Автореферат (Разработка инъекционных лекарственных форм цифетрилина), страница 2
Описание файла
Файл "Автореферат" внутри архива находится в папке "Разработка инъекционных лекарственных форм цифетрилина". PDF-файл из архива "Разработка инъекционных лекарственных форм цифетрилина", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "фармацевтика" из Аспирантура и докторантура, которые можно найти в файловом архиве МГМУ им. Сеченова. Не смотря на прямую связь этого архива с МГМУ им. Сеченова, его также можно найти и в других разделах. , а ещё этот архив представляет собой кандидатскую диссертацию, поэтому ещё представлен в разделе всех диссертаций на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук.
Просмотр PDF-файла онлайн
Текст 2 страницы из PDF
И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет)«Развитие научных и научно-методических основ, базовых и инновационныхподходов при разработке, внедрении и применении лекарственных средств» (номергосударственной регистрации 01201261653)и планом научно-исследовательскихработ ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н.
Блохина» Минздрава России по теме«Инъекционные лекарственные формы гидрофобных субстанций» (2014–2018 гг.).Структура и объем диссертации Диссертационная работа изложена на 151 листахмашинописного текста и содержит 29 таблиц, 25 рисунков. Диссертации включаетвведение, обзор литературы, описание материалов и методов исследований, три главысобственных исследований, общие выводы, список литературы и приложения. Списоклитературы состоит из 143 источников, в том числе 125 – на иностранном языке.ПубликацииПо материалам диссертации опубликовано 5 научных работ, 3 изкоторых являются статьями в журналах, включенных в перечень ведущихпериодических изданий ВАК РФ.6ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериалы и методы исследованийВ исследованиях использована стандартизованная субстанция цифетрилинасинтезированная в лаборатории химического синтеза ФГБУ «НМИЦ онкологии им.Н.Н.
Блохина» Минздрава России. Структурная формула цифетрилина представленана рис. 1. при проведении исследований ЛЛФ и ЛЛФ-лиоцифетрилина использоваливспомогательные вещества и реактивы, которые соответствовали требованиям НД(ГОСТ, ТУ, фармакопейных статей ГФ XIII, PhEur 8.0, USP30-NF25).Рисунок 1. Структурная формула цифетрилина:R – трет-бутилоксикарбонил, R1 –тетрагидропиранил, R2 – N – бензилоксикарбонил, R3 – метил1. Получение многослойных липосом (МСЛ) цифетрилина. Навески цифетрилина иингредиентов липосомальногобислоя – яичного фосфатидилхолина (ЯФХ, Е РС SLipoid,Германия),холестерина(Хол,Sigma-Aldrich,полиэтиленгликоль-2000-дистеароилфосфатидилэтаноламинаCo.,Япония)(ПЭГ-ДГФА,иLipoid,Германия) растворяли в хлороформе. Полученный раствор фильтровали черезнейлоновый мембранный фильтр «Pall» (ООО Палл Евразия, Россия) с размером пор0,22 мкм, переносили в круглодонную колбу и упаривали на роторном испарителе(HeidolphHei-VAP Advantage, Германия) при температуре водяной бани 37 ± 1 ºС вусловиях низкого давления до образования полупрозрачной липидной пленки.
Дляудаления остаточного растворителя пленку досушивали под вакуумом (120–150 мбар)в течение 50 мин, затем гидратировали раствором криопротектора с образованиемдисперсии МСЛ цифетрилина, которую фильтровали под давлением черезнейлоновые мембранные фильтры «Pall» с диаметром пор 1,2 и 0,45 мкм.2. Получение однослойных липосом (ОСЛ) цифетрилина. Для получения ОСЛпрофильтрованную дисперсию МСЛ цифетрилина:- экструдировалина приборе LipexTM (NorthernLipidsInc., LipexBiomembranes, Inc.,Канада), пропуская через фильтры – нейлоновые «Pall», поликарбонатные«Nuclepore» (Whatman, Великобритания) или фильтр из сложных эфиров целлюлозы(MerckMillipore, Ирландия) с диаметром пор 0,22, 0,2 и 0,22 мкм соответственно.- гомогенизировалина Microfluidizer M-110S (Microfluidics, США),- обрабатывали в УЗ-ваннеTranssonic T310 (Elma, Германия) с частотой 20 кГц.73.
