Диссертация (Диагностическое значение анализа матриксных металлопротеиназ у детей с расщелиной губы и неба)

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕУЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ ПЕРВЫЙ МОСКОВСКИЙГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ И.М. СЕЧЕНОВАМИНИСТЕРСТВА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ(Сеченовский Университет)на правах рукописиМАРДАНОВАяз ЭльхановичДИАГНОСТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ АНАЛИЗА МАТРИКСНЫХМЕТАЛЛОПРОТЕИНАЗ У ДЕТЕЙ С РАСЩЕЛИНОЙ ГУБЫ И НЕБА14.01.14 – стоматологияДиссертация на соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучный руководитель:Засл. врач России,доктор медицинских наук, профессорМамедов Ад.А.Москва – 20182ОГЛАВЛЕНИЕВВЕДЕНИЕ………………………..………………………………………………….4ГЛАВА 1.

ИММУНОФЕРМЕНТНЫЙ АНАЛИЗ ПРИ РАСЩЕЛИНЕГУБЫ И НЕБА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).1.1.Расщелинагубыинебаэтиология,патогенез,влияниенамакроорганизм………………………………………………………………….111.2.Порокиразвитияматрикснымиорганизмачеловекаассоциированныесметаллопротеиназами, тканевыми ингибиторамиматриксных металлопротеиназ и TGFβ2……………………………………..141.3.Пороки развития, ассоциированные с дисплазией соединительнойтканиудетейсрасщелинойгубыинеба……………………………………………………………………………...221.4. Сроки проведения хирургического вмешательства у детей с расщелинойгубы и неба…………………………………………………………………………….27ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ2.1.

Общая характеристика детей с расщелиной губы и неба……………….302.2.ИммуноферментныйанализММП2,ММП3,ТИМП2,TGFβ2…………………………………………………………………………………..342.3. Статистические методы исследования…………………………………...40ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИСЛЕДОВАНИЯ.3.1. Общая характеристика пациентов с расщелиной губы и неба……,..….423.2. Иммуноферментный анализ матриксных металлопротеиназ 2 типа вмягкихтканяхприрасщелинегубыинеба……………………………………………………………………………...433.3. Иммуноферментный анализ матриксных металлопротеиназ 3 типа вмягкихтканяхприрасщелинегубыинеба……………………………………………………………………………...4933.4.Иммуноферментныйанализтканевогоингибитораматриксныхметаллопротеиназ 2 типа в мягких тканях при расщелине губы инеба……………………………………………………………………………...583.5.

Иммуноферментный анализ тканевого фактора роста бета 2 в мягкихтканях при расщелине губы и неба…………………………………………....63ГЛАВА4.ОБСУЖДЕНИЕПОЛУЧЕННЫХРЕЗУЛЬТАТОВ.ЗАКЛЮЧЕНИЕ………………………………………………………....…………….70ВЫВОДЫ………………………………………………………………………….......82ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ………………………………………….…..83СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ…………………………………………………………..84СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ……………………..…………...85ПРИЛОЖЕНИЯ…………………………….……………………………………......1134ВВЕДЕНИЕАктуальность темы исследованияПо статистическим данным в Российской Федерации врожденная патологиячелюстно-лицевой области занимает 3-5 место среди врожденных пороковразвития человека.

В России в среднем рождается один ребенок с расщелинойверхней губы и неба на 600-1000 новорожденных [123].Анатомические и физиологические нарушения, сопутствующие расщелинегубы и неба, приводят к нарушению жизненно важных, для ребенка, функций,таких как: сосание, глотание, жевание, дыхание, речевой артикуляции. Расщелинагубы и неба является причиной развития у ребенка комплекса неполноценности[62,75,127,182,240].На фоне РГН, развиваются дополнительные функциональные нарушения,связанные с неполноценным развитием различных органов [18, 22, 193, 205, 206].Обусловленноегенетическойпредрасположенностьюкнарушениюмезенхимальной миграции, объясняется образование многочисленных нарушенийразвития макроорганизма ребенка, проявляющиеся после рождения. Данныйпроцессобозначаетсятерминомсоединительнотканнаядисплазия.Соединительнотканная дисплазия формирует внешние фенотипические признакиданного порока и изменение развития внутренних органов [79, 135, 194].На сегодняшний день существует множество мнений о сроках проведенияоперативного вмешательства у детей РГН.

