Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.1 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 11

1992). гог а 61ясияяюп оГ йе геаяоп ячЬу й)я яЬои16 Ье яо, р!еаяе яее 5ашЬгоо)с ег а1. (1989). 1Г гЬе пю1аг га6о оГ р1аяшЫ чесгог го гаг8ег РХА )я шсоггесг, йеп йе 118агюп геасгюп гпау Вепегасе ап опрея)гаЫу Ь|ВЬ ргорог6оп оГ егор!у р1аяшнЬ 1сопга)пш8 по Гпяегс ас а!1) ог р1аяшнЬ саггуш8 сапдегп шяеггя оГ Гоге)8п РХА. ТЬе пшпЬег оГ !пяеггя 1п еасЬ гесогпЬ)пап! с!опе шияг а1ччауя Ье ча!Ыагег1 Ьу геягпсбоп епйопис!еаяе гпарр!п8 ог Ъу яогпе огЬег гпеапя.

ТЬе опепга6оп оГ гЬе Гоге)8п РМА )пяегс пшяг а1яо Ье аясегга)пей. О!гесГ!опа! С!оп!щ 5о Гаг, яче Ьаче Ьееп с1еа11п8 яч)гЬ 118агюпя ш ячЬКсЬ а11 ВХА гегпиш аге ег!и)ча1епг, ая 1я гЬе саяе ячЬеп ЬогЬ р1аяшЫ апд Гоге)8п РЬ)Ая аге ргераге6 Ьу с1еача8е тч)гЬ а я)п8!е гея!г)с!1оп епхуше. НС1йКЕ 1-4 С1оп)п В)сКгес6опа! 1пяегГ 0МА 1пго а 51п8!е 511е чесгог яег)иепсея аге гергеяепгед Ьу с)аг)гег яЬайп8, апд 1пяегг яег)иепсея Ьу 118Ьгег яЬайп8.

Е22 СЬаргег 1: Р!агт!й алг( ТЬе(г (7ге~и!пея т Мо!еси!аг С!отпК 1п1ептю1еси1аг геасиоп с а 1п1гапю1еси1аг геас!юп е а и НС!1КЕ 1-5 О1гесГ(опа! (Гогсед) С!оп1па 1и Р!аяп(ъ) Чесъога Чес1ог аег(иепсеа аге гергеьепъес( Ьу айаг!ъег аЬаг)1пи, апг(1пьегг вес)иепсеа Ьу 11аЬгег ъЬаъ)!пав. Опе ъчау го !псгеаае йе угеЫ оЕ сггси!аг пюпопъегк гесошЫпапгь !а го иге а с!опшц аггагецу гп ъчЬгсЬ ГЬе Сегпнш гп йе 1!иаъюп геасг!оп аге пог а!1 ег)и!ча1епГ; Еог ехашр1е, ъчЬеп йе Еоге(ап Р!ъ(А Егаишепъ !а ргог)исес( Ьу г!!иезГ!оп ъчиЬ гъчо геьъг!съ!оп епгушеа ъч(ГЬ ъ!(ЕЕегепъ гесоап(Г!оп ьегргепсея 1п гЬ(а саке, йе сегпнш оЕ йе Еоге(ап Е)ХА Егаишепг ъч(11 Ье попсогпр1егпепгагу апг( ипаЫе со 1(саге го еасЬ ойег.

Ноъчечег, гЬе Еоге(ип Е)!ъ)А ъч!11 1!ааге еацег1у го а р!аяп(г! чесгог гЬаг Ьаь Ьееп ргерагес1 Ьу с1еачаие ъчиЬ 1Ье каше гъчо епгугпея иепегаг!пи а ЫОЬ у!е1й оЕ съгси1аг гесошЫпапга синга!и!па а япа1е шаегг ш а ргеъ(еЕгпед ог!епсаг!оп. ТЬ!а ргосеаа ы (гпоъчп аь Еогсеь( 1(аагюп ог г((гесг!опа! с1опшц (р1еаье аее Е!аиге 1-5). С!оп!пц В!опЕ-егъгЕег! О!ЧА Ггартеп(5 ргаишепга оЕЕоге!ип Тг!)А саггу!пи Ыипг-епг(ег( гегпнш шау Ье с1опес) гпсо а 1!пеаг(гес( р1аяп!г! чессог Ъеаг(пд Ыипг епгЬ (р!еаге атее р(циге 1-б).