Дозирование и лиофилизация ЛЛФ цифетрилина. Стерильнуюдисперсию ОСЛцифетрилина разливали во флаконы по 6 мл и лиофилизировали в камересублимационной сушки «EdwardsMinifastDO.2»(EroElectronicS.p. A., Италия).4. Методы анализа ЛЛФ и ЛЛФ-лиоцифетрилина-КачественныйустановленияанализкомпонентовподлинностикомпонентовЛЛФиЛЛФ-лиоцифетрилина.разработаннойДляЛЛФ-лиоцифетрилинаприменяли метод тонкослойной хроматографии (ТСХ) с использованием пластинок«Sorbfil» (Россия) размером 150 × 100 мм.- Количественный анализ цифетрилина.
Количественное содержание цифетрилинаопределяли методом спектрофотометрии с использованием стандартного образца (СО)при длине волны (282 ± 2) нм на спектрофотометре Cary 100 (Varian, Inс., Австралия).Оптическую плотность спиртовых растворов липосомальногоцифетрилина измерялиотносительно спиртового раствора «пустых» липосом.- Определение количества препарата включенного (КВП) в липосомальныйбислой.Отделение не включенного в липосомыцифетрилина проводили путем фильтрациичерез нейлоновый мембранный фильтр «Pall»с диаметром пор 0,22 мкм. КВПопределяли как отношение концентрации цифетрилина в липосомальной дисперсиипосле фильтрации (Сф) к его концентрации в липосомальной дисперсии послегидратации липидной плёнки (Сп), выраженное в процентах: КВП = Сф / Сп × 100 %.- Определение размера липосомцифетрилина.
Анализ среднего диаметра липосомпроводилиметодомдинамическогосветорассеяниясприменениемнаносайзераNicomp 380 SubmicronParticleSizer (ParticleSizingSystems, США). Дляэтого отмеривали 100 мкл исследуемого образца свежеприготовленных липосом илирегидратированной ЛЛФ-лио цифетрилинав мерную колбу вместимостью 100 мл идоводили водой до метки. Разведенный образец переносили в стеклянную кювету,которую помещали в ячейку анализатора и проводили измерение.- Определение рН липосомальной дисперсии цифетрилина.
Измерение рН проводили сиспользованием рН-метра HANNA НI 2211(HannaInstruments, Румыния). Значение рНв липосомальной дисперсии измеряли, не разбавляя. С целью определения рНлиофилизата к нему добавляли 10 мл воды и проводили измерение.РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙРазработка состава ЛЛФ цифетрилинаВыбор компонентов для создания ЛЛФ цифетрилина основывался на ихфункциональном назначении. В качестве основного компонента, формирующегомембрану липосом, использовали ЯФХ, что объясняется наличием у него такихположительных свойств как приемлемая температура фазового перехода37 °С,8хорошая растворимость в органических растворителях, биосовместимость иприродное происхождение.