Одни хирурги рекомендуют проводитьпервое вмешательство в 3-6 месяцев, другие старше года. Оперативноевмешательство на твердом и мягком небе порождает аналогичные споры, в связис возможным развитием дефектов и деформаций верхней челюсти.Матриксные металлопротеиназы (ММП) играют важную роль как вфизиологических процессах (ремоделирование ткани, морфогенез, репродукция,эмбриональное развитие,). При патологических состояниях - онкозаболеваниях,заболеванияССС,дисплазиейсоединительной140,141,144,152,166,171,209,216,224,231,242,244].тканиИсследователи[17,25,67,90,уделяютвнимание изучению разных типов матриксных металлопротеиназ – ферментов,5которые отвечают за расщепление компонентов соединительной ткани [27, 28, 37,38, 84, 85, 181, 205, 210, 225].Морфогенез верхней губы и неба представляет собой сложный процесс,связанный с жестко регламентированным взаимодействием между собоймезенхимальныхиэпителиальныхклеток.Генетическиеисследованиядоказывают роль активности матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов впроцессе формирования губы и неба.

УчастиеMMП в формировании губы инеба не вызывает сомнения, более достоверные данные функции MMПотражаются, при изучении изменения уровня их не только в системномкровотоке, а также непосредственно в мягких тканях зоны дефекта, а такжеможно сделать выводы о состоянии соединительной ткани макроорганизма приразличных формах патологии расщелины верхней губы и неба при сравненииполученных результатов.Семейство ММП состоит из более 20 цинк-зависимых эндопептидаз,секретируемых или связанных с поверхностью клетки, субстратами которых,кроме компонентов внеклеточного матрикса, могут служить также другиепротеазы, хемотаксические молекулы, латентные формы факторов роста,растворимые белки, мембранно-ассоциированные белки, связывающий факторроста [238].Активность ММП в межклеточном пространстве специфически подавляетсятканевыми ингибиторами (ТИМП) – структурно родственными белками, три изкоторых (ТИМП-1, 2 и 4) секретируются в растворимой форме, а один (ТИМП-3)– связан с внеклеточным матриксом [213].

Следует отметить что ТИМП2включает в себя свойства и функции всех остальных типов ТИМП.Изучение уровня ММП в тканях расщелины губы и неба позволит намрасширить знания о процессах происходящих в области расщелины губы и неба.Изучение уровня матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов позволит намопределить состояние соединительной ткани у пациентов с расщелиной губы инеба. Знание о уровне матриксных металлопротеиназ при разных формах и6степени тяжести патологии позволит нам скорректировать план лечения, чтоприведет к лучшей реабилитации детей с расщелиной губы и неба.Такимобразомактуальностьисследованияопределяетсяследующимифакторами:1.Значительное количество детей, рождающихся с расщелиной губы и неба от1:1000 до 1 :500.2.Необходимость в ранней реабилитации пациентов с расщелиной губы инеба3.Отсутствием исследований матриксных металлопротеиназ 2, матриксныхметаллопротеиназ 3, тканевых ингибиторов матриксных металлопротеиназ 2,тканевого фактора роста бета 2 при расщелине губы и неба в России, при том, чтопатология соединительной ткани у детей с РГН доказана.4.Необходимостьвобоснованиираннегоподходакоперативномувмешательству у детей с расщелиной губы и небаВ связи с этим цель исследования: Повышение эффективности лечениядетей с расщелиной губы и нёба за счет хирургического лечения в периоденоворожденностиДля достижения цели исследования были поставлены следующие задачи.1.Обосновать ранние сроки оперативного вмешательства у детей срасщелиной губы и неба (РГН)2.(ММП2,Провести оценку экспрессии матриксной металлопротеиназы 2,3ММП3),тканевогоингибитораматриксныхметаллопротеиназ2(ТИМП2), тканевого фактора роста бета 2 (TGFβ2) в зоне патологии.3.Установитьвзаимосвязьэкспрессииизучаемыхбиохимическихпоказателей с разными типами РГН4.Сравнить данные ММП2,3, ТИМП2, TGFβ2 с мягкими тканями изобласти патологии с тканями вне очага патологии.7Научная новизна исследованияВпервые предложен новый подход к раннему оперативному лечениюпациентов с расщелиной верхней губы и неба с использованием данныхполученных о уровне матриксных металлопротеиназВпервыеизученуровеньматриксныхметаллопротеиназ2,3непосредственно в мягких тканях у детей с расщелиной губы и небаВпервые изучен уровень трансформирующего фактора роста бета 2непосредственно в мягких тканях у детей с расщелиной губы и небаВходеисследованиядоказаноизменениеуровняматриксныхметаллопротеиназ 2,3; тканевого ингибитора матриксных металлопротеиназ 2,тканевого фактора роста бета 2 в мягких тканях из очага патологии по сравнениюсо здоровыми тканями вне очага патологии.Впервые обоснованы ранние сроки оперативного вмешательства взависимости от уровня матриксных металлопротеиназ в мягких тканяхрасщелины губы и неба.Практическая значимость работыВ ходе исследования содержания матриксной металлопротеиназы 2,матрикснойметаллопротеиназы3,тканевогоингибитораматриксныхметаллопротеиназ 2, трансформирующего фактора роста бета 2 в мягких тканях,полученных из зоны расщелины, а также исследование содержания данныхферментов вне зоны патологии, проведен сравнительный анализ содержанияданных ферментов.