Е!наг!оп оЕ Ыипг-епг(ег( гегпнп( !а а сошрагаггче!у !пеЕЕ!с!епс геасгюп. ТЬе Ео1!оъч!па аге оргнпа1 сонг!!1!она Еог с!оп(пд Ыипс-епс(ег! Тг)ъ(А Егаашепга (Яаагаше!1а апг1 КЬогапа 1972; 5иагаше11а апг( ЕЬг1!сЬ 1978): ° !оъч сопсепсгаВопь (0.5 шм) оЕ АТР ° гЬе аЪьепсе оЕ ро1уапнпеа ьисЬ аа ьрегпиъ(!пе ° чегу Ь(аЬ сопсепъгагюпь оЕ 1(ааье (50 ъЧе!аь ипЬа/гп1) ° Ь(ЕЬ сопсепггайопь оЕ Ыипг-епъ(еь! гегпиш ТЬе 1аьг сопйг!оп (а гЬе пъа(п 1сеу го аиссеая Аг Ь(иЬ сопсепсгаВопя Ыипг-епъ(ес( Т1ХА аппо!еси!еа Еогш ЕгшгЕи1, !Е гешрогагу, 1(а!аопа гЬаг Ъг!пи гЬегг 5'-рЬозрЬасе апг( 3'-Ьуг!гоху! геа!ъ(иеа !пго с1оье а!фнпепг.

РХА 1!иаье венсен ироп гЬеае хогг-1гчег1 аиЪаггасеа апс1 Еогдеь рег- Еп1трг)исргоп 1.23 Идвге овод Ыдр саосео1гввоов а1 Тв ОГИА вдове б1аае Идв1юп овх еоб аопапое Идвооо 1гепв1ооо Е. соа впб р1в1е оп1о гоебиго соо1еевпд гпе ерргоров1е еоИЬ1о11с еоЬЬ1овс-гевв1еп1 со!оо1ев РИСОКЕ 1-6 С1оп1п 31ипг-епг)ег) Мо!еси1ев Ап01Ь1оГ1с-гев1ИГапГ со!оп1ев аг1ве дие 1о ГЬе ргевепсе о! чесГог гес)ов1п8, чесгог б1гпегв, апд нес1ог-1пвег1 гесогпЬ1папгв. ТЬеве со1оп1ев аге всгеепег) Еог 1Ьове саггугп8 чесГогбгпвегГ гесоп1Ь1папрп 'чесГог вег)иепсев аге гергевепГеб Ьу баг)сег ИЬаб1п8, апд гпвегг вег)иереев Ьу 11881ег ИЬаг)1пд.

пгапепг РЬоврЬойевгег Ьопг)в Ьегччееп геяг)иев оп с!!ЕЕегепг шо1еси1ев. ТЬе геии11!п8 1шеаг, соча!еп11у )огпе11 ЬуЬг)г)в пгау Ье сопчегге11 го сггси1аг гесогпЪгпапг р1авш)г)в сараЫе оЕ ггапвЕогппп8 Е. сой Ьу ап шггапю!еси1аг 1!Ваг!оп геасВоп Ьегнчееп йе Ыипс гепшш. 1деа!!у, 1Ье Вгвг геасгюп сопгагпв ЫВЬ сопсепггаВопв оЕ 13)х)А, ъчЬегеав гЬе весопс! 1чог)св пювг еЕВс!епг1у ъчЬеп гЬе сопсепггагюп оЕ 13ХА 1в 1оъч. 8оше шчевВцагогв йегеЕоге саггу оиг гЬе Вгвг вга8е оЕ йе 118- агюп геасВоп аг Ь18Ь 13ХА сопсепггаг!опв.

