Диссертация (Разработка инъекционных лекарственных форм цифетрилина), страница 5

Исследования in vivo проводилина бестимусных мышах, при этом соматостатин BIM-23014C вводили двараза в день в дозе 500 мкг тремя путями – внутрибрюшинно, подкожно23вокруг опухоли и отдалённо от опухоли. При внутрибрюшинном иподкожном отдаленном от опухоли введении наблюдали значительноеторможение развития опухоли, а при введении препарата в областьобразования опухоли – резкое торможение её роста. Вероятно, аналогсоматостатинаоказываетпрямойцитостатическийэффект,аневыраженный цитотоксический.

Полученные результаты совпадают сданными исследований, проводимых Rose и др. [64] на культуре клетокрака молочной железы.Многими исследователями на поверхности клеток мелкоклеточногорака лёгкого были обнаружены сайты связывания аутокринного ростовогофактора – бомбезина. Кроме того, Evers и др. [53] установили, чтобомбезин стимулирует рост клеток мелкоклеточного рака легкого NCI-H69.В экспериментах in vivo бомбезин-стимулированный рост NCI-H69подавлял аналог соматостатина MK-678, что свидетельствует о непрямомвоздействии соматостатина на раковые клетки.Рак прямой кишкиВ некоторых опухолях прямой кишки обнаруживают рецепторыгастрина.

При этом известна биомодель, использующая стимуляциюопухолевого роста гастрином или его аналогами. Исследователи Singh и др.[115] установили, что SMS 201-995 подавляет рост культуры клетокположительного по гастриновым рецепторам рака прямой кишки MC-26,индуцированный пентагастрином. В исследованиях in vivo, проводимых набестимусныхмышах,SmithиSolomon[118] изучаливлияниесоматостатина-14 на 3 клеточные линии рака прямой кишки – X56, CXI иHT29.

Соматостатин-14 вводили подкожно два раза в день в дозах 33, 100и 300 мкг/кг. В результате было обнаружено, что соматостатин-14 невлияет на рост X56, но существенно сокращает объём и вес опухоли CXIспустя двадцать дней введения в дозах 100 и 300 мкг/кг. Однако, пока неустановлен точный механизм активности соматостатина и его аналогов на24клетки рака толстого кишечника.

Некоторые исследователи предполагают,что соматостатины вполне могут модулировать рецепторы гастрина и/илиопосредованно влиять на его секрецию.Рак (аденокарцинома) поджелудочной железы (РПЖЖ)При РПЖЖ выживание свыше 5-ти лет составляет 1–2 %, а среднеевремя жизни – не более 2,5 месяцев. К сожалению, ни химиотерапия, нирадиотерапия не приводят к лечебному успеху.

В редких случаяхэффективным способом лечения аденокарциномы поджелудочной железысчитается лишь резекция.АнтипролиферативныйэффектвотношенииРПЖЖвэкспериментальных исследованиях демонстрируют соматостатин и егоаналоги. Так, Redding и Schally [99] свидетельствуют о существенномснижении веса (на 51 %) и объёма (на 67 %) опухоли поджелудочнойжелезы DNCP-322 спустя 21 день после введения L-5-Br-Tри8, аналогасоматостатина-14, в дозе 30 мкг/кг два раза в день. В исследовании Upp идр. [77] показано, что другой аналог соматостатина SMS 201-995ингибирует рост двух типов опухоли поджелудочной железы человека –Cav и SKI.Вероятно, ингибирующее действие соматостатина в отношенииаденокарциномы поджелудочной железы обусловлено подавлением имвыработки гастроинтестинальных гормонов, в частности, секретина. Ктому же на данный процесс могут влиять и иные факторы.

Так, например,Hierowskiидр.[64],иLiebowдр.[82]налинииклетокнедифференцированного РПЖЖ человека MIA PaCa-2 обнаружилирецепторы ЭФР и соматостатина. В свою очередь, ЭФР стимулирует ростданного рака, а соматостатин подавляет стимуляцию посредствомактивации дефосфорилирования рецептора ЭФР.25Рак предстательной железыГормональная терапия РПЖ базируется на андрогенной зависимостиданного типа опухоли. Evers B.M. et al. [53] сообщили о комбинированномлечении агонистом релизинг-фактора лютеинизирующего гормона [DиTри6]-LH-RHаналогамисоматостатинаиRC-121RC-160гормонзависимого РПЖ Даннинга R33227-H.

