93725 (681594), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Необходимое оснащение.
-
Шприцы одноразовые 20-граммовые (для детей 10-граммовые) с иглами для венепункции. Запрещается использовать шприцы со «стерильного стола» в перевязочной, проверять проходимость иглы, просасывая через нее воздух.
-
Флаконы с питательными средами: среда для аэробов и факультативных анаэробов + среда для облигатных анаэробов (например, двойная среда + среда СКС) или универсальная среда для аэробов и анаэробов. Предпочтительно использовать промышленно произведенные среды, разрешенные к применению. При использовании изготовленной в лаборатории среды СКС в качестве индикатора анаэробиоза в нее добавляют резазурин, который краснеет в присутствии кислорода. В случае покраснения более 20% верхней части столбика среду регенерируют прогреванием в течение 20 минут в кипящей водяной бане. Регенерацию можно провести лишь однократно. При отсутствии резазурина среду регенерируют перед посевом в обязательном порядке. Оптимальным средством отбора пробы венозной крови являются вакуумные двухфазные флаконы к аппарату Бактек (Bactec).
-
70° этиловый спирт.
-
2% или 5% настойка йода.
-
Венозный жгут.
-
Резиновые (латексные, виниловые) перчатки.
-
Спиртовка (только при использовании флаконов со средами, изготовленными в лаборатории).
Взятие исследуемого материала.
Манипуляции проводят с соблюдением правил асептики. Кровь берут у постели больного или в перевязочной (процедурной) и тут же засевают на питательные среды. Рекомендуется осуществлять эти процедуры вдвоем. Один медицинский работник проводит обработку кожи больного, венепункцию и взятие крови, второй, в это время открывает над пламенем спиртовки пробки флаконов со средами, подставляет их под струю крови из шприца, обжигает горлышки флаконов и закрывает их.
Кровь для исследования получают путем венепункции.
Порядок обработки кожи и взятия крови следующий:
-
кожу над пунктируемой веной обрабатывают 70° спиртом;
-
наносят 2-5% йодную настойку, круговыми движениями, начиная от центра, в течение 30 сек.;
-
после высыхания йодной настойки проводят венепункцию;
-
пальпировать сосуд в районе введения иглы после обработки кожи нельзя;
-
протирают кожу 70° спиртом.
У взрослых кровь берут в объеме 10-20 мл, у детей — в зависимости от возраста.
Сразу после взятия кровь засевают на питательные среды. Соотношение крови и среды должно быть 1/10—1/60 для устранения бактерицидного действия крови путем ее разведения. Техника посева зависит от вида используемых питательных сред.
При использовании сред лабораторного приготовления, расфасованных во флаконы с целлюлозными (ватными) пробками, посев проводят следующим образом:
-
снимают иглу со шприца;
-
над пламенем спиртовки открывают флакон;
-
вносят половину крови из шприца во флакон;
-
обжигают горлышко и пробку флакона в пламени спиртовки;
-
закрывают флакон пробкой;
-
осторожно, чтобы не замочить пробку, перемешивают содержимое флакона круговыми движениями;
-
вторую порцию крови из шприца вносят во второй флакон, повторяя указанные операции.
При использовании флаконов со средами промышленного изготовления во флаконах с резиновыми либо пластиковыми пробками:
-
при наличии на флаконах защитных колпачков их удаляют (отгибают), не открывая при этом пробки;
-
пробки флаконов обрабатывают 70% этиловым спиртом (использование йодной настойки определяется рекомендациями производителя сред);
-
кровь в равных объемах вносят в «аэробную» и «анаэробную» питательные среды, проколов при этом пробки флаконов. Если предполагается проведение бактериоскопического исследования, дополнительно готовят препарат «толстая капля» и мазок.
Для приготовления мазка каплю крови диаметром 2—3 мм наносят на обезжиренное предметное стекло вблизи от торца. Перед каплей крови ставят под углом 45° одноразовый пластиковый шпатель для растяжки мазков или стекло со шлифованным краем и плавным движением равномерно распределяют материал по поверхности.
