Диссертация (Состояние микробиоценоза толстого кишечника, липидного состава клеточных мембран и антиоксидантного статуса животных при экспериментальном дисбиозе)

Федеральное государственное бюджетное образовательноеУчреждение высшего образования«Курский государственный медицинский университет»Министерства здравоохранения Российской ФедерацииНа правах рукописиАгейченко Алина ВладимировнаСОСТОЯНИЕ МИКРОБИОЦЕНОЗА ТОЛСТОГО КИШЕЧНИКА,ЛИПИДНОГО СОСТАВА КЛЕТОЧНЫХ МЕМБРАН ИАНТИОКСИДАНТНОГО СТАТУСА ЖИВОТНЫХ ПРИЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ДИСБИОЗЕ03.02.03 – микробиологияДиссертацияна соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучный руководитель:доктор биологических наук,доцент Медведева О.А.Научный консультант:доктор биологических наук,доцент Королев В.А.Курск – 20162СОДЕРЖАНИЕСписок сокращений…………………………………………………………………….5Введение……………………………………………………..…….............................…6Глава 1. Обзор литературы…………….…………………………………….…….…151.1 Нормофлора толстого кишечника и ее значение для макроорганизма....151.2 Дисбиоз толстого кишечника и принципы его коррекции……………....181.3 Структура и свойства биологических мембран……………..…..………..241.4 Процессы перекисного окисления липидов…………………………...….301.5 Система антиоксидантной защиты организма и антиоксидантнаятерапия…………………………………………………………………………..33Глава 2.

Материалы и методы исследования...........................……………………...402.1 Методика формирования экспериментального лекарственного дисбиоза………...………………………………………….…………………...…………402.2 Количественное и качественное исследование мукозной микрофлорытолстого кишечника……….………………………………………...……..…..402.3 Определение продуктов ПОЛ и ферментов АОЗ макроорганизма..…....412.4 Количественное и качественное определение липидных фракциймембран эритроцитов……………….….............................................................432.5 Изучение эффективности профилактического и лечебногоиспользования антиоксиданта и пробиотиков при экспериментальномлекарственном дисбиозе……………………………………...………………..452.6Статистическая обработка полученных данных………………..………..46Результаты собственных исследований……………………………………………..48Глава 3.

Состояние пристеночной микрофлоры толстого кишечника имолекулярно-биохимических показателей крови и колоноцитов мышей в условияхэкспериментального дисбиоза……………………………………........................…..483.1 Состояние пристеночной микрофлоры толстого кишечника мышей вусловиях экспериментального дисбиоза………………………………..…….4833.2 Изменение молекулярно-биохимических показателей крови иколоноцитов мышей в условиях экспериментального дисбиоза………...….51Глава 4. Особенности изменения пристеночной микрофлоры толстого кишечникаи молекулярно-биохимических показателей крови и колоноцитов мышей прикоррекции экспериментального дисбиоза пробиотиками «РиоФлораИммуно Нео»и «Бифиформ»………………………………………….……………………………...594.1 Изменения состояния пристеночной микрофлоры толстого кишечникапри коррекции экспериментального дисбиоза пробиотиками «РиоФлораИммуно Нео» и «Бифиформ»………………………………………...……......594.2 Изменение молекулярно-биохимических показателей крови иколоноцитов при коррекции экспериментального дисиоза пробиотиками«РиоФлора Иммуно Нео» и «Бифиформ»……………………..……………...63Глава 5.

