92178 (612929), страница 2

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 2)

Цефалоспорин В и некоторые из его производных анализировали хроматографически на силикагеле G, используя смесь н-бутанол—уксусная кислота (10:1), насыщенную водой, а также смесь н-бутанол—пиридин—уксусная кислота—вода (17:12:4:15) . Для некоторых специфических соединений применяли различные комбинации ацетона с бензолом (1:4; 2 : 3) и толуолом (2:3; 1 : 4; 3 : 7; 1 : 9), а также толуола и этил-ацетата (1:1). Биаджи и др. разделили методом ТСХ с обращением фаз 13 цефалоспоринов. Разделение эти авторы проводили на силикагеле, пропитанном силиконом, применяя буферный раствор (рН 7,4) ацетат натрия—веронал, содержавший от 0 до 24 % ацетона. По полученным данным были рассчитаны величины RM. Бури хроматографировал цефалоспорин В, цефалотин и цефалоридин на слоях силикагеля, забуференных фосфатным буфером (рН 5,8), элюируя их смесью изопропанол – метанол – фосфатный буфер с рН 5,8 (2:7:1).

РИФАМИЦИНЫ

Эти антибиотики разделяли с помощью ряда спиртов и ацетона на слоях силикагеля G . Ацетон оказался лучшим растворителем; проводя элюирование ацетоном, удается отделить рифамицин В от рифамицина О, рифамицин SV от ри-фамицина S, а рифамицин В от рифамицина SV. Эти соединения интенсивно окрашены, и поэтому при достаточно высоких концентрациях их можно обнаружить на пластинках, не применяя реактив. Однако микробиологическим методом их можно обнаружить при гораздо более низких концентрациях. Для 2 — 20 мкг рифамицина и дезацетилрифамицина Колос и Эйдус приводят величины Rf (0,55 и 0,37 соответственно), полученные при хроматографировании смесью хлороформ—этанол—0,1 н. соляная кислота (84:15,9:0,1) на хроматографических полосах № 6060 фирмы Eastman. Меджи и др. провели хроматографический анализ группы полусинтетических рифамицинов на силикагеле с ацетоном.

ТЕТРАЦИКЛИНЫ

Николаус и др. исследовали также разделение тетрациклинов на тонких слоях силикагеля G. Они изучили большое число растворителей; четыре лучших растворителя указаны в табл. 1.2, там же даны соответствующие величины Rf. В дополнение к приведенным в таблице результатам следует указать, что окситетрациклин и диметилтетрациклин можно отделить от тетрациклина, хлортетрациклина и дезокситетрациклина, элюируя смесь 10 %-ным раствором лимонной кислоты, насыщенным бутанолом. Обнаруживают тетрациклины, опрыскивая пластинки 1 н. соляной кислотой и затем нагревая их при 50 °С. Тетрациклины обнаруживают в виде желтых пятен. Для обнаружения дезокситетрациклина используют реакцию сочетания с солью диазония. При проведении микробиологической пробы агар заражают Bacterium subtilis.

Таблица 2.1

Величины Rf X 100 некоторых тетрациклинов, полученные с различными хроматографическими системами

Авторы работы разделяли тетрациклин, хлортетрациклин, диметилхлортетрациклин и их ангидро- и эпипроизводные на промытом кислотой кизельгуре G, пропитанном 20 %-ным раствором полиэтиленоксидгликоля 400 в смеси глицерин — 0,1 М ЭДТА при рН 7 (1 : 19). Разделяющим растворителем был органический слой смеси этилацетат — 0,1 М ЭДТА, рН 7 (6:1). При рассмотрении пластинок в длинноволновом УФ-свете можно обнаружить 0,05 мкг антибиотика. В работе описана методика разделения тетрациклинов и продуктов их превращения на кизельгуре, пропитанном ЭДТА; величины Rf и применявшиеся растворители указаны в табл. 1.2.

