Автореферат (Разработка инъекционных лекарственных форм цифетрилина), страница 3

Размеры липосомцифетрилина при экструзии10Обработка УЗ. Липосомальную дисперсию цифетрилина объемом 30 мл помещалина УЗ-ванну и обрабатывали в течение 10–50 мин с отбором образцов препарата черезкаждые 10 мин. Как показали полученные данные (табл.

3), в результате обработкиУЗ липосомы цифетрилина оказались неоднородны и достигли среднего размерапреобладающей фракции 179 нм лишь спустя 50 мин озвучивания, при этом значениерН за данный период времени снизилось с 6,2 до 4,5, а КВП – с 97 до 94 %. Этоговорит о нецелесообразности применения УЗ для получения ОСЛ цифетрилина.Таблица 3Показатели качества ЛЛФ цифетрилина при обработке УЗВремя, мин Средний размер липосом,0330нм±3210324 ±3020442 ±27 / 79 ±2130365 ±25 / 71 ±2440421 ±27 / 66 ±1850179 ±10 / 20 ±9Примечание: * – одна фракция (100%)КВП, %97 ±1,096 ±1,296 ±1,096 ±1,594 ±1,2рН6,3 ±0,16,2 ±0,15,9 ±0,25,2 ±0,14,7 ±0,24,5 ±0,2Гомогенизация.

Для уменьшения размера липосом в промышленных масштабахприменяюттехнологию гомогенизации,поскольку в отличие от экструзииизмельчение в гомогенизаторах под высоким давлением характеризуется болеевысокой производительностью, достигая для некоторых моделей 15 л/ч, чтопозволяет получать за короткий промежуток времени большие объемы стабильныхлипосомальных дисперсий.

В настоящем исследовании 150 мл дисперсии МСЛцифетрилина рециркулировали в гомогенизаторе при давлении 2,8 бар в течение 5мин с отбором образцов через каждую минуту от начала процесса (табл. 4).Таблица 4Влияние времени гомогенизации на качество ЛЛФ цифетрилинаВремя,мин012345Средний размер везикул по фракциям, нмПосле гомогенизацииЧерез 1 сутки326 ±20286 ±30102 ±2 (98 %) / 11 ±2 (2 %)101 ±22 (93 %) / 24 ±2 (7 %)134 ±12 (86 %) / 34 ±11 (14 %)137 ±22 (88 %) / 31 ±4(12 %)123 ±13 (71 %) / 35 ±12 (29 %)124 ±21 (75 %) / 25 ±5 (25 %)76 ±13 (75 %) / 19 ±5 (25 %)120 ±55 (68 %) / 26 ±5 (32 %)62 ±7 (71 %) / 15 ±4 (29 %)151 ±35 (74 %) / 35 ±4 (26 %)КВП, %96 ±1,091 ±1,092 ±2,286 ±1,881 ±3,075 ±3,0В результате установлено, что уже спустя 1 мин циркуляции, за которуюдисперсия совершает 6 полных циклов гомогенизации, образуются везикулыразмером около 100 нм (табл.

4). Однако за этот период уровень включенияцифетрилина снижается от первоначального 96 до 91 %. Поэтому для получениялипосом цифетрилина приемлемого диаметра с сохранением высокого уровня11включения проводили исследование по подбору «щадящего» режима гомогенизации.Для этого липосомальную дисперсию цифетрилина гомогенизировали по циклам.Согласно данным табл.

5 для получения относительно стабильных липосомцифетрилина со средним диаметром 150 нм и первоначальным уровнем включения(96 %) достаточно 2-х циклов гомогенизации дисперсии.Таблица 5Размеры липосом цифетрилина при гомогенизации по цикламРазмер липосом, нм (распределение по фракциям)сразу после гомогенизацииспустя сутки после0326 ±20*286 ±30*гомогенизации1179 ±14*164 ±9 / 11 ±22144 ±9*151 ±4 / 11 ±23153 ±3*166 ±26 / 27 ±104128±1*125 ±2*5170 ±17 / 11 ±3130 ±7 / 15 ±76135 ±29 / 28 ±8176 ±2 / 29 ±167214 ±58 / 43 ±6152 ±32*8168 ±53 / 40 ±3114 ±9 / 11 ±29121 ±7 / 13 ±2102 ±3 / 11 ±310115 ±7 / 18 ±3111 ±6 / 19 ±111116 ±6 / 11 ±2120 ±27 / 26 ±15Примечание: * – одна фракция (100%)Число цикловКВП, %96 ±1,095 ±1,592 ±2,091 ±1,090 ±1,0Исходя из изложенных выше данных для наработки липосомцифетрилина вусловияхлабораториицелесообразноприменятьметодэкструзии,адлямасштабирования технологии получения ЛЛФ – метод гомогенизации.3.