Для приготовления препарата «толстая капля» на стекло наносят каплю крови диаметром около 5 мм и распределяют ее с помощью иглы или пипетки в диск диаметром 10—15 мм. Толщина капли должна позволять видеть через нее газетный шрифт. Иногда мазок и препарат «толстая» капля готовят на одном стекле. Для этого на поверхность приготовленного как описано выше мазка до его высыхания наносят еще одну каплю крови. Она, как правило, сама растекается в правильный диск необходимой толщины.
Препараты высушивают («толстая капля» сохнет 2—3 часа) и доставляют в лабораторию в специальном планшете для хранения и транспортировки стекол с соблюдением необходимой осторожности. Посевы крови немедленно доставляют в лабораторию, оберегая от охлаждения.
Бактериологическая лаборатория при исследовании посевов крови выдает отрицательный ответ в случае, если рост микроорганизмов не обнаружен в течение 10 дней инкубации. В случае наличия у больного подозрения на внутрисосудистую инфекцию или бруцеллез возникает необходимость пролонгированной (до 1 месяца) инкубации посевов. Это должно быть особо отмечено в направлении. Рутинный посев крови не обеспечивает выявления ряда микроорганизмов.
4.2 Ликвор
Показания к проведению исследования: подозрение на нейроинфекцию. При подозрении на гнойный менингит в обязательном порядке в лабораторию направляют:
-
Ликвор для первичного посева, бактериоскопии и серологических исследований в количестве не менее 1,0 мл.
-
Ликвор в 0,1% полужидком агаре (среда «обогащения»).
-
«Толстая капля» крови для бактериоскопии.
-
Кровь в жидкой питательной среде или в 0,1% полужидком агаре (среда обогащения) для бактериологического накопления культуры: 5,0 мл крови засевают в 50,0 мл среды обогащения.
-
Кровь в количестве не менее 2-х мл для серологических исследований (РПГА, ВИЭФ, ЛА и др.).
Необходимое оснащение:
-
Игла для люмбальной пункции.
-
Мандрены.
-
Анестетик.
-
70° этиловый спирт.
-
2% или 5% настойка йода или другой антисептик, разрешенный к применению.
-
Перевязочный материал.
-
Стерильные пластиковые пробирки, лучше центрифужные с завинчивающимися крышками.
-
Шоколадный агар (желательно).
-
0,1% полужидкий агар.
Взятие исследуемого материала:
Ликвор получают путем люмбальной пункции. Желательно взять материал сразу при поступлении больного в стационар, до начала лечения.
Пункция и взятие материала проводятся с соблюдением всех правил асептики, персонал работает в масках.
•Больной укладывается в положение на боку, головной конец кровати максимально опущен, голова прижата к груди, ноги — к животу, спина максимально согнута.
Определяются необходимые для выбора места пункции анатомические ориентиры. Пункцию проводят между поясничными позвонками L3-L4, L4-L5 или пояснично-крестцовыми L5-S1.
Обрабатывают область пункции сначала раствором антисептика, а затем 70° спиртом.
•Пальпируют рукой в стерильных перчатках точку пункции и вводят раствор анестетика.
Проводят пункцию иглой со вставленным мандреном до ощущения «провала».
Извлекают мандрен.
•Первую порцию ликвора берут в отдельную пробирку для проведения общего ликворологического исследования. Вторую порцию, предназначенную для бактериологического исследования, собирают в стерильную центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой.
Согласно МУК 4.2.1887—04 ликвор после пункции распределяют следующим образом:
-
1,0 мл направляют в клиническую лабораторию для проведения общего ликворологического и цитологического исследования;
-
0,2 мл направляют для постановки полимеразной цепной реакции (ПЦР);
-
1,0 мл направляют для первичного бактериологического посева (если не сделан в отделении при пункции), бактериоскопии и серологических исследований; для бактериологического и бактериоскопического исследований отбирается либо вторая порция ликвора, либо самая мутная из всех. Ее отбирают в стерильную, желательно центрифужную пробирку с завинчивающейся крышкой;
-
0,5 мл засевают в чашку с «шоколадным» агаром непосредственно у постели больного. Далее чашку хранят в условиях термостата при 37°С до доставки в лабораторию;
-
0,5 мл засевают в 5,0 мл 0,1% полужидкого питательного агара непосредственно у постели больного и далее хранят при +37°С в условиях термостата до доставки в лабораторию;
Касаться руками краев канюли, иглы, пробирки, класть пробку — нельзя.