АЕгег !псиЬаг)п8 Еог 1 Ьоиг, гЬе геасгюп )в Й1игес) 20- Ео1й чч!ГЬ 118аве Ьийег, вирр!ешепгег! 1ч)ГЬ ЕгевЬ 118аве, апд шсиЪаГег) 1ог а Ешйег 4 Ьоигв (Вегсоч!сЬ еГ а1. 1992; Оапи1с апг! Ви!!ос11 1993). )АгЬеп 13)х)А га 1п ИЬогг вирр!у, гЬе ргоЫеш оЕ агга!и!п8 ас1ег!иаге сопсепсгаг!опв оЕ Ыипг епгЬ сап Ье аше!!огагес! Ьу !пс1ийп8 ш йе геасг!оп пихгиге ииЪвгапсев гЬаг гпсгеаве шасгошо1еси1аг сгончг)!п8 !е.8., 5% ро1уегЬу!епе 8!усо1 8000 [РЕС 8000) ) (РЬе)ЕЕег апс) Хппшегшап 1983; Ъпппегшап апг) РЬе)ЕЕег 1983; !)РсгоЕГ апг! Неа1еу 1987) ог виЪИГапсеи йаГ саиде 13ХА 1.24 Сйартег 1: Р)аьтииЬ аид Тйегт ЕуьеЕи!иеьь ти Мо1еси1ат С!огйи8 тпо1есц1еь со сопдепье !псо а88ге8асеь !е.8., 1.0 тсчс ЬехапшипесоЬа1с сЫогЫе) !КцьсЬе апд Ноъчагд-Р)апдегь 1985). ТЬеье сгоччд!п8 апд сопдепяп8 а8епсь ассе1егасе сЬе гасе оЕ 1!8асюп оЕ Ыипс-епдед РХА Ьу опе со сЬгее огдегь оЕ тпа8пстде, ргопюсе !псеппо1есц1аг 1!Вас!оп, апт1 ьцрргеьь !псгапю1есц1аг 1!8ас!оп !Р1еаье ьее йе гпЕоппасюп рапе1 оп СО!чоЕб!5с!ыС А!ьП) СКОЪЧ0СЬ!С КЕАСЕ1ЧТ5).

Реьр!се Ьь расчет апд цьеЕц1пеьь, с!отп8 !п р1аяпЫ честить ть Ьаьед оп а гегпагКаЫу ьпса11 пшпЪег оЕ Ьаяс тейодь, ччЬ!сЬ аге еаьу со таьсег. Ргососо!ь 17 апд 19 деьспЬе Ецпдатепса1 сесЬпсс)цеь Еог )ошш8 р1аяпЫ чессогь со РХА Ега8тепсь чч!сЬ ргосгцд!п8 епдь апд Ыцпс епдя Ргососо)ь 18, 20, 21, апд 22 деьспЬе чапоць ьсгасе8!еь Еог орсиппдп8 сЬе гесочету оЕ йе арргорпасе гесотпЬспапс. ТЬеье сесЬп)т!цеь, еасЬ опе ятпр1е ш 1сье)Е, сап Ъе ччочеп со8ейег со Ьш!д гесотпЪтпапс р!аяпсдь оЕ сотпр!ех Ьеацсу апд ЬтВЬ юрЬгьска6оп. РЙЕРАЙАТ!О)ч! А)ь)0 ТЙАй)йГОЙМАТЮХ ОГ СОМРЕТЕ!ЧТ Е. СОВ !ь)цс1е!с асЫь до пос епсег Ъассепа цпдег сЬе!г оччп роччег, Ьш гет)шге аьяьсапсе сгачегяп8 йе ошег апд !ппег се11 тпетЬгапеь апд тп геасЬ)п8 ап шсгасе1!и1аг ясе ччЬеге йеу сап Ъе ехргеььет1 апд гер!касед.

ТЬе тесЬодь йас Ьаче Ъееп деч!ьед со асЬтене йеье 8оа)ь Еа11 !псо сччо с!аььея сЬеписа! апс1 РЬуяса1. СЬеспссса! МеЕ!сосЬ Е. сой се1!ь ччаьЬед ш сосЫат1ь оЕ ьппр1е ьа1с ю!ц6опь асЬсече а ьсасе оЕ сотресепсе дцпп8 ччЬ)сЬ РХА то!есц1еь тау Ье адпипед со сЬе сеП.

Моьс оЕ йе сЬеписа1 тпесЬодь сцггепс1у цьет1 Еог Ъасгепа1 СгапьЕоппаСюп аге Ьаьет1 оп йе оЬьегча6опь оЕ Мапде1 апт1 Н!Ва (1970), ъчЬо ьЬоччес1 сЬас Ъассепа сгеасет1 чдй ке-соЫ ю!ц6опь оЕ СаС!, апт1 йеп Ьг!ес)у Ьеасед со 37"С ог 42"С сои1д Ье сгапьЕессет1 чдсЬ ЬассегюрЬа8е ). РЫА. ТЬе ьатпе тесЬод ьчаь ьиЬьесрлепс!у цьед со сгапьЕопп Ьассепа чдсЬ р1аяпЫ РХА !СоЬеп ес а!. 1972) апд Е. сой сЬгопююта! РХА !О!ьЬ1 апд Соь1оу 1972).