Разработка технологии лиофилизации ЛЛФ цифетрилинаХранение ЛЛФ в жидком виде сопряжено с рядом проблем, наиболеесущественными из которых является: окисление и гидролиз липосомальных ФЛ, атакже ряд физических изменений (агрегация, слияние и др.) в липосомальнойдисперсии. Поэтому для повышения устойчивости липосом цифетрилина в процессехранения предложена стабилизация ЛФ посредством сублимационной сушки.Выбор криопротектора для лиофилизации ЛЛФ цифетрилина. Основной задачейэтапа разработки технологии лиофилизации ЛЛФ цифетрилина являлся выбор типакриопротектора и его количества, обеспечивающего получение лиофилизатанадлежащего качества.

В качестве криoпротекторов исследовали вещества из класса«углеводы»: моносахарид – глюкозу и дисахариды – лактозу, сахарозу и трегалозу.Криопротектор вводили в дисперсию в различных молярных соотношенияхЯФХ/криoпротектор (табл.6). В качестве контроля использовали липосомальнуюдисперсию без добавления криoпротектора.12Из результатов данного исследования следует, что по таким показателямкачествалиофилизатарегидратируемостькакразмероптимальнымвезикулпослекриопротекторомлиофилизации,дляполученияКВПиЛЛФ-лиоцифетрилина является сахароза, вводимая в липосомальную дисперсию в молярномсоотношении ЯФХ/сахароза 1:5.Таблица 6Выбор криопротектора для лиофилизации ЛЛФ цифетрилинаМолярное№КПсоотношениеЯФХ/КП1Контроль–21:331:441:5Глюкоза51:661:871:1081:291:3Лактоза101:4111:5121:2131:3Сахароза141:4151:5161:2171:3Трегалоза181:4191:5Примечание: КП – криопротекторСреднийдиаметрлипосом, нмДолиофилизаци Послелиофилизациии143 ±6131 ±7136 ±13131 ±5130 ±4133 ±4139 ±6122 ±2126±3136±7151±2121±6124±3123±2124±2124±2120±5126±3120±4525±26203±22157±12174±21150±22130±7120±6142±10131±5126±2130±10163±20141±5139±10123±3165±20151±20137±4122±6РегидратиКВП,%руемость9892929491969692осадокосадокосадок9697989895959696(+/-)+++++++++++++++++Выбор режима лиофилизации ЛЛФ цифетрилина.

Выбор оптимального режимасублимационной сушки ЛЛФ цифетрилина проводили на основании сравнительногоанализадвухспособовлиофилизации–с«медленным»и«быстрым»замораживанием (табл. 7).Таблица 7Характеристика стадий замораживания при лиофилизации ЛЛФ цифетрилинаОперация«Медленное» замораживаниеТемпература, °СВремя«Быстрое» замораживаниеТемпература, °СВремяУстановка флаконов спрепаратом на полки+(20–22)-+(20–22)-Охлаждение полок ипрепарата+(20–22) → -17-17 → -25-25 → -35-35 → -451 ч 20 мин1 ч 15 мин1 ч 20 мин1 ч 20 мин+(20–22) → -452чВыдерживание препарата приминимальной температуре-453ч-453ч13Данные режимы лиофилизации сравнивали путем оценки качества полученныхлиофилизатов по следующим показателям: внешний вид, регидратируемость, размервезикул и КВП.

В ходе анализа полученных данных табл. 8 установлено, что способзамораживания не влияет на показатели качества конечного продукта и оба режимапозволяют получить равноценные образцы ЛЛФ-лиоцифетрилина.Но посколькурежим с «быстрой» стадией замораживания требует меньших затрат времени иэлектрической энергии, данный режим предложен для получения ЛФ цифетрилина.Таблица 8Результаты анализа лиофилизатов, полученных при лиофилизации ЛЛФ цифетрилинас использованием различных режимов замораживанияРежимлиофилизацииВнешний видлиофилизатас «медленным»замораживаниемСухаяпористаямасса белогоцветас «быстрым»замораживаниемРегидратируемость,+/-Размер везикул, нмдолиофилизациипослелиофилизацииКВП, %+164±12170±797 ±1,0+171±10172±897 ±1,0В результате проведенных технологических исследований разработан препарат«Цифетрилин липосомальный, лиофилизат для приготовления дисперсии дляинъекций 6,0 мг».Состав ЛЛФ-лио цифетрилина на 1 флакон:Цифетрилин......................ЯФХ.......................Хол........................ПЭГ-ДГФА...........Сахароза................Итого6,0 мг318,0 мг32,0 мг4,0 мг707,0 мг1067 мгРазработка методики ТСХ для качественного анализаЛЛФ и ЛЛФ-лиоцифетрилина1.

