Диссертация (Нарушение функции подоцитов и механизмов самозащиты почки - значение в оценке активности и прогноза хронического гломерулонефрита), страница 12

В то же время у человекамомент начала заболевания во многих случаях неизвестен, и лечение начинаютуже при развившемся процессе. Кроме того, прогрессирование заболевания почекотмечают обычно при длительном наблюдении, несмотря на элиминациюэтиологического фактора, а многие экспериментальные болезни имеют короткийпериод течения.Особыйинтереспредставляютповышениеэкспрессииотдельныхпротивовоспалительных молекул с помощью генной инженерии.

Этот способлечения в некоторых случаях привел к лучшим результатам, чем введениерекомбинантныхцитокинов,помимоэтого,онпозволяетпреодолеть60нежелательные системные эффекты. В течение последних лет разработаныразличные способы переноса экзогенных генов во взрослую почку.Перенос генов в клубочкиВведение чужеродных генов в клубочки возможно через почечныйкровоток. Например, перенос гена осуществляется липосомным методом свведенным гемагглютинирующим вирусом (HVJ). ДНК, ядерный белок и липидыконъюгируются в виде липосом. Такие липосомы быстро проникают черезплазматическую мембрану эндотелиальных клеток при взаимодействии HVJгликопротеинов с сиаловыми кислотами.

Они доставляют ДНК непосредственно вцитоплазму без деградации в лизосомах [133]. Так, при введении НVJлипосомной плазмиды в почечную артерию экспрессия трансгена обнаруживаетсяв клетках клубочка [127].Другой методикой переноса является использование аденовирусноговектора. Почки длительно перфузируют in vivo или ex vivo аденовирусом свведенным геном. Интенсивная экспрессия трансгенного продукта отмечена вклетках клубочка, главным образом, в подоцитах [306].Мезангиальные клетки также можно использовать как вектор для переносагенов. Мезангиальные клетки выделяют из изолированных клубочков, вводят invitro необходимый ген и переносят в ткань почки путем введения в почечныйкровоток.

Так, введение гена, кодирующего ТФР-, уменьшило пролиферациюклеток клубочка и продукцию провоспалительных цитокинов [146]. А введениемезангиального вектора, экспрессирующего ИЛ-10, привело к значительномуснижению протеинурии при анти-ГМБ-нефрите у крыс.Контроль трансгенной активности in vivoМногие защитные молекулы продуцируются в ответ на локальноевоспалительноеиндуцируемымиокружение.Припромоторамикомбинациивозможносистемизменениепереносасвойствгеновсэндогенныхзащитных молекул уже в организме. Используя векторы в комбинации с61контролируемыми системами активации, можно создать обратимые системы«включения-отключения», контролирующие активность генов in vivo [144].Другой проблемой, которая может возникнуть при лечении цитокинами,является большая молекулярная масса рекомбинантных белков.

Следовательно,эти препараты нужно вводить инъекционно, что не очень удобно для пациентов,помимо этого, такие молекулы могут вызывать образование нейтрализующихантител, что ограничивает их эффективность и возможность длительногоприменения. Идентификация малых молекул, которые опосредуют эффекты этихцитокиновиподходятдляфармакологическогоприменения,вызываетнаибольший интерес.

Агонисты рецепторов и молекулы, участвующие в передачесигнала, могут входить в подходящие для лечения препараты. Основнойпроблемой при этом является низкая специфичность молекул передачи сигнала,так как они участвуют в передаче сигнала от многих цитокинов. Например,эффективность различных противовоспалительных молекул, в том числе ИЛ-10,зависит от ингибиции ядерного фактора-кВ (NF-kB) – фактора, ответственного затранскрипциюгеноввоспалительныхмедиаторов.олигодезоксинуклеотидов с высоким сродством кПереносinvivoNF-kB воспроизводитэффективность противовоспалительных медиаторов [135].1.5 ЗаключениеВ последние десятилетия активно изучаются механизмы избирательнойпроницаемости гломерулярного фильтра для различных белков плазмы.

Важноезначение в этих процессах придают подоцитам и подоцит-ассоциированныммолекулам щелевой диафрагмы. Выполняя важную роль в поддержанииструктуры и функции почечного клубочка в норме, подоциты имеютпервостепенное значение при повреждении клубочка и прогрессированиипочечногозаболевания.Своеобразной«платформой»передачисигналов,необходимых для поддержания функций подоцитов (правильной организациицитоскелета,поляризации,эндоцитоза,дифференцировки,ограничения62пролиферации и жизнеспособности клетки в целом), служит межподоцитарнаящелевая диафрагма.В настоящее время установлено, что изменение структуры и функцииподоцита (подоцитопатия), ранее считавшееся специфическим признаком болезниминимальныхизменений,встречаетсяприразличныхнефропатиях:гломерулонефрите, гипертонии, диабетической нефропатии, а также при всехформах нефротического синдрома (врожденного и приобретенного).