Доставлять материал в бактериологическую лабораторию лучше в термостатированной переноске (сумке) на грелке с водой + 37—38°С; в отсутствие возможности немедленно доставить материал в лабораторию, его лучше поместить в транспортную систему со средой Эймс (с углем или без него) и тогда его можно хранить в термостате до 48 часов. Доставка материала в транспортной системе должна производиться также с обеспечением мер поддержания температуры +37°С.
При необходимости проведения вирусологических исследований пробы ликвора в стерильной пластиковой пробирке помещают в холодильник при температуре +2...+8°С или замораживают.
При получении материала пункцией боковых желудочков мозга, ликвор из шприца, предварительно сняв иглу, вносят в стерильную пробирку над пламенем спиртовки, обжигают горлышко стеклянной пробирки и пробку в пламени спиртовки.
4.3 Отделяемое из верхних дыхательных путей
Посев материала из глотки, носа и ротовой полости только на 5% кровяной агар. Основным возбудителем бактериальных инфекций верхних дыхательных путей, включая скарлатину, тонзиллиты, фарингиты и пр. является Streptococus pyogenes.
Для выявления таких видов микроорганизмов, как менингококки, дифтерийная палочка, гемофильные бактерии, о необходимости которого врач должен проинформировать лабораторию, для посева будут использованы специальные питательные среды.
Диагностика некоторых специфических форм ангин осуществляется с помощью бактериоскопического исследования. Микроскопия мазков необходима при диагностике ангины Людвига (тяжелая гнилостно-некротическая флегмона полости рта полимикробной этиологии) и ангины Симановского-Плаута-Венсана (некротическая ангина, вызываемая симбиозом Fusobacterium DPP. и Treponema vincentii).
4.3.1 Мазок со слизистых передних отделов полости носа
Показания к проведению исследования: диагностика стафилококкового бактерионосительства.
Необходимое оснащение: стерильный зонд-тампон из вискозы на пластиковой оси в пластиковой пробирке (тубсер).
Взятие исследуемого материала:
Материал забирается одним сухим вискозным тампоном тубcера из двух носовых ходов, помещается обратно в стерильную сухую пластиковую пробирку и возможно быстро доставляется в лабораторию, так как должен быть засеян на питательные среды в течении. При отсутствии вышеупомянутых промышленно произведенных изделий для взятия материала можно использовать стерильный зонд-тампон в индивидуальной упаковке и стерильную емкость (пробирку) для его транспортировки в лабораторию (не более 2-х часов с момента взятия пробы).
4.3.2 Соскоб со слизистых передних отделов полости носа
Показания к проведению исследования: озена, риносклерома.
Необходимое оснащение:
-
Стерильная пластиковая бактериологическая петля или стерильный зонд-тампон в пластиковой пробирке (тубсер); или транспортная система со средой Стюарт или Эймс.
-
Носовое или носоглоточное зеркало.
Взятие исследуемого материала:
В случае инфильтрационной формы риносклеромы материал берут с помощью стерильной пластиковой бактериологической петли и носового или носоглоточного зеркала прямо с инфильтрированной слизистой, слегка повреждая ее. У больных озеной или атрофической формой риносклеромы взятие материала проводят петлей либо стерильным зондом-тампоном, причем последнее предпочтительнее. При всех видах и формах клебсиеллезной инфекции одновременно следует осуществлять забор материала из обеих половин носа и глотки, а при локализации процесса в гортани, трахее и бронхах — методом кашлевых пластинок.
Материал доставляется в лабораторию в течение 2 часов.
4.3.3 Слизь из носоглотки и носа
Показания к проведению исследования: подозрение на дифтерию.