168691 (Высокоэффективная жидкостная хроматография загрязнителей атмосферного воздуха и воздуха рабочей зоны), страница 4

Предельно допустимая концентрация (ПДК) аверсектина C в воздухе 0,05 мг/куб. м. Класс опасности - первый.

3. Погрешность измерений

Методика обеспечивает выполнение измерений массовых концентраций аверсектина C с погрешностью не более +/- 24% при доверительной вероятности 0,95.

4. Метод измерений

Измерение массовых концентраций аверсектина C основано на получении флюоресцирующих производных авермектинов путем их дериватизации 1-метилимидазолом и трифторуксусным ангидридом.

Последующее количественное определение авермектина B1a, одного из компонентов аверсектина C, проводят методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии с применением флюоресцентного детектора при длинах волн возбуждения и испускания 365 и 470 нм соответственно.

Отбор проб проводится с концентрированием на фильтр.

Нижний предел измерения содержания авермектина B1a в хроматографируемом объеме раствора 0,004 мкг.

Нижний предел измерения концентрации аверсектина С в воздухе 0,025 мг/куб. м (при отборе 140 куб. дм воздуха).

Определению не мешают другие авермектины.

5. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы, реактивы

5.1. Средства измерений, вспомогательные устройства, материалы

5.1.1 Хроматограф жидкостной Du Pont 8800 (США) с флюоресцентным детектором.

5.1.2 Колонка хроматографическая стальная длиной 250 мм и внутренним диаметром 4 мм, заполненная сорбентом Диасорб-130-С16Т с

размером частиц 5 мкм (фирма БиоХимМак, Россия).

5.1.3 Аспирационное устройство ПУ-3Э, ТУ 4215-000-11696625-95.

5.1.4 Весы аналитические ВЛА-200, ГОСТ 24104-88Е.

5.1.5 Меры массы, ГОСТ 7328-82Е.

5.1.6 Фильтродержатель, ТУ 95.72.05-77.

5.1.7 Набор для фильтрации жидкостей, производство НПФ

"Биохром".

5.1.8 Колбы мерные вместимостью 25 и 100 куб. см, ГОСТ 1770-74Е.

5.1.9 Пипетки вместимостью от 1, 2, 5 и 10 куб. см, ГОСТ

29227-91.

5.1.10. Цилиндр мерный со шлифом вместимостью 100 куб. см, ГОСТ

1770-74Е.

5.1.11 Бюксы 50/30, ГОСТ 25336-82Е.

5.1.12 Пробирки с пришлифованными пробками вместимостью 10 куб.

см, ГОСТ 25336-82Е.

5.1.13 Воронка фильтровальная ВФ-20/16, ГОСТ 25336-82.

5.1.14 Центрифуга низкоскоростная ЦЛС-3, ТУ 5-375-4170-73.

5.1.15. Центрифужные пробирки стеклянные вместимостью 5 куб. см с

полиэтиленовыми пробками.

5.1.16. Ультразвуковой диспергатор УЗДН-А, ТУ 25-7401.0127-88.

5.1.17. Холодильник бытовой, ГОСТ 16317-87.

5.1.18. Вакуумный испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

5.1.19. Фильтры АФА-ВП-10, ТУ 95-743-80.

5.2. Реактивы

5.2.1. Авермектин B1, РСО 9340-201-00-494189-99, содержание

авермектина B1a 88,88%.

5.2.2. Аверсектин C, ТУ 9383-009-17266133-97, содержание

авермектина B1a не менее 40%.

5.2.3. Ацетонитрил "для жидкостной хроматографии",

ТУ-6-09-14-2167-84.

5.2.4. Спирт этиловый, х.ч., ТУ 6-0951710-72.

5.2.5. 1-Метилимидазол импортный, фирма Мерк.

5.2.6. Трифторуксусный ангидрид импортный, фирма Мерк.

5.2.7. Спирт метиловый, х.ч., ГОСТ 6995-77.

5.2.8. Вода дистиллированная, ГОСТ 6709-72.

5.3. Допускается применение иных средств измерения, вспомогательных устройств, реактивов и материалов, обеспечивающих показатели точности, установленные для данной МВИ.

6. Требования безопасности

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности,

установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами по ГОСТ 12.1.005-88.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ соблюдают меры противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004-76.

6.3. При выполнении измерений с использованием хроматографа соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019-79 и инструкцией по эксплуатации прибора.

7. Требования к квалификации оператора

К выполнению измерений и обработке результатов допускают лиц с высшим и средним специальным образованием, имеющих навыки работы на жидкостном хроматографе.

8. Условия измерений

8.1. Приготовление растворов и подготовку проб к анализу проводят в нормальных условиях при температуре воздуха (20 +/- 5) ёC, атмосферном давлении 84 - 106 кПа и влажности воздуха не более 80%.

