14619 (Физиология сельскохозяйственных животных), страница 2

2. 3% - раствор NaCl (для разведения эритроцитов) или жидкость Гайема.

3. 3% раствор уксусной кислоты.

Смесители представляют собой капиллярную пипетку с расширением - ампулой, содержащей бусинку, способствующую смешению крови с разводящей жидкостью. Смесители, предназначенные для подсчета эритроцитов, обладают капилляром более тонкого калибра и более объемистой ампулой на них нанесены метки одна - 0,5 другая - перед входом в ампулу - 1.0, третья - у выхода из ампулы - 101.

При набирании крови до метки 0,5 она окажется разведенной в 200 раз, при набирании до 1,0 - в 100 раз. Для разведения эритроцитов применяют 3% раствор поваренной соли или жидкость Гайема, в которой лучше сохраняется форма эритроцитов. Нанесены три метки: 0,5, 1,0 и 11. Это позволяет развести кровь в 10, либо в 20 раз (чаще разводят в 20 раз).

Счетная камера.

Для подсчета форменных элементов наиболее часто применяется камера типа Бюркера с выгравированной на ней сеткой Горяева. Счетная камера состоит из толстого предметного стекла с особым углублением. На дне углубления счетной камеры выгравирована сетка, в клетках которой и подсчитываются форменные элементы. По краям углубления имеются возвышения, куда накладывается покровное стекло. Между нижней поверхностью этого стекла и дном углубления образуется замкнутое пространство, которое и представляет собой счетную камеру. Глубина камеры соответствует 0,1 мм. Счетная камера типа Бюркера разделена пополам глубокой канавкой и имеет на каждой половине сетку Горяева, что позволяет сразу считать 2 капли, не заполняя вновь камеры. Сетка Горяева имеет 225 больших квадратов (15Х15), 25 из которых разделены на малые, по 16 в каждом; имеются также пустые квадраты, собранные в группы по 4 квадрата. Всего в сетке 100 больших пустых квадратов, собранных в 25 групп (5X5). Каждая сторона маленького квадратика равна 1/20 мм, а так как высота камеры составляет 0,10 мм, то объем равен 1/4000 ммЗ.

Ход исследования:

Для подсчета эритроцитов берут смеситель для эритроцитов, надевают резиновую трубочку, легким насасыванием набирают кровь из укола до метки 0,5. Избыток крови удаляют фильтровальной бумагой, после чего кончик смесителя погружают в приготовленный заранее флакон с 3% раствором поваренной соли или раствором Гайема и насасывают раствор, заполняя всю ампулу до метки 101. Тотчас снимают резиновую трубку, зажимают смеситель по длине между большим и указательным или средним пальцем и встряхивают в течение 3 минут. После этого заполняют счетную камеру, сливают 1-2 капли и выпускают последующую каплю на сетку. При работе с пробирками для подсчета эритроцитов, наливают 4 мл 3% раствора поваренной соли или жидкости Гайема и в нее выпускают 0,02 мл. крови, отмеренной пипеткой от гемометра Сали. Для подсчета белых кровяных элементов в пробирку наливают 0,4 мл 3 - 5% раствора уксусной кислоты и 0,02 мл крови. Энергично встряхивают пробирки, затем в жидкость опускают пипетку из гемометра Сали и, набрав содержимое, заполняют счетную камеру.

Заполнение счетных камер:

Хорошо вымытое и вытертое шлифованное покровное стекло накладывают на выступающие боковые края. Мякотью больших пальцев покровное стекло притирают, двигая вверх и вниз, все время плотно прижимая, пока не появятся, так называемые, Ньютоновы кольца. Перед заполнением камеры вновь энергично встряхивают смесители, выпускают 2 капли на фильтровальную бумагу, а третьей заполняют щелку между камерой и покровным стеклом. Жидкость по капиллярности засасывается между ними и заполняет пространство над сеткой. Жидкость при заполнении камеры не должна затекать в желобки, если это стучится, то ее удаляют фильтровальной бумагой.