ТЬ!ь ятр1е апт1 гоЪцьт ргоседцге ге8ц1аг1у 8епегатеь Ъестчееп 1Оь апт1 1Оь СгапьЕоппед со1оп!еь оЕ Е. сой рег )т8 оЕ ьцрегсойед р1аьтЫ Р)ь)А. ТЬ!ь !ь тоге сЬап епоцВЬ Еог гоцбпе саь)ть ьцс!с аь ргора8абп8 а р!аяпЫ ог сгапьуегпп8 а р)аяпЫ !тот опе ьсгаш оЕ Е. сой со апосЬег. Ноччечег, Ь!8Ьег ейк!епс!еь оЕ сгапьЕоппа6оп аге тес)шгед ччЬеп гесочегу оЕечегу роьяЫе с!опе 1ь оЕ рагапгоцпс ппрогсапсе, Еог ехатр!е, ччЬеп сопьсгцсс)п8 сРХА 1!Ьгапеь ог ьчЬеп оп1у тшцСе апюцпгь оЕ Еогег8п Р!ч)А аге ачаг!аЫе.

5тагг!п8 ш йе 1970ь апт1 соп6пшп8 Со СЬ)ь т1ау, тпапу чапатюпь оп СЬе Ъаяс СесЬп!т)це Ьаче Ъееп т1еьспЪес1 !п СЬе 1!Сегасцге, аП д!гестед Соьчагд орипихш8 йе ердстепсу оЕ сгапьЕогтас!оп оЕ д)ЕЕегепс Ьассепа1 ьсгашь Ъу р!аяпЫь. ТЬе чапа6опь шс1цт1е цяп8 сотпр1ех сосЫат1ь оЕ д!ча1епс са6опь ш д)ЕЕегепс ЬцЕЕегь, сгеа6п8 се11ь чдс!с гедцсш8 а8епсь, ад)ць6п8 йе !п8гед!епсь оЕ йе сосЫа!1 со сЬе 8епебс сопьбси6оп оЕ рагскц1аг яга!пь оЕ Е. сой, Ьагчеьбп8 сеНь ас ьрес!Етс ьса8еь оЕ сЬе 8гоччсЬ сус1е, а1сегш8 йе сетрегасцге оЕ 8гоччсЬ оЕ сЬе сц1тцге ЬеЕоге ехроьцге Со сЬеписа1ь, орСиппдп8 йе ехСепС апд СетрегаСше оЕ Ьеас ьЬос)т, Егее6п8 апс1 сЬачдп8 се11ь, апт1 ехроь!п8 се1!ь со ог8ашс ьо1чепсь аЕсег тчаьЬ|п8 ш д)ча)епс сасюпь. Ву а!! йеье сгеасгпепсь апд тпоге, Ь 1ь почч роьяЫе оп а гоц6пе Ьаяь со асЬ!ече сгапьроппасюп Егес!цепс)еь гап81п8 !тот 10ь со 10' сгапьЕоппапсьЕ)т8 оЕ ьирегЬейса1 р1аяпЫ РХА (Еог геч)еьчь, р!еаье ьее НапаЬап 1987; НапаЬап еС а1.

1995; НапаЬап апд В1оотп 199б; Неп8еп 199б). ТЬе ипргочетепсь ш сгапьЕоппа6оп Егес!цепсу аге а спЬцсе со йе роччег оЕ етпргпса1 ехрегипепса6оп. Ночч йеье сотЬтпа6опь оЕ сЬеписа! а8епсь апт1 РЬуяса1 сгеастепсь !пдцсе а ьсасе оЕ сопсресепсе геташь аь оЪьсиге сот1ау аь !п Мапс1е1 апд Н!Ва'ь 6те, аь доеь сЬе тпесЬа- 1пггог)исг)оп 1.25 тяп Ьу гнЬкЬ р1аяп)с) РХА епгега апг! еяаЫ)аЬеа 1ье1Е ш со|пре|еп| Е.