90993 (679615), страница 5

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 5)

Коэффициент окислительного стресса в результате применения флавоноидов, СЭ и карсила значительно уменьшился по сравнению с животными, получавшими только алкоголь (таблица 4). При введении флавицина и СЭ он был даже ниже 1. Наиболее высокие показатели коэффициента окислительного стресса, как и в опытах с поражением печени СС1₄, имели животные, получавшие гесперидин (3,26) и карсил (3,2), для которых установлена и меньшая эффективность гепатозащитного действия при алкогольном поражении печени.

Таблица 4 - Значения коэффициента окислительного стресса и процента гепатопротекции у животных с алкогольной интоксикацией и при введении биофлавоноидов, СЭ и карсила

Группы животных	Прооксиданты (ТБК - акт. продукты сыв. x ТБК - акт. продукты печ. x ДК печ. x ПОЛ ПФП), в отн. ед. к норме	Антиоксиданты (СОД x каталаза x ГП x Г-S-Т печ), в отн. ед. к норме	К, про-/антиоксид.	% гепато-протекции
Интактные	1	1	1
Алкогольная интоксикация	5,6	0,0896	62,5
Введение гесперидина, 100 мг/кг	1,18	0,36	3,26	38
Введение диосмина, 100 мг/кг	1,34	0,60	2,23	78
Введение флавицина, 100 мг/кг	0,79	1,13	0,70	96
Введение кверцетина, 100 мг/кг	0,58	0,22	2,63	70
Введение СЭ, 100 мг/кг	0,91	1,44	0,63	97
Введение карсила, 100 мг/кг	1,28	0,40	3, 20	69

Таким образом, вывод о важности поддержания про-антиоксидантного равновесия и значимости усиления собственных механизмов АОЗ при действии повреждающих факторов, нашел свое подтверждение и в опытах с алкогольным поражением печени. Корреляция между коэффициентом окислительного стресса и процентом гепатопротекции составила - 0,810,29, Р0,05, доказывая наличие достаточно существенной связи между эффективностью гепатозащитного действия и степенью восстановления про-антиоксидантного равновесия.

Интенсивность анаэробного пути окисления углеводов при алкогольном поражении печени на фоне применения флавоноидов, СЭ и карсила была значительно снижена, а также наблюдались восстановительные процессы в митохондриях печени и повышалось содержание АТФ. Более выраженное восстановление показателей энергетического обмена наблюдалось у животных под влиянием флавицина и СЭ, применяемых на фоне 7-дневной алкоголизации: соотношение лактат/пируват снизилось на 88% и 91%, содержание АТФ увеличилось на 127% и 106%, активности СДГ - на 135% и 137% и ЦТО - на 63% и 55% соответственно по отношению к контролю, что достоверно не отличалось от соответствующих значений у интактных животных.

В условиях алкогольной интоксикации было выявлено индуцирующее влияние на цитохром-Р450-зависимые реакции: гесперидина и карсила - на N-деметилазную (+22% и +97%) и n-гидроксилазную активности (+289% и +420%); кверцетина - на N-деметилазную активность (+131%); СЭ - на n-гидроксилазную активность (+519%). При применении флавицина и диосмина все те изменения в данных реакциях микросомального окисления, которые были вызваны введением этанола, полностью устранялись: снижалась активность N-деметилазы (-51% и - 42%) и повышалась активность n-гидроксилазы (+153% и +150%) до уровня нормы (указаны проценты изменения по сравнению с контролем, получавшим только этанол).

Таким образом, наибольшая эффективность гепатозащитного действия при алкогольном поражении печени, которая превышает таковую карсила, выявлена у флавицина и СЭ. Сравнительный анализ показывает, что чем в большей степени вещества восстанавливают про-антиоксидантное равновесие и устраняют метаболические сдвиги, развивающиеся вследствие усиления окислительного метаболизма алкоголя, тем более выраженным гепатозащитным действием они обладают. Важным в защите печени от повреждающего воздействия в результате оксидативного стресса является не только собственный антиоксидантный эффект соединений, но и способность поддерживать высокую активность эндогенной антиоксидантной системы, нарушение функционирования которой, приводит к срыву компенсации и развитию синдрома пероксидации.

3. Изучение антиоксидантного действия флавоноидов, сухого экстракта из V. abbreviate (truncatula) и карсила in vitro и их влияния на системы АОЗ, энергетического обмена и детоксикации in vivo в условиях нормы

Исследования, проведённые in vitro и на здоровых животных после курсового введения флавоноидов, СЭ и карсила в эффективных гепатопротекторных дозах, позволили установить следующее: I. Гесперидин, диосмин и флавицин подавляют Fe²⁺-индуцированное ПОЛ в системе липосом и являются менее сильными антиоксидантами прямого действия, чем кверцетин (IC₅₀ равно соответственно 7,010^-2М, 4,910^-2М, 4,910^-3М и 6,310^-5М). II. В результате курсового введения исследуемых флавоноидов в организме животных регистрируется:

1) снижение ТБК-активных продуктов крови; снижение активности антирадикальных и антиперекисных ферментов (СОД и ГП);

2) усиление глутатионовой системы (увеличение содержания GSH, активности ГР и НАДФ-редуктаз в печени);

3) снижение соотношения лактат/пируват и содержания глюкозы в печени;

4) повышение активности Mg²⁺АТФазы в митохондриях печени без снижения АТФ в этом органе;

5) повышение активности ферментов микросомального окисления.