При этом комбинацияпрепаратов оказалась более эффективной в ингибировании опухолевогороста, нежели монотерапия каждым из указанных агентов. Данный эффектавторы объясняют тем, что аналоги соматостатина ингибируют секрециюпролактина и гормона роста.Эндокринные типы опухолиLamberts и др. [79] исследовали влияние SMS 201-995 на железистуюопухоль крысы 7315а, секретирующую пролактин и АКТГ. SMS 201-995вводили в дозах 2 или 20 мкг/кг 2 раза в день. В результате отмечалосьзначительное уменьшение распространенности опухоли, а также снижениееё веса. Об эффективности SMS 201-995 в отношении несущей высокоаффинныеSSTRинсулиномыхомякасвидетельствуютрезультатыисследования, проводимые Reubi [100]. При введении указанного агента вдозе 200 мкг/кг в день на протяжении 36 дней наблюдалось снижениеобъёма опухоли на 50 % и ее веса на 40 %. Вероятно, что терапевтическийэффект SMS 201-995 обусловлен его связыванием с рецепторамисоматостатина.Экспериментальные исследования по применению комбинацийоктреотида и антимитотических лекарств – метотрексата, винкристина,сурамина и фторурацила – демонстрируют слабый аддитивный эффект.

Внастоящеевремярассматриваетсявозможностьиспользованиякомбинированной терапии с применением аналогов соматостатина убольных с гастроэнтеропанкреатическими нейроэндокринными опухолей.26Такжеаналогисоматостатинаприменяютсякакносителицитотоксических агентов с целью их доставки к опухолевым клеткам [91].Весьма эффективным в отношении экспериментальных моделей опухолейжелудка человека NCI-N87 и Hs746T, характеризующихся большойплотностью SSTR-5 и SSTR-2, является цитотоксический октапептидныйконъюгат с аналогом соматостатина – AN-238.

Синтезированный Schally идр. AN-238 состоит из RC-121 и производного доксорубицина 2пироллино-DOX. В эксперименте AN-238 подавлял рост исследуемыхопухолей желудка и, кроме того, связывался с SSTR близлежащих сосудов[107,108].Современная предклиническая стратегия применения аналоговсоматостатина базируется на трансфекции генов SSTR-2, которые, каквыявлено на моделях РПЖЖ, обладают антионкогенными свойствами. Приэтом противоопухолевый эффект генной трансфекции может бытьсущественноусиленсистемнойхимиотерапиейцитостатикамиирадионуклеидами.Следовательно,можносделатьвыводотом,чтоаналогисоматостатина являются перспективными противоопухолевыми агентами,использовать которые можно как в монотерапии, так и в сочетании сиными противоопухолевыми препаратами.1.2.

Цифетрилин – представитель группы синтетических аналоговгипоталамического гормона соматостатина1.2.1. Общая характеристика и противоопухолевая активностьцифетрилинаЦифетрилин – синтетический аналог гипоталамического гормонасоматостатина, который был получен в лаборатории химического синтезаНИИ ЭДиТО ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава27России.

В отличие от других аналогов данного гормона цифетрилинпредставляетсобойиспользованиемнециклическийклассическихпептид,методовсинтезированныйпептиднойхимии.сВсереакционноспособные боковые группы в его молекуле защищенытретбутилоксикарбонильной,бензилоксикарбонильнойитетрагидропиральной группами. По химической структуре цифетрилинявляетсяметиловымэфиромNα-трет-бутилоксикарбонил-S-тетрагидропиранилцистеинилфенилаланил-D-триптофил-Nεкарбобензоксилизилтреонина (Рисунок 3) [14].R – трет-бутилоксикарбонилR1 – тетрагидропиранилR2 – карбобензилоксикарбонилR3 – метилРисунок 3.

