91928 (612905), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Высушивание: при температуре от 105 до 110 С до исчезновения запаха растворителей.
Проявление: пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дихлоринохлоримида в метаноле. Затем опрыскивают раствором 20 г/л натрия карбоната безводного. Просматривают при дневном свете.
Согласно ГФ РБ [14] идентификацию арбутина в листьях брусники проводят следующим образом.
Испытуемый раствор. К 0,5 г измельченного сырья прибавляют 5 мл смеси из метанола и воды (50:50, об/об) и кипятят с обратным холодильником в водяной бане в течение 10 мин. Горячее извлечение фильтруют. Фильтр и пробирку промывают смесью из метанола и воды (50:50, об/об) и доводят до объема 5 мл этим же растворителем.
Раствор сравнения. 2,5 мг арбутина растворяют в 5 мл метанола.
Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля GР.
Подвижная фаза: этилацетат — кислота муравьиная безводная — вода (44:3:3,об/об/об).
Наносимый объем пробы: по 10 мкл в виде полос.
Фронт подвижной фазы: не менее 15 см от линии старта.
Высушивание: при температуре от 100°С до 105°С.
Проявление: пластинку опрыскивают раствором 10 г/л 4-аминопиразолона, затем раствором 20 г/л калия ферроцианида и проявляют в парах аммиака. Просматривают при дневном свете.
Результаты: Арбутин: зона красного цвета. На хроматограмме испытуемого раствора в верхней половине могут обнаруживаться и другие зоны. Пирозид - зона красного цвета.
7. Количественное определение
При количественном определении фенолгликозидов применяют химические (титриметрические) и инструментальные (спектрофотометрические и хроматографические) методы анализа.
Нормативно-техническая документация предусматривает количественное определение арбутина в листьях толокнянки и брусники. Метод определения основан на иодометрическом титровании гидрохинона, полученного после извлечения и гидролиза арбутина [16].
Разработан спектрофотометрический метод определения салидрозида в экстрактек корневищ с корнями родиолы розовой, который можно использовать для количественного определения салидрозида в растительном материале [1].
Исходя из строения фенольных гликозидов и их УФ спектров, возможно количественное хромато-спектрофотометрическое определение всех представителей этой группы [14].
И хотя сейчас всё более широкое применение получают инструментальные методы установления колличественного содержания фенолгликозидов [16], ещё применяется и включён в НТД [16] титриметрический метод количественного определения.
Рассмотрим подробнее методы количественного определения фенолгликозидов в ЛРС.
7.1 Титриметрический метод количественного определения фенолгликозидов [16]
Около 0.5 гр (точная навеска) сырья, измельченного и просеянного через сито с диаметром отверстий 1 мм, помещают в колбу вместимостью 100 мл, заливают 50 мл воды и нагревают с обратным холодильником поддерживая слабое кипение, в течение 30 мин. Горячее извлечение фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл через бумажный фильтр, избегая попадания частиц сырья на фильтр. В колбу с сырьем повторно прибавляют 25 мл воды и кипятят в течение 20 мин. Горячее извлечение вместе с сырьем переносят на тот же фильтр и остаток на фильтре дважды промывают горячей водой порциями по 10 мл. К фильтрату прибавляют 3 мл раствора свинца (II) ацетата основного, перемешивают, охлаждают и доводят водой до объема 100,0 мл. Колбу помещают в водяную баню и выдерживают до полной коагуляции осадка. Горячую жидкость полностью отфильтровывают в колбу через бумажный фильтр, прикрывая воронку часовым стеклом. Охлаждают, к фильтрату прибавляют 1 мл кислоты серной, колбу взвешивают с точностью до 0,01 г и кипятят с обратным холодильником в течение 1,5 ч, поддерживая равномерное и слабое кипение. Охлаждают до комнатной температуры, взвешивают, доводят массу колбы до первоначальной водой, и полностью отфильтровывают через бумажный фильтр в колбу вместимостью 250 мл. К фильтрату прибавляют 0,1 г порошка цинка и встряхивают в течение 5 мин.
