Глик, Пастернак - Молекулярная биотехнология - 2002 (947307), страница 180
Текст из файла (страница 180)
Клонирование структурных генов эукариот........70 13 71 71 74 Глава 1.Молекулярно-биотехнологическая революция.. Технология рекомбинантных ДНК........... Возникновение молекулярной биотехно- логии. Коммерциализация молекулярной био- технологии Надежды и опасения .....,...........„„„,.„„„.. Заключение .. Литература Контрольные вопросы............„................. 15 15 очень крупных фрагментов ДНК.................76 Генетическая трансформация прокариот ........76 16 19 20 22 23 23 Глава 2.
Биологические системы, использу- юп1иеся в молекулярной биотехнологии ............24 80 80 80 .85 .86 нуклеотидов . Синтез генов .. М етоды секвенирования ДНК .........................88 Дидезоксинуклеотидный метод секве- нирования ДНК ............................................89 29 29 32 Глава 3. ДНК, РНК и синтез белка ........... Структура ДН К. Репликация. Расшифровка генетической информации РНК и белок. Трансляция. на основе фага М13.......................................91 Праймер-опосредованная прогулка ............93 Полимеразная цепная реакция .............,..........94 33 38 Регуляция транскрипции у бактерий ...............41 Регуляция транскрипции у эукариот ...............45 Заключение.
.47 вечаюших концам молекул мРНК,...............98 Синтез генов с помощью ПИР ...................102 Заключение .102 103 Литература .... 104 Глава 4, Технология рекомбинантиых ДНК ......50 .....50 .....56 .....58 105 105 От редактора перевода..................... Предисловие Предисловие к первому изданию.... Прокариоты и эукариоты .................. Езсоепс61а сой, Яассяаготусез сегеияае ...............,,... Культуры эукариотических клеток ...
Заключение. Литература Контрольные вопросы....................... Литература Контрольные вопросы .... Рестрицирующие эндонуклеазы ... Плазмидные векторы..................... Плазмидный вектор рВК322...... Трансформация и отбор ............ ,....24 .24 .....27 .28 .28 .....28 Другие плазмидные векторы ..... Создание н скрининг библиотек... Иммунологический скрининг ..... Скрининг по активности белка ... Векторы для клонирования крупных фраг ментов ДНК.
Векторы на основе бактериофага Х........ Косм иды. Векторные системы для клонирования Перенос ДНК в Е. сой..... Электро пор апия.............. Конъюгация . Заключение Литература . Контрольные вопросы........ Глава 5. Химический синтез, определение нуклеотидной последовательности и ампли- фикация ДНК. Химический синтез ДН К .......................... Фосфорамидитный метод......................
Применение синтезированных олиго- Секвенирование ДНК с помощью вектора Получение с помощью ПЦР кДНК, от- Контрольные вопросы ........................ Глава 6. Оптимизация экспрессии генов, клонированных в прокариогических системах.. Экспрессия генов при участии сильных регулируемых промоторов ..... „................. .....76 .....76 .77 .78 .„..79 Оглавление 107 !08 109 !51 !54 155 !56 !!1 112 112 113 115 117 118 122 122 !63 .130 .131 ....
133 168 170 135 136 ....! 74 .175 .175 ....176 141 !42 143 ....181 ....182 145 146 149 Регулируемые промоторы ...................... Получение больших количеств белковых продуктов . Крупномасштабные системы...,....,..„,. Использование для экспрессии других и икроор> ан измов.................................., Химерные белки Расщепление химерных белков ............. Применение химерных белков .............. Включение белков в поверхностные струк- туры ..
Однонаправленное тандемное расположение генов....,....................,....... Трансляционные экспрессирующие векторы .. Стабилизация белков...................................... 121 Рост в условиях недостатка кислорода...........122 Применение хозяйских шиммов с дефицитом протеиназ .................................... Бактериальный «гемоглобин»....,...„.... Интеграция чужеродной ДНК в хромосо- му хозяина. .
123 Повышение эффективности секреции.......126 Метаболическая пере>рузка ...........................127 Заключение Литература. Контрольные вопросы ... Глава 7. Получение рекомбннантных белков с помощью эукарнвтнческнх систем .... Системы экспрессии Бассйаготусез сеге- у>з>ае. Векторь> для Х сегег>иае ...,.........,........,...137 Прямая экспрессия в Х сегеу>з>ае ...............137 Секреция гетерологичных белков, синте- зируемых 5. сегеу>з>ае ..................................! 39 Другие дрожжевые системы экспрессии........140 Синтез поверх>юстного антигена вируса гепатита В .......