Структурная формула цифетрилина [14]Противоопухолевое действие цифетрилина изучалось на опухоляхкрыс – R3327-Н (перевиваемой гормонозависимой аденокарциномепредстательной железы) крыс-самцов линии Copenhagen и на ДМБАиндуцированных ОМЖ неинбредных крыс-самок и на перевиваемой РМ1(рак молочной железы человека) на бестимусных мышах. На клеткахРПЖ и ОМЖ экспрессированы мембранные SSTR, что позволяет оценитьантипролиферативное действие соединений, опосредованное через этирецепторы.

На ОМЖ противоопухолевое действие аналогов соматостатинапроявляется вследствие угнетения выделения пролактина и такжеопосредованно через SSTR [9].При изучении противоопухолевого действия на РПЖ цифетрилин в10 % водно-спиртовом растворе вводили подкожно в дозе 0,1 мг/кгежедневно в течение 55 дней. В качестве препарата сравнения28использовалиструктурныйаналогсоматостатина,применяемыйвклинической практике, – сандостатин (октреотид). В результате былопоказано,чтонафонепролонгированноговведенияисследуемоесоединение тормозило рост опухоли на 45 %, а максимальныйтерапевтический эффект наблюдался на 10-й неделе опыта (ТРО = 55 %),после чего отмечалось постепенное снижение противоопухолевогоэффекта (Рисунок 4) [9].Рисунок 4.

Противоопухолевая активность цифетрилина в дозе 0,1 мг/кг на R-3327-НДаннинга [9]ПротивоопухолевыйэффектцифетрилинанаДМБА-индуцированных ОМЖ крыс-самок изучали при его внутрибрюшинномвведении в дозе 0,1 мкг/кг на протяжении 30 дней. При этомпротивоопухолевый эффект цифетрилина после окончания лечениясоставлял 49 % ТРО, на 6-й недели – 54 %, на 8-й – 64 % и далее нарасталдо 90 % (с 10-й по 13-ю недели) (Рисунок 5) [9].Рисунок 5. Противоопухолевая активность цифетрилина в дозе 0,1 мг/кг на ДМБАиндуцированных ОМЖ [9]29Сандостатинпопротивоопухолевойактивностиуступалцифетрилину, и максимальный, но кратковременный терапевтическийэффект наблюдался на 13-й недели опыта и составлял 74 % ТРО (Рисунок6).Рисунок 6.

Противоопухолевое действие цифетрилина в сравнении с Сандостатином наДМБА-индуцированных ОМЖ [9]Приизучениизависимостипротивоопухолевогоэффектацифетрилина от дозы на ДМБА-индуцированных ОМЖ было показано, чтов диапазоне доз от 0,1 до 0,2 мг/кг терапевтический эффект прямопропорционален вводимой дозе до восьмой недели наблюдения. Разница впротивоопухолевом действии при снижении эффекта в зависимости отдозы является незначительной (р>0,05) [9].На РМЖ РМ-1 у бестимусных мышей было выявлено, что на фоневведения цифетрилина ТРО составило 47 %, что превышало действиесандостатина (ТРО = 39 %). Непосредственно после окончания лечениятерапевтический эффект сохранялся и ТРО составил для цифетрилина45 %, для сандостатина – 40 % (Таблица 1) [9].Таблица 1.Противоопухолевая активность цифетрилина на РМЖ РМ-1 бестимусных мышейв сравнении с сандостатиномПрепаратДоза (мкг/кг)/интервал (ч) ×ТРО, %число введенийДни13162023Цифетрилин100 / 24 × 2149*3647*45Сандостатин34Примечание: *р <0,05 по отношению к контролю30383940Противоопухолевая активность цифетрилина была изучена насолидных опухолях мышей – Са-755 (аденокарцинома молочной железы),LLC (эпидермоидная карцинома легкого Льюис) и В-16 (меланома) [9, 13,14,116].Наисследуемыхпротивоопухолевыйэффектопухоляхпоказаннедозозависимыйравный83–97цифетрилина%послеежедневного внутривенного введения терапевтической дозы ЛВ в течение5 дней (Таблица 2).Таблица 2.Противоопухолевая активность цифетрилина на солидные опухоли мышейДозарежимМаксимальное торможение роста опухоли, %введенияСа-755LLCB-1660 мг/кг1 раз в сутки в 90*83*85*70 мг/кгтечение97*-80 мг/кгдней--5 85*91*Примечание: *р <0,05 по отношению к контролю.