Жидкость нейтрализуют натрия гидрокарбонатом (около 1—2 г) по красной лакмусовой бумаге, прибавляют еще 2 г натрия гидрокарбоната и после его растворения фильтруют через бумажный фильтр.
50,0 мл фильтрата переносят в плоскодонную колбу вместимостью 500 мл, прибавляют 200 мл воды и немедленно титруют из микро- или полумикробюретки 0,1 М раствором йода до появления синего окрашивания, не исчезающего в течение 1 мин, используя в качестве индикатора раствор крахмала, свободный от йодидов.
1мл 0.1н раствора йода соответствует 0.01361 арбутина. Процентное содержание арбутина в растительном материале х в пересчете на абсолютно сухое сырье вычисляют по формуле:
Х= V0.01361∙2∙100∙100 / m (100-w)
где V - объем 0.1н раствора йода, израсходованного на титрование, мл;
m- масса навески сырья, гр; w - потеря в массе сырья при высушивании, %
Содержание арбутина в сырье регламентируется НТД.
Известно, что в зеленых листьях бадана толстолистного содержится арбутина 20%, в листьях брусники- 10-16%.
Способ выделения арбутина из листьев бадана включает: двух- кратную экстракцию сырья кипящей водой, фильтрацию и сепарирование извлечения, осаждение полифенолов раствором ацетата свинца, отделение осадка, упаривание фильтрата до сухого остатка, двух- кратную эктракцию сухого остатка 96%-ным этанолом, упаривание этанольного экстракта и обработка маслянистого остатка смесью хлороформ- этанол, кристаллизация арбутина из этой смеси. Выход арбутина-4%. Способ позволяет получить получить химически чистый арбутин без примесей, что подтвердается данными УФ-, ИК, ПМР-спектров. УФ- спектр арбутина имеет максимальное поглощение при 285 нм, в ИК- спектре имеются для характерные для арбутина полосы поглощения при 817, 831, 1513, 1447.
7.2 Инструментальные методы
Среди инструментальных методов определения можно выделить фотоэлектроколориметрический и спетрофотометрический. Рассмотрим эти методы на примере колличественного определения арбутина.
В основе определения арбутина фотоэлектроколориметрическим методом лежит реакция образования азокрасителя после его взаимодействия с диазотированным сульфаниламидом (например, сульфацил-натрий) [14].
Количественное содержание определяется по калибровочному графику. Осаждение полифенолов проводится раствором свинца ацетата основного. Потери арбутина при данном способе определения составляют около 1,5%. Это объясняется тем, что очистка извлечения от сопутствующих полифенольных соединений раствором свинца ацетата основного приводит к соосаждению арбутина [14].
Спектрофотометрический метод для определения арбутина основан на измерении оптической плотности в видимой области спектра после получения антипиринового красителя. В качестве реактивов, например, используют 2% водный раствор 4-аминоантипирина, аммиак и 2% водный раствор калия феррицианида. Окрашенный продукт извлекают хлороформом и измеряют оптическую плотность окрашенного продукта на спектрофотометре при длине волны 455 нм. [14, 15].
8. ЛР и ЛРС, содержащие феногликозиды
8.1 Брусника обыкновенная(Vaccinium vitis idaea, сем.-Vaccinaceae)
Вечнозеленый низенький ветвистый кустарничек, высотой до 25 см. Корневище ползучее. Стебли прямостоячие, ветвистые. Листья очередные, мелкие, кожистые, блестящие, эллиптические, с завернутыми на нижнюю сторону краями, с черными точесными железками. Цветки белые или розоватые, в кистях на концах ветвей, венчик колокольчатый. Цветет в мае- июне. Плод - округлая многосеменная, шаровидная красная ягода.Плоды созревают в августе- сентябре [10].
Распространение брусники связано с равнинными сухими и свежими с моховым покровом сосновыми борами, а также с пихтовоелово- кедровой горной тайгой, где в надпочвенном покрове преобладают мхи, встречается черника, грушанки, линнея [10].