Количественное определение ангидротетрациклинов в разложившихся таблетках тетрациклина проводили, экстрагируя зоны ТСХ и измеряя коэффициент поглощения при 428 нм . При определении эпитетрациклина и хлортетрациклина зону первого соскребали, элюировали 0,1 н. соляной кислотой и измеряли поглощение элюента при 356 нм. Хлортетрациклин после элюирования 0,2 н. гидроксидом натрия измеряли по интенсивности флуоресценции в области 414 нм (длина возбуждающего излучения 356 нм). Радека и Вильсон проводили определение тетрациклина в фармацевтических препаратах in situ. Хотя этот метод менее точен, чем спектрофотометрический метод Альварца Фернандеца и др., он более чувствителен, требует меньше времени и более точен, чем официальные микробиологические методы. Ван Хоек и др. разработали для этой группы соединений флуорометрический метод определения in situ.

ПЕПТИДНЫЕ АНТИБИОТИКИ

Полимиксиновые антибиотики представляют собой пептиды очень близкого строения. Кроме аминокислот в их молекулу входят жирные кислоты. Иглой и др.разделяли поли-миксины В, D и М на силикагеле G, используя смесь ацетон— вода—уксусная кислота—2 н. гидроксид аммония (15:5:1:2). Полимиксин Е (колистин) не удается отделить от полимик-сина В. Хоулетт и Зельцер разработали метод дифференциации этих двух соединений: пробу гидролизуют 5 н. соляной кислотой в запаянной трубке 6 ч при 120°С и определяют аминокислотный состав хроматографически в камере с насыщенной атмосферой на слое силикагеля MNG, используя раствор 68 мг иодида калия в 84 мл 90 %-ного фенола и 16 мл воды. Нингид-риновая проба позволяет обнаружить L-2,4-диаминомасляную кислоту, L-треонин, фенилаланин и лейцин в пробе полимиксина В, в то же время при хроматографировании колистина пятно фенилаланина обнаружено не было. Хамерс и Моерлуз предпочитают проводить 22-часовой гидролиз при ПО "С, чтобы избежать появления ложных пятен.

Хиномициновые антибиотики — это пептидные лактоны с хи-ноксалиновым кольцом, отличающиеся друг от друга только своей N-метиламинокислотной долей. Шой подвергал хро-матографическому разделению соединения А, В, Во, С, D и Е методом круговой хроматографии на оксиде алюминия, применяя нижнюю фракцию смеси этилацетат—1,1,2,2-тетрахлор-этан—вода (3:1:3). Таким способом удалось разделить все компоненты, кроме В и Во. Хроматографирование проводили на флуоресцентном слое и рассматривали пластинки в УФ-свете.

Штудер и др. при определении строения энниатина В синтезировали ряд циклических пептидов с активностью антибиотиков. В смеси бензол—эфир—метанол (17:2: 1) на силикагеле энниатины А и В характеризуются Rf 0,39.

ПОЛИЕНОВЫЕ МАКРОЛИДНЫЕ АНТИБИОТИКИ

Икекава и др. разделили шесть полиенов на силикасиликагеле G, используя смесь н-бутанол—уксусная кислота—вода (3:1:1), и получили при этом следующие величины Rf. нистатин 0,18; пимарицин 0,34; унамицин А 0,36; амфотерицин А 0,33; пентамицин 0,67 и трихомицин 0,17. Бержи и Эбле разделили на силикагеле HF, забуференном смесью 0,2 М ди-гидрофосфат калия—0,2 М гидрофосфат натрия (1:1), элюи-руя пробу смесью метиленхлорид—мета«ол (17:3). Выделенные компоненты характеризуются следующими величинами Rf. I 0,8; II 0,7; III 0,6; IV 0,5. Охаб разделил на силикагеле трихомицин, фумагиллин, натамицин, нистатин, амфотерицин А и амфотерицин В. Лучшие результаты дают смеси этанол— аммиак—вода—диоксан (8:1:1:1) и н-бутанол—пиридин— вода (3:2: 1). Мартин и Мак-Даниел разделили комплекс кандигексина на силикагеле G на пять компонентов со следующими величинами Rf. А 0,26; В 0,29; D 0,36; Е 0,39 и F о',43. Комплекс кандидина удалось разделить на две фракции с Rf 0,27 (А) и 0,32 (В). Третий компонент с Rf 0,36, о наличии которого в сырых препаратах кандидина сообщили Боровский и др., в очищенных препаратах обнаружить не удалось. Элюирование проводилось нижней фракцией смеси хлороформ— метанол—20 %-ный гидроксид аммония (2:2:1). Количественное разделение достигается денситометрированием in situ кандигексина при 340 нм и кандидина при 360 нм.

