168692 (625175), страница 5
Текст из файла (страница 5)
2.5.3.1. Приготовление проявляющих реагентов
2.5.3.1.1. Проявляющий реагент N 1
1 г нитрата серебра растворяют в 1 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл 2-феноксиметанола, 190 мл ацетона, 1 - 2 капли пероксида водорода, раствор перемешивают и переносят в склянку из темного стекла.
2.5.3.2.2. Проявляющий реагент N 2
0,5 г нитрата серебра растворяют в 5 мл дистиллированной воды в мерной колбе на 100 мл, добавляют 10 мл 25%-ного водного аммиака, раствор доводят до 100 мл ацетоном, перемешивают и переносят в склянку из темного стекла.
2.5.3.2. Приготовление подвижной фазы для ТСХ
В мерную колбу вместимостью 100 мл вносят 20 мл ацетона и добавляют до метки гексан, перемешивают. Смесь наливают в хроматографическую камеру слоем не более 6 - 8 мм за 30 мин. До начала хроматографирования.
2.5.4. Приготовление стандартных растворов
Основной стандартный раствор кломазона с содержанием 100 мкг/мл готовят растворением 0,010 г препарата, содержащего 99,8% д. в., в гексане в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранится в холодильнике в течение месяца.
Рабочие стандартные растворы с концентрацией 0,4; 1,0; 2,0; 4,0; 10,0; 20 и 40,0 мкг/мл готовят из основного стандартного раствора кломазона соответствующим последовательным разбавлением гексаном.
Рабочие растворы хранят в холодильнике не более месяца.
2.5.5. Построение градуировочного графика
2.5.5.1. Градуировочный график А (измерение по п. 2.7.1, ВЭЖХ)
Для построения градуировочного графика в инжектор хроматографа вводят по 5 мкл рабочего стандартного раствора кломазона с концентрацией 4,0; 10,0; 20,0 и 40 мкг/мл.
2.5.5.2. Градуировочный график В (измерение по п. 2.7.2, ГЖХ)
Для построения градуировочного графика в испаритель хроматографа вводят по 5 мкл рабочего стандартного раствора кломазона с концентрацией 0,4; 1,0; 2,0; 4,0 и 10,0.
Осуществляют не менее 5 параллельных измерений. Находят среднее значение высоты хроматографического пика для каждой концентрации. Строят градуировочный график (А или В) зависимости высоты хроматографического пика в мм от концентрации кломазона в растворе в мкг/мл.
2.6. Описание определения
100 мл анализируемой пробы воды помещают в делительную воронку вместимостью 250 мл, приливают 10 мл 25%-ного водного раствора гидроксида натрия, перемешивают и добавляют 20 мл н-гексана. Воронку встряхивают в течение 3 мин., после разделения фаз гексановый слой сливают в грушевидную колбу вместимостью 100 мл, пропуская его через слой безводного сульфата натрия, помещенного в конической воронке на складчатом бумажном фильтре. Извлечение препарата из водной пробы повторяют еще дважды, используя по 20 мл н-гексана. Объединенный гексановый экстракт упаривают на ротационном вакуумном испарителе при температуре 40 -С почти досуха, остаток отдувают потоком воздуха или азота особой чистоты. Сухой остаток растворяют в 0,1 (ВЭЖХ, ТСХ) или 0,25 мл (ГЖХ) н- гексана и анализируют одним из хроматографических методов.
2.7. Условия хроматографирования
2.7.1. ВЭЖХ
Жидкостный хроматограф с ультрафиолетовым детектором Милихром (Россия).
Колонка стальная длиной 64 мм, внутренним диаметром 2 мм,
заполненная Силасорбом 600, зернением 5 мкм.
Температура колонки: комнатная.
Подвижная фаза: гексан-изопропанол-метанол (90:5:5, по объему).
Скорость потока элюента: 100 мкл/мин.
Рабочая длина волны: 240 нм.
Чувствительность: 0,4 ед. абсорбции на шкалу.
Объем вводимой пробы: 5 мкл.
Время выхода кломазона: около 6 мин.
Линейный диапазон детектирования: 20 - 200 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 40 мкг/мл, разбавляют подвижной фазой для ВЭЖХ.
2.7.2. ГЖХ
Хроматограф газовый "Цвет-570" с детектором постоянной скорости рекомбинации ионов.
Колонка стеклянная длиной 1 м, внутренним диаметром 3 мм, заполненная Хроматоном N-AW-DMCS с 5% SE-30 (0,16 - 0,20 мм).
Рабочая шкала электрометра 64 x 10 10Ом.
Скорость движения ленты самописца 200 мм/ч.
Температура термостата колонки - 190 -С
детектора - 300 -С
испарителя - 220 -С
Скорость газа-носителя (азота) - 60 мл/мин.
Объем вводимой пробы - 5 мкл.
Время выхода кломазона - 2,5 мин.
Линейный диапазон детектирования: 2 - 50 нг.
Образцы, дающие пики большие, чем стандартный раствор с концентрацией 10 мкг/мл, разбавляют гексаном.
Для повышения точности идентификации кломазона при совместном присутствии в пробе гамма-ГХЦГ, имеющего близкое время удерживания, кломазон удаляется из пробы обработкой концентрированной серной кислотой. Повторный анализ пробы позволяет установить вклад кломазона в первичный хроматографический сигнал.
2.7.3. ТСХ
Гексановый раствор в колбе, полученный по п. 2.6 количественно
(или его аликвотную часть) наносят на хроматографические пластинки "Силуфол", "Кизельгель 60F-254" или "Пластинки для ВЭТСХ". Рядом наносят стандартные растворы в объеме, соответствующем содержанию кломазона 1, 2, 5 и 10 мкг. Пластинку помещают в камеру для хроматографирования, содержащую смесь н-гексан-ацетон (4:1, по объему). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, помещают ее под тягу до испарения растворителей, затем обрабатывают одним из проявляющих реагентов и помещают под ультрафиолетовую лампу на 5 мин. Зона локализации препарата на пластинках "Силуфол", "Пластинках для ВЭТСХ" и "Кизельгель 60F- 254" проявляется в виде серо-бурых пятен с величиной Rf 0,35, 0,85 и 0,43, соответственно. Для определения кломазона методом ТСХ можно использовать пластинки "Алюграм" и "Полиграм" (производства ФРГ). Величина Rf кломазона на этих пластинках составляет 0,37 и 0,38, соответственно.
3. Требования техники безопасности
Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями, токсичными веществами, электронагревательными приборами.
4. Контроль погрешности измерений
Оперативный контроль погрешности и воспроизводимости измерений осуществляется в соответствии с рекомендациями МИ 2335-95. ГСИ "Внутренний контроль качества результатов количественного химического анализа".
5. Разработчики
Юдина Т.В., Федорова Н.Е. (ФНЦГ им. Ф.Ф. Эрисмана).
Давидюк Е.И. (УкрНИИГИНТОКС, г. Киев); Кисенко М.А., Демченко В.Ф. (Институт медицины труда АН и АМН Украины, г. Киев).
28
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