Химический состав. Фармакологические свойства. Листья и ягоды содержат гликозид арбутин (в листьях до 9%), который в организме отщепляет гидрохинон, а также флавоноиды, дубильные вещества, органические кислоты- яблочную, лимонную, винную, бензойную, обладающую антисептическим действием, сахара, аскорбиновую кислоту, микроэлементы, финонциды, каротин и другие вещества [1, 2].
Применение. Водные настои и отвары листьев применяют в научной медицине как мочегонное, антисептическое и вяжущее средство при воспалениях почек и мочевого пузыря, поносах, подагре и ревматизме. Ягоды брусники рекомендуют при авитоминозах. Сушеные ягоды входят в витаминные и мочегонные сборы. Морс из ягод полезен при лихорадящих заболеваниях [9].
В народной медицине ягоды брусники применяют при анацидных гастритах, диабете, поносах, подагре и ревматизме [4].
Настой листьев употребляют при воспалениях почек и мочевого пузыря. Листья брусники заваривают вместо чая как средство, снимающее усталость [4].
Лекарственные формы. Настой.Столовая ложка листьев настаивают 30 минут в стакане кипятка, охлаждают и пьют по столовой ложке 3-4 раза в день [9].
Отвар. 2-3 чайные ложки кипятят в стакане воды 15 минут, выпивают в течение дня [9].
Сбор, обработка, сушка. Листья собирает до цветения (при более позднем сборе они при сушке чернеют), в том числе ранней весной- перезимовавшие под снегом; сушат в сухом теплом помещении или на чердаках, разложив тонким слоем (3-5 см) на бумаге или ткани, часто перемешивая. Выход сухого сырья 20-22%. Сухие листья упаковывают в мешки весом по 20-25 кг и хранят в сухих, хорошо проветриваемых помещениях на стеллажах. Срок хранения не установлен [10].
Ягоды собирают в стадии полной зрелости руками или специальными граблистыми совками в небольшие корзины. Очещенная от примесей, недозрелых и поврежденных ягод брусника затаривается в осиновые, липовые или еловые 50-100- литровые бочки с вложенными внутрь бочки полиэтиленовыми мешками. После заполнения ягод мешок завязывается льняным шпагатом [10].
8.2 Толокнянка обыкновенная(Arctostaphylos uva ursi, сем.-Ericaceae)
Вечнозеленый распростертый кустарничек с ползучими и приподнимающимися побегами, длиной 20-50 см. Листья кожистые, короткочерешковые, сверху более темно-, снизу- более светло- зеленые, блестящие. К основанию листья клиновидно сужены, обратнояйцевидной формы, твердые и ломкие. Цветки собраны с малоцветковые кисти и расположены на верхушках веток. Венчик кувшинчатый, розовый или белый, с 5 изогнутыми наружу зубчиками. Плод сферическая красная ягода с 6 семенами. Цветет с мая по июль [10].
Встречается на сухихи каменистых местах и лесных полянах в хвойных лесах. Встечается почти по всей Европе ( без крайних южных районов) [10].
Химический состав. В сырье содержатся фенольные гликозиды- арбутин и метиларбутин (в среднем около 10%). В этой смеси из гликозидов, в зависимости от происхождения, метиларбутин
Рисунок 10 - Толокнянка варьирует от 5 до 45%. Содержание арбутина в листьях не должно быть меньше 6%. Некоторое сырье содержит только арбутина около 9%, небольшие количества свободного гидрохинона, дубильные вещества ( галлолинины) около 20%, флавоноидные вещества, урсоловую кислоту и др [1, 2].
Установлено, что осенью содержание арбутина в листьях толокнянки выше, чем весной [2].
Сотрудниками Санкт-Петербургского химико–терапевтического института разработана технология получения жидкого концентрата из листьев толокнянки с содержанием арбутина 14-15% (для экстракции использовали 20% водно- спиртовую смесь) [2].