Полученные результаты являются обоснованием к раннемупроведению оперативного вмешательства у детей с расщелиной губы и неба, чтоспособствует более быстрому и качественному (меньшее рубцеобразование)заживлению, профилактике структурных нарушений и сокращению сроковреабилитации.

Полученные в процессе исследования результаты были внедрены врекомендации к хирургическому лечению пациентов с расщелиной губы и неба.8Основные положения, выносимые на защиту1.При расщелине губы и неба наблюдается достоверное повышение уровняматриксных металлопротеиназ 2 и 3 в зоне патологии по сравнению с здоровымитканями.2.При исследовании мягких тканей, полученных из зоны расщелины губы инеба наблюдается достоверное повышение уровня тканевых ингибиторовматриксных металлопротеиназ 2 в зоне патологии по сравнению с здоровымитканями.3.При расщелине губы и неба наблюдается достоверное повышение уровнятрансформирующего фактора роста бета 2 в зоне патологии по сравнению сздоровыми тканями.4.Установлена достоверная связь уровня матриксных металлопротеиназ 2,3,трансформирующего фактора роста бета 2 и тканевого ингибитора матриксныхметаллопротеиназ 2, между двухсторонней расщелиной неба и другими формамипатологии.5.В связи с высокой активностью биологически активных компонентовсоединительной ткани при расщелине верхней губы и неба имеет смыслпроведение первичного хирургического вмешательства на первом месяце жизниребенка.Личный вклад автораАвтором самостоятельно разработан план, определены цель и задачиисследования, вклад автора заключается в непосредственном участии на всехэтапах процесса получения исходных данных, личное участие в хирургическомлечении и ведении пациентов с расщелиной губы неба, участие в проведениилабораторного этапа исследования, личном участии в апробации результатовисследования, в подготовке основных публикаций по выполненной работе.Внедрение результатов исследования в практикуРезультатыпредставленнойработыиспользуютсявпрактическойдеятельности отделения хирургии и реанимации новорожденных ФГАУ«Научныйцентрздоровьядетей»НИИПедиатрииМинистерства9здравоохранения Российской Федерации, ГБУЗ Морозовская ДГКБ ДЗМ,отделение челюстно-лицевой хирургии, отделение неонатологии, отделениеанестезиологии.Апробация работыСимпозиум по хирургической стоматологии «Современные методы леченияврожденных и приобретенных деформаций челюстей» 20 апреля 2015;Ортопедическая реабилитация дефектов средней зоны лица на краниальныхимплантах.