0001г, содержание нимесулида в которой должно составлять 0,1 мг.Навеску количественно переносят в мерную колбу на 100 мл и растворяют вацетонитриле, доводя объём раствора до метки 100 мл. Концентрация нимесулидав полученном растворе составляет 1,00 мкг/мл.55Для деструкции гелевой матрицы раствор помещали на ультразвуковую баню на10 минут, затем центрифугировали (центрифуга Eppendorf 5415D, 200g) в течение5 минут.

Остатки матрицы геля удаляются в ходе механически центрифугированияв течение 5 минут. Полученный раствор отбирают в виалу для дальнейшегоанализа.Получение калибровочных растворов. Калибровочные образцы готовили путемсмешивания растворителя со стандартными растворами в соответствии с таблицей2.6 (общий объем каждого калибровочного образца – 500 мкл).Таблица 2.6 Приготовление калибровочных образцов, содержащих нимесулидКонцентрациянимесулида вкалибровочномобразце,мкг/мл0,050,10,20,51,0Концентрациянимесулидавстандартномрастворе,используемомдляприготовлениякалибровочного образца,мкг/мл5,025,025,025,025,022,05,05,0550,15Объёмстандартногорастворанимесулида,вносимогокалибровочныйобразец, мкл4,989,9619,9249,899,6199,249,85Объёмрастворителя,вносимыйкалибровочныйв образец, мклв495,2490,4480,08450,2400,4300,8450,15Основные параметры хроматографической системы приведены в таблице 2.7.Условия хроматографирования приведены в таблице 3.55.Таблица 2.7 Основные параметры хроматографической системыХроматографНеподвижная фазаAgilent 1220 (Agilent Technologies,США)Хроматографическая колонка ZorbaxExlipse XDB-C18, 150x4,6 мм, размерчастиц 5 мкмПодвижная фазаАцетонитрил (А) / 0,1 % раствормуравьиной кислоты (В) (60:40)ЭлюированиеИзократическое (скорость потока 1,0мл/мин)Объёмпробы,10,0 мклвводимойв хроматограф56Температуратермостата колонки30°СВремя анализа4,0 минВремя удерживанияОколо 3,5 минутПрограммноеобеспечениеLabSolutions, SHIMADZU (ShimadzuCorporation), СШАПостроение калибровочного графика.

Для построения калибровочного графикапроводят хроматографию заранее подготовленных калибровочных растворовнимесулида. Проводили анализ 7 образцов с прибавлением стандартного растворанимесулида до получения концентраций: 0,05 мкг/мл, 0,1 мкг/мл, 0,2 мкг/мл, 0,5мкг/мл, 1 мкг/мл, 2 мкг/мл, 5 мкг/мл. По полученным данным в программеLabSolutions строили прямую в системе координат зависимости площади пика отконцентрации нимесулида в растворе.Количественное определение. Испытуемый раствор вносят в хроматограф ипроводятопределениеобразцавсоответствиеспараметрамихроматографирования. Полученные данные о площади пика соотносят скалибровочным графиком.Методика была валидирована в соответстсвии с ОФС 1.1.0012.15 «Валидацияаналитических методик». Данные о валидации представлены в главе 3.11.2.2.2.10 Количественное определение ибупрофена в ППГ методом ВЭЖХКоличественное определение ибупрофена в ППГ проводили методом ВЭЖХ сУФ-детектированием в соответствии с требованиями ОФС 1.2.1.2.0005.15«Высокоэффективная жидкостная хроматография».Подвижная фаза.

Компонент А. Ацетонитрил (ОФС 1.3.0001.15).Компонент Б. Для приготовления 1 л 0,1% раствора муравьиной кислоты в водедеионизированной в мерную колбу на 1000 мл пипеткой вносили 1 мл муравьинойкислоты, после чего в колбу добавляли около 100 мл воды деионизированной итщательно перемешивали. После перемешивания объем колбы доводили тем жерастворителем до метки и тщательно перемешивали, получая 0,1% раствормуравьиной кислоты в воде деионизированной.57Приготовление стандартного раствора ибупрофена. На аналитических весах сточностью до 0,0001 г брали навеску, содержащую 22,03 мг ибупрофена(стандартный образец ибупрофена USP Ibuprofen RS, Cat.

№1335508). Навескуколичественно переносили в мерную колбу на 100 мл и растворяли в метаноле,доводя объём раствора до метки 100 мл. Концентрация ибупрофена в полученномрастворе составляет 220,3 мкг/мл. Из данного раствора путём разведения готовилирастворы с концентрациями ибупрофена 22,03 мкг/мл и 2,203 мкг/мл, которые вдальнейшем использовали для приготовления калибровочных образцов.Получение испытуемого раствора.

Для получения испытуемого раствора геляИбупрофена 3%, его взвешивают на аналитических весах с точностью 0,0001гнавеску весом 83,3335 мг, содержание Ибупрофена в которой должно составлять2,5 мг. Навеску количественно переносили в мерную колбу на 100 мл и растворялив метаноле, доводя объём раствора до метки 100 мл. Концентрация ибупрофена вполученном растворе составляет 25,00 мкг/мл.Для деструкции гелевой матрицы раствор помещали на ультразвуковую баню на10 минут, затем центрифугировали (центрифуга Eppendorf 5415D, 200g) в течение5 минут. Остатки матрицы геля удаляются в ходе механически центрифугированияв течение 5 минут.

Полученный раствор отбирают в виалу для дальнейшегоанализа. Эксперементально подтверждено отсутствие влияния центрифугированияна определение ЛВ в пробах.Построение калибровочного графика. Калибровочные образцы готовили путемсмешивания растворителя со стандартными растворами в соответствии с таблицей2.8 (общий объем каждого калибровочного образца – 500 мкл).58Таблица 2.8 Приготовление калибровочных образцов, содержащих ибупрофенКонцентрацияКонцентрацияОбъёмибупрофенав ибупрофенав стандартногокалибровочномстандартномраствораобразце, мкг/млрастворе,ибупрофена,используемомдля вносимоговприготовлениякалибровочныйкалибровочногообразец, мклобразца, мкг/мл1,02,2031132,522,03565,022,0311310,0220,32315,0220,33425,0220,35650,0220,3113Объём растворителя,вносимыйвкалибровочныйобразец, мкл387444387477466444387Основные параметры хроматографической системы приведены в таблице 2.9.Условия хроматографирования приведены в таблице 4.28.Таблица 2.9 Основные параметры хроматографической системыХроматографНеподвижная фазаПодвижная фазаЭлюированиеAgilent1220(AgilentTechnologies, США)Хроматографическая колонкаZorbaxExlipseXDB-C18,150x4,6 мм, размер частиц 5мкмАцетонитрил (А) / 0,1%раствор муравьиной кислоты вводе деионизированной (В)(60:40)Изократическое(скоростьпотока 1,0 мл/мин)Объёмпробы,вводимойвхроматограф20,0 мклТемпературатермостата колонки30°СВремя анализа7,0 минВремя удерживанияОколо 5,0 минПрограммноеобеспечениеChemStation(ver.B.01),Agilent Technologies, США59Полученные данные внесены в таблицу (табл.