Многие из выявленных эффектов флавоноидов проистекают, на наш взгляд, из природы химических свойств этих соединений, а именно способности участвовать в обратимых окислительно-восстановительных превращениях, проявляя как водороддонорные, так и водородакцепторные свойства. В силу этого биофлавоноиды могут формировать самостоятельные редокс-системы типа фенол-семихинон-хинон, что дает им возможность снижать количество и/или образование свободных радикалов и интенсивность ПОЛ и, вероятно, позволяет создавать в клетке резерв окисленных никотинамидных коферментов (NAD⁺; NADР⁺_), которые могут обеспечить усиление метаболических реакций и поддержание пула восстановленного GSH, что повышает мощность эндогенной АОС. Формирование самостоятельных редокс-систем и усиление энергопродукции в ходе гликолиза может определять антигипоксическое действие флавоноидов, что помогает устранить усугубляющее влияние гипоксии и энергодефицита при развитии окислительного стресса.

Таким образом, исходя из полученных результатов, можно заключить, что механизм защитного действия биофлавоноидов против окислительного стресса, развивающегося при токсических поражениях печени, является многоплановым и многообразным. Это и прямое антиоксидантное действие в силу антирадикальных и хелатирующих свойств данных соединений. Это и непрямая защита путём активирования эндогенной системы АОЗ и детоксикации, а также повышение неспецифической устойчивости путём улучшения энергопродукции, защиты митохондрий и SH-групп белков от окислительного повреждения. Такое опосредованное повышение активности естественных защитных систем может иметь немаловажное значение в ускорении адаптации организма к действию повреждающих факторов среды. Следует подчеркнуть, что более значимым является активирование эндогенной защитной системы и оптимизация ее работы, чем собственная АОА соединений, что может достигаться, согласно последним данным литературы [Меньщикова Е.Б. и др., 2006], через активирование флавоноидами антиоксидант-респонсивного элемента (ARE), присутствующего в промоторах многих индуцибельных генов в ответ на окислительный и химический стресс.

4. Изучение влияния флавоноидов на эндотелиальную дисфункцию, продукцию NO, органный кровоток и гемореологические свойства крови

Хорошо известно положительное влияние биофлавоноидов на систему кровообращения, недостаточность которой способна усугублять метаболические нарушения, что требует коррекции гемодинамических и гемореологических расстройств при различных патологиях внутренних органов. Возможно, многие сосудистые эффекты флавоноидов связаны с их влиянием на эндотелийзависимые процессы [Benito S., 2002, Kowalczyk E., 2002, Lorenz M., 2004, Leikert J. F., 2002, Wallerath Th., 2005].

Наши исследования на животных с моделированием эндотелиальной дисфункции подтверждают данную точку зрения, демонстрируя эндотелий протективным действие гесперидина, диосмина, флавицина и кверцетина.

При тестировании эндотелиальной функции путем регистрации мозгового кровотока у крыс-самок с недостаточностью половых гормонов, получавших исследуемые флавоноиды в течение месяца в дозе 100 мг/кг, установлено улучшение реакции сосудов на ацетилхолин (стимулятор синтеза эндогенного NO), а также более выраженное снижение кровотока в ответ на введение блокатора NO-синтазы - нитро-L-аргинина по сравнению с экспериментальной патологией. Кроме этого, у животных, получавших флавоноиды, наблюдалось увеличение по сравнению с контролем степени прироста мозгового кровотока (гесперидин>кверцетин>диосмин>флавицин) в ответ на многократное введение ацетилхолина. Это позволяет сделать вывод об увеличении продукции NO эндотелиальными клетками под влиянием флавоноидов. Эндотелий протективное действие флавоноидов проявлялось и в том, что они увеличивали время тромбообразования, которое значительно снижалось у животных с дисфункцией эндотелия, располагаясь по эффективности своего действия в следующем порядке кверцетин>флавицин>диосмин>гесперидин.

Кроме того, флавоноиды на фоне эндотелиальной дисфункции оказывали корреггирующее действие на вязкость крови, уменьшали индекс агрегации эритроцитов и тромбоцитов и увеличивали индекс дезагрегации тромбоцитов, устраняли нарушение механических свойств эритроцитов (таблица 5).

Способность флавоноидов положительно влиять на функционирование сосудистого эндотелия имеет значение для нормализации органного кровотока и микроциркуляции. В опытах на наркотизированных крысах-самцах продемонстрировано улучшение печеночного кровотока при введении гесперидина и флавицина, а также показано, что данная реакция обусловлена их влиянием на эндотелий с активацией выработки NO.

Таблица 5 - Влияние флавоноидов на агрегацию тромбоцитов крови кастрированных крыс

Группы животных	Индекс агрегации тромбоцитов	Индекс дезагрегации тромбоцитов	Максимальный наклон
Интактные животные	4,81,52	63,26,09	18,91,14
Животные с эндотелиальной дисфункцией	15,63,51♣ +53%	54,46,99 14%	53,00,76♣ +180%
Гесперидин	10,41,63* 33%	60,07,00 +10%	35,51,14* 33%
Флавицин	10,50,70* 33%	64,57,24 +19%	42,64,91* 20%
Кверцетин	12,80,52* 18%	69,43,13* +28%	38,32,95* 28%
Диосмин	13,60,60 13%	61,08,22 +12%	44,94,82* 15%
Сулодексид	9,84,9* 37%	79,77,31* +47%	25,60,76* 52%
Примечания 1 ♣ - данные достоверны по отношению к интактным животным (Р<0,05), критерий Манна-Уитни; 2 * - данные достоверны по отношению к животным с эндотелиальной дисфункцией (Р<0,05), критерий Манна-Уитни

Повышение содержания NO выявлено и методом ЭПР в организме животных, получавших гесперидин (100 мг/кг, 5 дней). О повышении уровня NO свидетельствовало увеличение компонентов сигнала парамагнитного аддукта NO-Fe²⁺-МГД₂ в спектрах ЭПР мочи животных после применения гесперидина по сравнению с таковыми у интактных крыс (рис.3).

Характеристики

Список файлов реферата