Подсчет производят спустя 1-2 минуты (когда эритроциты осядут на дно камеры), пользуясь объективом 40Х и окуляром 7X, либо объективом 8Х и окуляром 15Х. Чтобы не сбиться со счета, придерживаются определенной последовательности счета: передвигая из квадрата в квадрат по горизонтали один ряд слева направо, следующий - справа налево. Считают, помимо находящихся внутри квадрата, все эритроциты, лежащие на двух линиях, например, на левой и верхней, и пропускают все лежащие справа и снизу. Считать эритроциты надо в 5 больших квадратах, т. е. в 80 маленьких.

Чтобы избежать неточности, вследствие не вполне равномерного распределения крови в камере, выбирают для подсчета не 5 рядом лежащих квадратов, а продвигаются по всей сетке.

Количество эритроцитов в 1 ммЗ (искомое) вычисляют следующим образом: единицей счета всегда, при всяком подсчете, в любой сетке служит малый квадрат. Объем его, как было указано, равен 1/4000 мм3. Сосчитав эритроциты в 5 больших квадратах (80 малых квадратов), делят это количество на 80 и умножают на 200 (степень разведения крови) и на 4000 (чтобы получить количество клеток во всем кубическом миллиметре); практически, следовательно, полученное число умножают на 10000 (прибавляют четыре нуля).

2. Практическая часть

Согласно исходным данным из РГЗ№1 (см. табл.1), были вычислены данные, указанные в таблице 2.

Таблица 2. Полученные данные РГЗ№1.

Задача 1.

Построить графики зависимости между:

Массой гемоглобина в одном эритроците (х) и концентрацией гемоглобина в цитоплазме эритроцитов (у).

Рис.1. Зависимость между массой гемоглобина в 1 эритроците и его концентрацией в цитоплазме эритроцитов.

Направленность кривой зависимости такова, что мы можем сделать вывод о том, что между массой гемоглобина в одном эритроците и концентрацией гемоглобина в цитоплазме эритроцитов существует прямая (положительная) зависимость, т.е. с увеличением массы гемоглобина в 1 эритроците увеличивается и его концентрация в цитоплазме эритроцита. График не проявляет однородный характер, поскольку на взаимосвязь между этими двумя показателям в организме влияют десятки других факторов, которые практически невозможно учесть.

Объёмом каждого эритроцита (х) и концентрацией в нём гемоглобина (у).

Рис. 2. Зависимость между объёмом каждого эритроцита и концентрацией в нём гемоглобина.

На данном рисунке имеется возможность убедиться, что график также не однородный, но имеет направленность сверху вниз, в отличие от предыдущего. Это означает, что между этими двумя показателями существует зависимость, но не прямая, а обратная (отрицательная).

Объёмом каждого эритроцита (х) и массой гемоглобина в нём (у).

Рис. 3. Зависимость между объёмом отдельных эритроцитов и массой гемоглобина в них.

На полученном графике также получена обратная зависимость, график также не однороден. Следовательно, при увеличении объёма каждого отдельного эритроцита масса гемоглобина в его цитоплазме уменьшается и наоборот.

Задача 2.

Математически рассчитать коэффициент корреляционной взаимосвязи между:

Массой гемоглобина в 1 эритроците и концентрацией гемоглобина в цитоплазме эритроцита.

В начале по каждому показателю определяли сумму (Σ) из 8 значений. По массе Hb Σ=198,5 пг. По концентрации Hb в цитоплазме эритроцитов Σ=242,4%. Затем определяли среднее арифметическое значение 1 и 2-го показателей (М1 и М2), для чего сумму Σ делим на количество измерений (n):

.

После этого во 2-ой колонке вычисляем и записываем отклонение (разницу) каждого конкретного измерения от среднего арифметического (а). Причём отклонение записывалось с учётом знака (+ или -).

Следующий этап – каждое отклонение от средней (а) возводим в квадрат (а12 – по первому показателю и а22 – по второму показателю крови).

Следующий этап – сумма квадратов отклонений (Σа12) и (Σ а22).