РАЗЛИЧНЫЕ ПРИМЕРЫ ПРИМЕНЕНИЯ

Берд и Стевенс использовали ТСХ для выявления примесей в нитрофуразоне — синтетическом антибактериальном соединении. При хроматографировании на силикагеле G смесью бензол—ацетон Rf нитрофуразона составляет 0,23. Одна из примесей, 5-нитро-2-фуральдазин, перемещается с фронтом растворителя, Rj другой примеси равен 0,65.

Маер и Шафнер исследовали антибиотики методом ТСХ на силикагеле со смесью хлороформ—метанол—28 %-ный гидроксид аммония—вода (1:4:2:1), дополнив ТСХ при определении некоторых ацетилпроизводных хроматографированием на бумаге. В результате эти авторы показали, что в данный комплекс входит 16 антибиотиков. Вагман и др. выделили из этого комплекса четыре примесных компонента. Вильсон и др. осуществили хроматографическое разделение в этой же системе некоторых примесных компонентов.

Патулин, фурапираноновый антибиотик, выделенный из ряда грибов, был подвергнут хроматографическому анализу с применением большого числа растворителей. Скотт и Кеннеди разработали количественный метод обнаружения этого антибиотика в яблочном соке, основанный на установлении минимально определимой флуоресценции, когда слой силикагеля опрыскивают 0,5%-ным раствором 3-метил-2-бензотиазолингидразона и нагревают 15 мин при 130°С.

Фишер и Ригельман] разработали флуоресцентный метод определения in situ гризеофульвина и его 4'-спиртовых производных в плазме. Разделение проводили на силикагеле, содержавшем 6,7 % коллоидного оксида алюминия (бемит) (Du Pont); элюентом служила смесь безводных эфира и ацетона (3: 2). Антибиотики экстрагировали из плазмы эфиром. Каднер и др. использовали смесь силикагель G—нейтральный оксид алюминия с активностью I (30:2); после разделения соединения элюировали и измеряли интенсивность флуоресценции при 385 нм при длине возбуждающего излучения 365 нм.

Бержи и Эбле [92] разделили комплексы филипина на четыре фракции: филипин II, филипин III, филипин IV и комплекс филипина I; последняя фракия представляет собой смесь по крайней мере пяти компонентов. Разделение проводили на силикагеле HF, забуференном смесью 0,2М растворов одно- и двузамещенного фосфата натрия, с применением смеси метиленхлорид—метанол (17:3). Перечисленным фракциям соответствуют следующие величины Rf: 0,7; 0,6; 0,5 и 0,8.

Нифимицин удалось разделить на четыре компонента Ai и А2, Bi и В2 методом двойного элюирования смесью этилацетат—этанол—вода (150:45:28) на слоях силикагеля GF. Вариамицин анализировали на слоях кремневой кислоты, применяя смесь метанол—хлороформ (9:1). Количественное определение проводят, измеряя коэффициент поглощения элюата при 280 нм. Клиндамицин и его метаболиты сульфоксид-клиндамицин, N-деметилклиндамицин и сульфоксид-N-деметил-клиндамицин хроматографировали на листах со слоем силикагеля 6061 (фирма Eastman) смесью ацетон—метилэтилкетон— вода (20,1:72,1:7,8). Пятна обнаруживали и детектировали методом биоавтографии. Азалос и др. приводят перечень микроорганизмов для детектирования 84 антибиотиков.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Кашкин П.Н., Безбородов А.М. Антибиотики.Ленинградское отделение: «Медицина». 1970.-375с.

2. Кирхнер Ю.Тонкослойная хроматография т.1.М.: «МИР» 1981.-616с.

Характеристики

Список файлов курсовой работы