Хол вводили в состав ЛФ для придания бислоюнеобходимого уровня жёсткости и повышения стабильности получаемых везикул вкровотоке. Для создания stealth-липосом цифетрилина в состав вводили ПЭГ-ДГФА.На основании указанных липидов, получали и исследовали модельные составыЛЛФ цифетрилина с различными молярными соотношениями компонентов прописи сучетом наличия у него гидрофобных свойств. Качество липосомальных дисперсийцифетрилина, приготовленных по модельным составам, оценивали по следующимосновным показателям – средний размер везикул после экструзии и КВП (табл. 1).Таблица 1Модели составов ЛЛФ цифетрилина№состава1234567891011Молярные соотношенияцифетрилин/ЯФХЯФХ/Хол/ПЭГ-ДГФА1 : 331 : 0,4 : 0,0281 : 441:661:701:751 : 0,2 : 0,0141 : 0,14 : 0,0091 : 0,3 : 0,0191 : 0,2 : 0,0141 : 0,14 : 0,0091 : 0,2 : 0,0141 : 0,14 : 0,0141 : 0,1 : 0,0141 : 0,2 : 0,014Размер послеэкструзии, нмосадок155 ±8150 ±10157 ±10192 ±6191 ±6192 ±6180 ±6190 ±6196 ±6192 ±6КВП,%72 ±2,079 ±1,065 ±3,078 ±1,088 ±1,082 ±1,097 ±1,089 ±1,082 ±1,080 ±2,0В связи с тем, что за счет особенностей строения стенки опухолевых сосудов вней преимущественно накапливаются частицы, имеющие диаметр порядка 100–200нм, данные размеры приняты в качестве оптимальных.
В результате анализаполученных данных установлено, что наиболее оптимальным по указанным вышепараметрам является состав с молярными соотношениями цифетрилин/ЯФХ 1:70 иЯФХ/Хол/ПЭГ-ДГФА 1:0,2:0,014, который обеспечивает максимальный уровеньвключения цифетрилина – 97±1% и размер липосом после экструзии – 180±6 нм.Разработка технологии получения ЛЛФ-лио цифетрилина1. Выбор дисперсионной среды для гидратации липидной пленкиВ качестве растворителей для гидратации липидной пленки с цифетрилиномисследовали воду для инъекций и раствор криопротектора – 12 % раствор сахарозы.Согласно данным, представленным в табл.
2, оптимальным растворителем дляполучения дисперсии МСЛ является раствор сахарозы –КВП цифетрилина достигалоуровня 97±1 % и средний размер везикул после экструзии составил 155±6 нм.9Таблица 2Выбор растворителя для гидратации липидной пленки№Растворитель12Вода для инъекций12% Раствор сахарозыСредний диаметр липосом, нмпосле полученияпосле экструзии691±25175±6330±20155±6КВП, %97±1,097±1,02. Выбор метода получения ОСЛ цифетрилинаНа этапе гидратации липидной пленки образуются неоднородные везикулы сосредним диаметром преобладающей фракции около 330 нм. Поэтому целью данногоэтапаисследованияявлялсявыборспособаполученияОСЛцифетрилинаприемлемого размера, обеспечивающего сохранение высокого уровня включениясубстанции в везикулы. В ходе работы сравнивали показатели качества дисперсий,полученных после экструзии, обработки УЗ и гомогенизации МСЛ цифетрилина.Экструзия.
При выборе оптимального режима экструзии липосом цифетрилинаоценивали эффективность 3-х типов фильтрующих мембран – поликарбонатного сдиаметром пор 0,2 мкм, нейлонового с диаметром пор 0,22 мкм и целлюлозного сдиаметром пор 0,22 мкм. Процесс экструзии дисперсии МСЛ проводили придавлении 0,8–0,9 бар. Согласно результатам, представленным на рис. 2, наиболееэффективной оказалась экструзия с использованием поликарбонатного фильтра,поскольку позволила получить везикулы диаметром около 151 нм, в то время какминимальное значение диаметра липосом при экструзии с нейлоновым ицеллюлозным фильтром составило 175 и 171 нм соответственно. Кроме того, приэкструзии МСЛ цифетрилина с использованием 3-х указанных типов мембранныхфильтров не отмечались значительные изменения в показателе включения активноговещества в липосомах и значений рН, что свидетельствует о низком уровне окисленияфосфолипидов, входящих в состав ЛФ, и сохранении качества продукта.Рисунок 2.