Диплом по аналитической химии "Новые оптические индикаторные системы для мультиплексного определения маркеров нейромедиаторного обмена" - 2015.
Оглавление
ВВЕДЕНИЕ 4
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 6
Глава 1. Метаболизм катехоламинов и диагностика заболеваний по изменению их содержания в биологических объектах 6
Глава 2. Методы пробоподготовки биологических жидкостей и выделения катехоламинов из матрицы реальных объектов 13
Глава 3. Методы определения катехоламинов в биологических объектах 22
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ 56
Глава 4. Исходные вещества, посуда, аппаратура, обработка результатов измерений, методики эксперимента 56
4.1. Исходные вещества 56
4.2. Посуда и аппаратура 57
4.3. Методики эксперимента 57
4.4. Обработка результатов измерений 59
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 60
Глава 5. Выбор условий получения флуоресцентных производных катехоламинов и их метаболитов с мезо-1,2-дифенилэтилендиамином и бензиламином 60
5.1. Выбор биокатализатора для дериватизации КА и их метаболитов 62
5.2. Иммобилизация пероксидазы из корней хрена в лунках полистирольного планшета 63
5.3. Выбор условий проведения реакций дериватизации и регистрации аналитического сигнала для определения флуоресцирующих производных КА и их метаболитов 63
5.4. Влияние на интенсивность флуоресцентного сигнала органических и мицеллярных сред 68
Глава 6. Мультиплексное определения КА и их метаболитов 70
6.1. Разработка методик определения КА и их метаболитов 70
6.2. Изучение влияния матричных компонентов мочи на определение КА и их метаболитов 77
6.3. Определение дофамина в реальном объекте 81
Глава 7. Перекрестная селективность определения дофамина в присутствии других катехоламинов и их метаболитов 85
ПРИЛОЖЕНИЕ 96
ВЫВОДЫ 100
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 102

ВВЕДЕНИЕ

Нейромедиаторный обмен (или метаболизм катехоламинов) составляет основу нервной медиации, как периферической, так и центральной нервной систем.
Катехоламины, такие как дофамин (ДА), эпинефрин или адреналин (АД), норэпинефрин или норадреналин (НА), серотонин и их производные, являются биологически активными веществами, участвующими в регуляции нервной деятельности, сердечно-сосудистой системы, системы липопероксидации, в энергетическом обмене и сократительной способности миокарда, в микроциркуляции и снабжении тканей кислородом, в регуляции эмбриогенеза.
В связи с тем, что количество катехоламинов и их метаболитов в норме и при патологии различно, их возможно использовать в качестве диагностических маркеров как при проведении фундаментальных исследований, так и в клинической практике. Уровень НА в плазме крови позволяет прогнозировать течение заболевания у пациентов с нарушениями в работе сердечно-сосудистой системы. Соотношение катехоламинов и метаболитов в моче используют для диагностики опухоли надпочечников – феохромоцитоме. Показано, что нарушение в синтезе и метаболизме катехоламинов связано с этимологией депрессии и сопутствующих ей состояний. Сложность определения катехоламинов в плазме крови и других биологических жидкостях на сегодняшний день обусловлена тем, что у здорового человека их концентрации очень низки (на уровне 1 нМ), а при различных патологических нарушениях их концентрация в биообъектах в ряде случаев снижается еще на порядок. При этом следует учитывать, что в крови они быстро окисляются моноаминоксидазами тромбоцитов, в связи с этим определение маркеров нейромедиаторного обмена в организме (особенно при развитии кризисных состояний) должно быть очень быстрым (в течение 15 – 30 мин). Современные инструментальные методы анализа, к сожалению, не решают эту проблему комплексно: высокая чувствительность и селективность метода ВЭЖХ с масс-спектрометрическим (МС) детектированием не обеспечивает нужной экспрессности, а ферментативные биосенсоры и иммунохимические методы определения указанного класса аналитов не обеспечивают нужной чувствительности и воспроизводимости полученных результатов. В связи с этим, целью настоящей работы являлось создание новых мультиплексных биораспознающих флуоресцентных индикаторных систем для разработки высокоэкспрессных, чувствительных и селективных методик для определения катехоламинов и их метаболитов в биологических объектах без предварительной или с минимальной пробоподготовкой.