8.2. Измерения на жидкостном хроматографе проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9. Подготовка к выполнению измерения

9.1. Приготовление растворов

9.1.1. Стандартный раствор N 1 авермектина B1a для градуировки с концентрацией 88,8 мкг/куб. см готовят путем растворения точной навески 10 мг авермектина B1 в этиловом спирте в мерной колбе объемом 100 куб. см. Раствор хранят не более 2-х месяцев в холодильнике.

9.1.2. Стандартный раствор N 2 авермектина B1 с концентрацией авермектина B1а 3,52 мкг/куб. см готовят путем разведения 4 куб. см стандартного раствора N 1 в мерной колбе на 100 куб. см этиловым спиртом. Раствор хранят не более 2-х недель в холодильнике.

9.1.3. Раствор элюента готовят смешиванием в мерном цилиндре 98куб. см метилового спирта и 2 куб. см дистиллированной воды.

Непосредственно перед измерением раствор фильтруют с помощью набора для фильтрации.

9.1.4. Реакционную смесь готовят из трифторуксусного ангидрида и ацетонитрила в соотношении 1:2 и помещают ее в холодильник при 0 ёC (смесь готовят в день работы и не хранят).

9.2. Подготовка прибора

Общую подготовку прибора осуществляют согласно инструкции по эксплуатации.

9.3. Установление градуировочной характеристики

Градуировочную характеристику, выражающую зависимость площади пика авермектина B1a (в условных единицах) от количества массы (мкг) авермектина B1а в хроматографируемом объеме пробы, устанавливают по методу абсолютной градуировки с использованием градуировочных растворов. Градуировочные растворы устойчивы в течение недели при хранении в холодильнике. Для построения градуировочного графика отбирают по 2,0 куб. см каждого градуировочного раствора, помещают в центрифужные пробирки и упаривают досуха на вакуумном испарителе. В каждую пробирку с сухим остатком вносят по 0,5 куб. см ацетонитрила, пробирку энергично встряхивают и обрабатывают ультразвуком в течение 30 с. Затем пробирку повторно встряхивают и повторно обрабатывают ультразвуком. В каждую пробирку вносят по 0,05 куб. см 1-метилимидазола. Пробирку закрывают, тщательно перемешивают содержимое в течение 5 - 10 с, обрабатывают ультразвуком, центрифугируют и помещают в холодильник при 0 ёC на 10 минут. После охлаждения в пробирку с образцом вносят 0,15 куб. см охлажденной реакционной смеси. Пробирку закрывают и выдерживают в холодильнике в течение 1 часа. Общий объем раствора пробы после проведения реакции - 0,7 куб. см. Растворы помещают в пробоотборное устройство хроматографа. Условия хроматографирования градуировочных смесей и анализируемых проб:

состав элюента метиловый спирт: дистиллированная вода, 98:2

скорость потока элюента 2,0 куб. см/мин.

объем вводимой пробы 10 куб. мм

длины волн флюоресцентного

детектора 365/470 нм

Время удерживания авермектина B1в 9,7 мин. B1a12,2 мин.

На полученной хроматограмме измеряют площадь пика с помощью интегратора хроматографа (в условных единицах) при анализе 6-и растворов разных концентраций и растворителя, проводя не менее 5-и параллельных определений для каждого раствора, и строят градуировочную кривую зависимости площади пика авермектина B1a от количества компонента в пробе (в мкг). Проверку градуировочного графика проводят при изменении условий анализа, но не реже 1 раза в неделю.

9.4. Отбор проб воздуха

Воздух с объемным расходом 20 куб. дм/мин. аспирируют через фильтр АФА ВП-20. Для измерения 1/2 ПДК достаточно отобрать 140 куб. дм. Пробы можно хранить не более десяти суток в защищенном от света месте. Отбор проб сопровождается составлением акта отбора с указанием, при какой температуре и давлении он проводился.

10. Выполнение измерений

Фильтр с отобранной пробой помещают в бюкс и приливают пипеткой 10 куб. см раствора этанола. Периодически встряхивая, выдерживают раствор в течение 10 мин. Экстракт фильтруют через воронку с пористой пластинкой N 1 или N 2 и сливают в пробирку с притертой пробкой.

Степень экстракции с фильтра 93%. Отбирают 2 куб. см раствора, помещают в центрифужную пробирку и упаривают досуха. Далее проводят химическую трансформацию и хроматографический анализ аналогично тому,как описано в п. 9.3 для градуировочных растворов. Количественное определение содержания анализируемого авермектина B1a в растворе проводят по предварительно построенному градуировочному графику.