ТСХ-анализ цифетрилина и липидных компонентов ЛФМетодика.К6млсвежеприготовленнойлипосомальнойдисперсииилирегидратированной ЛЛФ-лио цифетрилина (содержимое флакона в 5,3 мл воды)добавляют 6 мл спирта 95 % и перемешивают. На линию старта хроматографическойпластинки наносят по 10 мкл исследуемого образца ЛФ (содержание цифетрилина внаносимой пробе 5 мкг, ЯФХ – 265 мкг, Хол – 27 мкг) и спиртовых растворовстандартных образцов веществ-свидетелей (СОВС): цифетрилина с концентрацией0,5 мг/мл (СОВС-1, 5 мкг), ЯФХ с концентрацией 26,5 мг/мл (СОВС-2, 265 мкг) и Холс концентрацией 2,7 мг/мл (СОВС-3, 27 мкг). После подсушивания пластинку с14нанесенными пробами помещают в хроматографическую камеру с элюэнтом, плотнозакрывают крышкой и хроматографируют восходящим способом.

После достиженияфронтом элюента линии финиша (пробег 12 см), пластинку вынимают из камеры ивысушивают в потоке теплого воздуха до полного удаления запаха растворителя. Дляобнаружения цифетрилина пластинку помещают в камеру, насыщенную парами хлораи выдерживают в течение 5–10 мин, после опрыскивания пластинки 0,05 % воднымраствором калия иодида появляются жёлтые пятна цифетрилина. Для идентификацииЯФХ пластинку помещают в камеру, насыщенную парами йода, и выдерживают 1–2мин до образования ярко-жёлтых пятен фосфолипида. Совместно с ЯФХ проявляютсясветло-желтые быстро исчезающие пятна Хол.

Опрыскиванием пластинки 20 %серной кислотой с последующим нагреванием в сушильном шкафу до образованиярозово-фиолетовых пятен проводят обнаружение Хол. ПЭГ-ДГФА в связи с низкойконцентрацией в анализируемых пробах (0,3 мг/мл) не определялся.Выбор подвижной фазы. Подбор подвижной фазы для разделения цифетрилина илипидных компонентов смеси осуществляли на основе сравнения эффективности 9систем-элюентов, которые включают разные по сродству и полярности кнеподвижной фазе растворители (табл.

9). Оценку эффективности системырастворителей проводили по следующим параметрам: количество зон адсорбции(пятен) веществ, образующихся при разделении смеси компонентов; значениефактора удерживанияRf анализируемых веществ; время пробега подвижной фазы.Таблица 9Выбор элюента для ТСХ-анализа цифетрилина и липидных компонентов ЛФ№Подвижной фазыЗначение RfЦифетрилинЛФСОВС-ЛФЯФХСОВС-ВремяЛФХолСОВС-123456Хлороформ: метанол (9 : 1)Этанол: аммиак водный (7 : 3)Пропанол: ЛУК: вода (12 : 3 : 1)Пропанол-2: ЛУК: вода (22 : 12 :3 )Бутанол: ЛУК: вода (6 : 3 : 2)Хлороформ: ацетон: этанол: ЛУК: вода0,170,730,680,58хвост0,8510.180,730,680,66хвост0,830.080,450,060,050,080,0420.080,470,060,060,110,040.631,000,71,000,770,830.641,000,731,000,770,881ч 10 мин2ч35 минмимимим3 ч ин5 мин4ч10 мин4 ч 20 мин1 ч 10 мин789(6 : 5 : 2 : 2 : 1)Ацетон: этилацетат: ЛУК (6 : 4 : 2)Ацетон: ЛУК: вода (15 : 3 : 2)Ацетон: этилацетат: ЛУК: вода10,93110,931хвост0,03стартхвост0,04старт1,000,9811,000,9712ч15 мин1ч30 мин2ч10 мин(15 : 10 : 3 : 5)В результате исследования для идентификации цифетрилина и ЯФХ былавыбрана система растворителей этанол: аммиак водный (7 : 3), при которойдостигалось увеличение подвижности фосфолипида и обеспечивалось эффективное15разделение данных веществ.

Поскольку в данном системе пятна холестеринаанализируемой пробы и СОВС-3 поднимается с фронтом растворителей до линиифиниша, для ТСХ-анализа этого компонента в составе ЛФ выбрана подвижная фазахлороформ : метанол (9 : 1).2. Хроматографический анализ сахарозы в составе ЛЛФ-лиоцифетрилинаМетодика. Лиофилизат регидратируют путем добавления 10 мл воды, количественнопереносят в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят водой до метки.