Особенности изменения молекулярно-биохимических показателей кровии ткани толстого кишечника мышей при применении антиоксидантаэмоксипина………...…………………………………………………...………..…….685.1 Изменения состояния пристеночной микрофлоры толстого кишечника имолекулярно-биохимических показателей крови и колоноцитов мышей вусловиях профилактического использования антиоксиданта эмоксипина...695.2 Изменения состояния пристеночной микрофлоры толстого кишечника имолекулярно-биохимических показателей крови и колоноцитов мышей вусловиях коррекции антиоксидантом эмоксипином ………………..………73Глава 6. Особенности изменения пристеночной микрофлоры толстого кишечника,молекулярно-биохимических показателей крови и колоноцитов мышей прикоррекции экспериментального дисбиоза пробиотиком «РиоФлора Иммуно Нео»и антиоксидантом эмоксипином………………………..……....……………………796.1 Изменения пристеночной микрофлоры толстого кишечника мышей прикоррекции экспериментального дисбиоза пробиотиком «РиоФлора ИммуноНео» и антиоксидантом эмоксипином………………………………….…….7946.2 Изменение молекулярно-биохимических показателей крови иколоноцитов мышей при коррекции экспериментального дисбиозапробиотиком «РиоФлора Иммуно Нео» и антиоксидантом эмоксипином...81Заключение…………………………..…………………………………………..….....86Выводы………………………………………………………….…………….…….....94Практические рекомендации…………………………………………………………95Перспективы дальнейшей разработки темы………………………………………...95Список литературы………………....………………………………...…………….....965СПИСОК СОКРАЩЕНИЙАГП – ацилгидроперекисиАОЗ – антиоксидантная защитаАОС – антиоксидантная системаАФК – активные формы кислородаДГ – диацилглицеролыКЛ – кардиолипинКОЕ – колониеобразующая единицаЛФХ – лизофосфатидилхолинМГ – моноацилглицеролыМДА – малоновый диальдегидПОЛ – перекисное окисление липидовСЖК – свободные жирные кислотыСМ – сфингомиелинСОД – супероксиддисмутазаТГ – триацилглицеролыУПМ – условно-патогенные микроорганизмыФИ/ФС – фосфатидилинозитол/серинФХ – фосфатидилхолинФЭ – фосфатидилэтаноламинХС – холестеролЭД – экспериментальный дисбиозЭХС – эфиры холестерола6ВВЕДЕНИЕАктуальность темы исследованияи степень ее разработанностиКишечник человека представляет собой экологическую систему, длякоторой характерно наличие сложного динамического равновесия междусистемами,обеспечивающимигомеостазмакроорганизмаимикробнымиассоциациями, заселяющими его различные биотопы [10, 95].Нормофлора человека выполняет различные жизненно важные функции, втом числе обеспечивает процессы переваривания и всасывания, синтез витаминов,аминокислот,ферментов, оказывает подавляющее действие на патогеннуюмикрофлору,обеспечиваетиммунорегулирующуюфункциюиантиинфекционную защиту, принимает участие в синтезе иммуноглобулинов и вморфогенезе иммунной системы [141, 142, 159].

Микрофлора толстого кишечникасчитается биогенным фактором, в значительной степени определяющимсостояние организма [107, 156].Внормепредставителикишечноймикрофлорынеоказываютотрицательного влияния на макроорганизм, однако нарушение качественногои/или количественного состава нормофлоры, называемое дисбиозом, можетприводить к заболеваниям органов пищеварения, иммунной системы,системыкроветворения, развитию анемии, ферментопатии, гипертрофии[127]. Нарушениесостава микробиоценоза приводит к снижению резистентности организмачеловека кишечным инфекциям [100].Причинами изменений качественного и количественного состава кишечноймикрофлоры являются воздействие на организм различных факторов экзогенногои эндогенного характера (возраста, образа жизни, сезона года, характера питания,в том числе и продолжительный неконтролируемый приём антибиотиковширокого спектра действия) [44, 94, 178].Патологические изменения, развивающиеся при воздействии ксенобиотиков(в том числе антибактериальных препаратов широкого спектра действия) наорганизм,могутрассматриватьсякакпроявлениедезорганизацииего7функционального и структурного состояния, необходимого для нормальнойжизнедеятельности.

Это в свою очередь может приводить к выраженнымнарушениям липидного состава клеточных мембран форменных элементов крови,которые заключаются в изменении соотношения липидных фракций [59, 88, 135].Структурные перераспределения, приводящие к утрате асимметрии мембранныхлипидов клетками, в значительной степени могут сказаться на нарушениифункций биомембраны, ее вязкоэластических свойств,проницаемости, что влечетза собой снижение стабильности мембран клеток крови и может способствоватьнарушению окислительно-восстановительных процессов в организме,развитиюгипоксии[28, 56].Воздействие антибиотиков на организм человека является одним изпровоцирующих факторов образования свободных радикалов – активных частиц снеразделенной химической связью, которые вступают в реакции с различнымимолекулами организма и повреждают их.

Некоторая их часть поступает извне,другая часть образуется в результате химических процессов, протекающих вклетках, что в свою очередь приводит к накоплению продуктов перекисногоокисления липидов (ПОЛ). При липопероксидации в клетках интенсифицируютсяпатологические процессы, приводящие к повреждению мембран, инактивацииили трансформации активности ферментов, накоплению инертных продуктовполимеризации. Одновременно нарушаются процессы регенерации тканей.Регулятором данных механизмов выступает антиоксидантная система (АОС),которая превращает свободные радикалы в безопасные соединения [50, 60, 80].Многочисленные клинико-лабораторные исследования, направленные наизучение качественных и количественных изменений состава микробиоценозатолстого кишечника при дисбиозе, позволили выдвинуть концепцию, согласнокоторойсообществомикроорганизмоввтолстомкишечникечеловекаопределяется индивидуальными характеристиками организма, что фактическиобуславливает индивидуализацию создания и применения лекарственных ипрофилактических препаратов для коррекции дисбиотических состояний [62,199].