11. Вычисление результатов измерений Концентрацию аверсектина C "C" (в мг/куб. м) в воздухе вычисляют по формуле:

а x в x г

C = -------------,

К x б x V x д

где:

а - содержание вещества в хроматографируемом объеме пробы, найденное по градуировочному графику, мкг;

б - объем пробы, взятый для хроматографирования, куб. см;

в - общий объем раствора пробы после проведения химической

реакции, куб. см;

г - объем жидкой пробы после экстракции с фильтра, куб. см;

д - объем жидкой пробы, взятый для упаривания, куб. см;

V - объем воздуха, отобранный для анализа и приведенный к

стандартным условиям, куб. дм (см. приложение 1);

К = 0,4 - массовая доля авермектина B1a в аверсектине C согласно

ТУ 9383-009-17266133-97.

12. Оформление результатов анализа

Результат количественного анализа представляют в виде C +/- ДЕЛЬТА мг/куб. м, Р = 0,95, где ДЕЛЬТА - характеристика погрешности, ДЕЛЬТА = 0,20C + 0,0006.

12.1. Оперативный контроль воспроизводимости

Оперативный контроль воспроизводимости выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно.

Анализируют в соответствии с прописью методики, привлекая различных исполнителей и максимально варьируя условия проведения анализа (партии реактивов, набора мерной посуды и т.д.), и получают два результата C1 и C2 анализов. Результаты не должны отличаться друг от друга на величину большую, чем норматив оперативного контроля воспроизводимости D:

|C1 - C2| <= D.

При превышении расхождения между двумя результатами норматива оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам, и устраняют их. Внутренний оперативный контроль воспроизводимости проводят не реже чем 1 раз в неделю.

12.2. Оперативный контроль точности

Оперативный контроль точности выполняют в одной серии с анализом рабочих проб. Отбирают реальные пробы воздуха из одного традиционного места отбора двумя пробоотборниками одновременно. Затем к одной пробе,

отобранной на фильтр, делают добавку анализируемого компонента дельта

C из раствора, нанося его на фильтр. Результаты анализа C1 без добавки и C2 с добавкой получают по возможности в одинаковых условиях: одним аналитиком, с одной партией реактивов, с одним набором посуды и т.д. Величина добавки дельта C должна соответствовать 50 - 150% от содержания компонента в пробе, а величина C2 не должна выходить за верхнюю границу диапазона измерения. Погрешность процедуры отбора проб контролируют путем поверки используемых пробоотборников. Расчет норматива оперативного контроля погрешности К проводят по характеристике погрешности методики за вычетом характеристики погрешности пробоотборника. Решение об удовлетворительной погрешности принимают при выполнении условия:

|C2 - C1 - дельта C| <= К.

13. Нормы затрат времени на анализ

Для проведения серии анализов из 6-и проб при последовательном

проведении анализов воздуха требуется 9 часов.

Литература

1. Пилипенко А.Т., Пятницкий И.В. Аналитическая химия. В двух книгах: кн..1 – М.: Химия, 1990,-480с.

2. Пилипенко А.Т., Пятницкий И.В. Аналитическая химия. В двух книгах: кн..2 – М.: Химия, 1990,-480с.

3. Васильєв В.П. Аналитическая химия. В 2 ч. Ч. 2. Физико – химические методы анализа: Учеб. для Химко – технол. спец. вузов. – М.: Высш. шк., 1989. – 384с.

4. Столяров Б.В., Савинов И.М., Витенберг А.Г., и др. Практическая газовая и жидкостная хроматография. СПб.: Изд-во С.-Петербург. ун-та, 1998. - 612 с.

5. Лурье Ю.Ю. Аналитическая химия производственных сточных вод / Ю.Ю. Лурье; М.: ХимияЮ, 1984. - 448с.

6. Юинг Г. Инструментальные методы химического анализа / Пер. с англ. М.: Мир, 1989. – 235 с.

7. Стыскин Е.Л., Ициксон Л.Б., Брауде Е.В. Практическая высокоэф­фективная жидкостная хроматография. М.:Химия. 1986. - 288 с.

8. Горелик Д.О., Конопелько Л.А., Панков Э.Д. Экологический мониторинг. В 2 т. СПб.: Крисмас. 2000. - 260 с.

9. Айвазов Б.В. Введение в хроматографию. М.: Высш. шк., - 1983.

10. Гольдберг К.А., Вигдергауз М.С. Введение в газовую хроматографию. М.: Химия, 1990. – 346 с.

11. Хубер. Применение диодно-матричного детектирования в ВЭЖХ. – М.: “Мир”. 1993. - 96 с.

12. П.Е. Белов, Р.Н. Исмаилова Индикат орные трубки для тест-определения ароматических аминов в воздухе рабочей зоны