Изменениеэкспрессии белков щелевой диафрагмы при всех протеинурических нефропатияхявляется стереотипной реакцией подоцита на повреждение,поэтому уровеньэкскреции нефрина с мочой можно рассматривать в качестве маркера активногоповреждениямежподоцитарнойщелевойдиафрагмыивыраженностиподоцитурии.В эксперименте установлено, что повреждение эпителиальной клетки –подоцита в клубочках сопровождается не только попаданием в мочу структурныхбелков с развитием нефринурии, но и отслойку подоцитов от базальной мембраныклубочка со слущиванием их в мочу – подоцитурией.Интенсивная отслойка подоцитов от БМК и потеря их с мочой приводят кразвитию подоцитопении, что сопровождается «оголением» отдельных участковБМК,потерейвыпячиванийформыбазальнойкапиллярныхмембраны.петельПрисобразованиемконтактеэтихлокальных«выбуханий»спариетальными клетками клубочка формируются синехии между капиллярнымипетлями и Боуменовой капсулой клубочка, что является пусковым механизмомдля начала склерозирования клубочков.Другимхроническогоаспектомповреждениягломерулонефритаподоцитовявляетсябалансипрогрессированиямеждувнешнимиповреждающими и эндогенными защитными факторами.

Многочисленныеисследования последних лет были сосредоточены в основном на повреждающихмеханизмах развития заболеваний почек (механизмы формирования клеточногоинфильтрата, продукция воспалительных медиаторов – цитокинов, хемокинов,63адгезивных молекул, активация резидентных клеток, механизмы развития тубулоинтерстициального фиброза). Однако в ткани почки существует многоуровневаязащитнаясистема,котораярегулируетвоспалительныйпроцессиегосвоевременное завершение.Действие многих, а может быть, и всехвоспалительныхрегулируетсямедиаторовингибиторамиилидругимицитокинами, при этом количество и взаимодействие противовоспалительныхмолекулподчиненохорошоупорядоченнойпрограмме.Выработкапротивовоспалительных цитокинов и самоограничение воспаления являетсязапрограммированным процессом, так как синтез противовоспалительныхфакторов,как,например,вслучаеИЛ-10,запускаетсятемижепровоспалительными стимулами.

Для системы самозащиты в почке характерномногократное усиление сигнала за счет формирования каскадов защитныхмолекул: один медиатор защиты запускает экспрессию других или объединяется сдругими противовоспалительными молекулами, формируя «защитные каскады»или даже «защитные сети», способствуя эффективному торможению дальнейшегораспространения воспалительного процесса. Например, ИЛ-10 может повышатьэкспрессию нескольких протективных ИЛ-1ра и рецептора к ФНО-.

Важнымисточником противовоспалительных факторов, ограничивающих дальнейшеераспространениеОпределенныевоспаления,клеткиявляетсявоспалительноговоспалительныйинфильтрата-инфильтрат.регуляторныеТлимфоциты, «альтернативные» макрофаги, дендритические клетки секретируютпротивовоспалительные и трофические факторы, участвуют в фагоцитозе клеток.Такимобразом,ответственныезаввоспалительномподавлениеинфильтратевоспаления.существуют«Альтернативные»клетки,макрофагиклеточного инфильтрата являются основным источником антагониста рецептораинтерлейкина-1 (ИЛ-1ра), который конкурентно связывается с рецепторомпровоспалительного цитокина ИЛ-1 и предотвращает его эффекты.

Такой жемеханизм относится и к ФНО-, который подавляется растворимым рецептором кФНО-.Противовоспалительныйцитокин–ИЛ-10,продуцируемый64регуляторнымиклеткамиинфильтрата,можетигратьважнуюрольвсамоограничении воспаления.Многие типы клеток способны экспрессировать цитокины, но одной изглавных систем, управляющей их экспрессией, является система CD4+ Тхелперных клеток. Поэтому «противовоспалительный статус» ткани почки прииммуно-опосредованном заболевании определяетсяпреобладающим типомиммунного ответа. Активация Th2 хелперных клетокили регуляторных Тлимфоцитов оказывает протективный противовоспалительный эффект путемнепосредственного супрессивного действия на эффекторные и цитотоксические Тлимфоциты, но главным образом - за счет продукции противовоспалительныхцитокинов, в том числе ИЛ-10.Белки теплового шока, которые попадают во внеклеточное пространствоили экспрессируются на поверхности клеток, играют важную роль в поддержаниииммунного гомеостаза в норме, а также в подавлении хронического воспаленияпри аутоиммунных заболеваниях с помощью активации противовоспалительногофенотипа Т клеток, продуцирующих ИЛ-10.Несостоятельность эндогенных механизмов защиты почки влечет за собойчрезмерную активацию эффекторного, повреждающего звена воспаления, иприводиткперсистированиюэкспериментальных моделяхихронизацииболезни.Вомногихнефрита и при ХГН у человека показано, чтохронические прогрессирующие заболевания почек характеризуются дисбалансоммежду про- и противовоспалительными факторами.