Синтез бычьего лизоцима С2 ............... Системы экспрессии с использованием культур клеток насекомых........................ Система экспрессируюших векторов на основе бакуловирусов ................................. 144 Получение рекомбинантных бакуловирусов. Создание челночного вектора на основе бакуловирусов для Е сой и клеток насекомых Выделение рекомбинантного белка из клеток насекомых с помощью аффинного связывания Экспрессирующие векторы для работы с клетками млекопитающих....................... Селективные маркерные гены .............. Экспрессия двух клонированных генов в одной клетке млекопитающих ...........
Заключение Литература . Контрольные вопросы .............................. Глава 8. Направленный мутагенез н генная инженерия белков ....,....................................158 Направленный мутагенез: методика ..............158 Олигонуклеотид-направленный мугагенез с использованием ДНК Фа>а М13 ..............159 Олигонуклеотид-направленный муга>свез с использованием плазмидной ДНК ..........161 Олигонуклеотид-направленный мугагенез с использованием П ЦР-амплификацни ....... 163 Случайный мутагенез с использованием «вырожленныхь олигонуклеотидных прай- меров Случайный мутагенез с использованием аналогов нуклеотидов............................,...,166 Генная инженерия белков ..............................!68 Образование дополнительных дисульфид- ных связей .. Замена аспарагина на другие аминокис- лоты ..
Уменьшение числа свободных сульфгид- рильнь>х групп .........,........,.......,................170 Повышение ферментативной активности .....171 Изменение потребности ферментов в ме- таллических кофакторах ............„,.......,......172 Изменение специфичности Фермента........173 Повышение стабильности и специфич- ности фермента .......... Заключение Литература . Контрольные вопросы ... ЧАСТЬ Н МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОТЕХНОЛОГИЯ МИКРОБИОЛОГИЧЕСКИХ СИСТЕМ ....,..179 Глава 9.
Молекулярная диагностика ... Методы иммунодиагностики.............. Ферментнь>й иммуносорбентный анализ.....! 82 Моноклональные антитела.........................184 Образование и отбор гибридных клеток ....185 Идентификация гибридных клеточных ли- ний, секретирующих специфические ан- титела . 586 Оглавление 187 Пептцлные вакцины 231 ....188 ....188 Генная иммунизация 233 А 234 ттенуированные вакцины ............................ Противохолерные вакцины ........................235 Противосальмонеллезные вакцины ...........236 Противолейшманиозные вакцины ........, ...237 Выявление Тгурапозата сгип ......................189 Н ерадиоактивные методы детекции...........190 Геномная дактилоскопия............................192 Использование полиморфныхДНК-маркеров ....194 «Векторные» вакцины 238 Молекулярная диагностика генетических заболеваний . Серповидноклеточная анемия................
Метод ПЦР/ЛО 3 Генотипирование с использованием флуо- ........................238 Противобактериальные вакцины ...............242 ресцентно меченных ПЦР-праймеров .......198 Мутации в разных сайтах одного гена........199 Перспективы ... . 201 .201 .202 Глава 12.Использование рекомбинантиых микроорганизмовдля получения коммерчес- Заключение Литература Контрольные вопросы .. ......203 ких продуктов 247 Глава 10. Микробиологическое производство 250 лекарственных средств ....................................204 Лекарственные препараты..............................204 Выделение кДНК интерферонов................204 Синтез 1.-аскорбиновой кислоты ..........,..„250 Синтез индиго...................................,.........252 Синтез аминокислот ...................................255 Интерфероны человека, полученные ме- 257 Антибиотики толом генной инженерии ..........................207 Гормон роста человека, полученный ме- 259 259 тиков.
Синтез новых антибиотиков................... Разработка новых методов получения по- толом генной инженерии ..........................208 Оптимизация генной экспрессии...............208 .209 .209 Ферменты. ДНКаза 1. ликетидных антибиотиков..........................260 Усовершенствование производства анти- 209 А тьгинат-л паза 263 .266 Моноклональные антитела как лекарственные средства. Структура и функции антител .............. 210 211 Профилактика отторжения трансплантированных органов ..................................
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