Фармакологические свойства. В опытах in vitro водно- спиртовые и этилацетатные экстракты листа толокнянки угнетают рост золотистого стафилококка (Staphylococcus aureus), энтерококка (Enterococcus faecalis), сенной палочки (Bacillus subtilis), энтеробактерий (Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Salmonella typhimurium, Proteus mirabilis, Proteus vulgaris) и синегнойной палочки (Pseudomonas aeruginosa). Тем не менее 95% этанольный и хлороформный эктсракты растения противомикробными свойствами не обладают. Водный экстракт листа толокнянки угнетает также рост кариогенного Streptococcus mutans OMZ176 (Namba T. Etc., 1981). Кроме того, он проявляет противовирусную активность – в концентрации 10% угнетает репродукцию вирусов простого герпеса типа 2, гриппа А2 (штамм Mannheim 57) и оспенной вакцины в культуре клеток [5].
Уроантисептическое действие обусловлено наличием в листьях фенольных гликозидов- арбутина (арбутозида) и метиларбутина [2].
Доказано слабое антибактериальное действие отвара из листьев толокнянки на туберкулезные микобактерии. Сырье обладает также и слабым диуретическим эффектом, обусловленным влиянием на канальцевый эпителий почек [5].
Применение. Листья толокнянки широко применяют в виде отвара, настоя, экстракта ка дезинфицирующее и мочегонное средство. Применять листья толокнянки как антисептик для лечения хронического цистита и пиелита можно только при щелочной реакции мочи. Имеются данные и о хорошем эфекте при лечении поносов и гематурии, а также выжущем действии [5, 9].
Лекарственная форма. Столовую ложку нарезанных мелких листьев залить 2 стаканами холодной воды, оставить на ночь и процедить. Получают суточную дозу, которую следует пить по192 столовых ложки 3-4 раза в день. Некоторые авторы рекомендуют применять в виде отвара [4, 5, 9].
Лекарственное сырье представляет собой листья растения, собранные во время цветения и высушенные при обыкновенной температуре [10].
8.3 Ива
Известно примерно 50 выдов ив. Медицинское применение имеют ива белая (ветла), ива козья, ива ломкая и другие [9, 10].
Все ивы- многолетние, деревянистые растения, деревья ( ива белая, ива ломкая) или кустарники ( ива серая, ива сибирская и т.д.) с прстыми листьями с прилистниками на черешках, сверху зелеными, снизу часто белоопушенными. Цветки без околоцветников, однополые, собраны в сережки. Цветут до появления листьев или во время олиствения [10].
Ивы обычно растут по берегам и ручьев, под пологом леса, нередко у дорог, в садах, на болотых повсеместно [10].
Химический состав. Кора ивы белой содержит значительный арсенал биологически активных веществ, среди которых наиболее важными являются фенольный гликозид- салицин, производные салициловой кислоты и флавоноиды [1, 2]. Сотрудник Фармацевтического института Университета им.Карла Маркса г.Лейпцига в Германии Y. Tieme в 60-ых годах с помощью хроматографических и спектральных методов анализа в коре разных видов ивы идентифицировал гликозиды салициловой кислоты, среди которых определены такие вещества, как салицин, гликозид, расщепляющийся при ферментативном гидролизе на спирт салигенол, который в дальнейшем гидролизуется на салициловый альдегид и салициловую кислоту. Поэтому в коре ивы также имеется и свободная салициловая кислота. Кроме салициловой кислоты в коре и листьях разных видов ивы помещаются другие гликозиды салициловой кислоты, в частности салидрозид, саликозид, салирепозид, фрагалин, саликортин, триандрин, вималин, тремулоидин и другие соединения [2].
О. Dytkowska (1964) при разработке хромато - спектрофотометрического метода количественного определения салициловых гликозидов выяснила, что наибольшее количество гликозидов в перерасчете на салицин помещается в коре ивы ушастой - до 0.367%. В коре ивы белой количество фенолгликозидов в пересчете на салицин составляет 0.106% [4].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
