Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 2)

Отдельные сапонины проявляют тонизирующее, стимулирующее, адаптогенное действие (женьшень, аралия маньчжурская); антиаллергическое, регулирующее водно-солевой обмен (солодки), Р-витаминное (каштан конский), седативное (синюха голубая) и др.

1.7 Анализ лекарственного растительного сырья

В растениях обычно содержится несколько близких по строению и свойствам гликозидов, разделение и идентификация которых до настоящего времени представляют собой сложную и не всегда разрешимую задачу.

Анализ сырья складывается из нескольких стадий: экстракция сапонинов из сырья, очистка полученного извлечения, разделение на индивидуальные компоненты. Экстрагируют сапонины из сырья обычно полярными растворителями: метанолом и этанолом различной концентрации, водой, 0,9%-ным раствором натрия хлорида. Иногда сырье перед экстракцией обрабатывают петролейным эфиром, четыреххлористым углеродом, диэтиловым эфиром для разрушения нерастворимых в полярных растворителях комплексов сапонинов со стеринами, белками, фенольными соединениями. Очистку полученных извлечений проводят различными способами, что зависит от структуры сапонинов. Полярные сапонины плохо растворимы в этиловом и метиловом спиртах, выпадают в осадок при охлаждении, длительном стоянии спиртового экстракта или при добавлении этанола. Гликозиды с небольшой углеводной цепочкой обычно плохо растворимы в воде и выпадают в осадок при разбавлении спиртовых экстрактов водой. Кислые тритерпеновые сапонины растворимы в водных растворах щелочей и выпадают в осадок при подкислении. Также из спиртовых растворов тритерпеновые сапонины можно осаждать диэтиловым эфиром, ацетоном, этилацетатом, иногда бутиловым и изоамиловым спиртами. Полученную сумму сапонинов очищают повторным переосаждением от полярных сопутствующих веществ: моно- и олигосахаридов, фенольных соединений, органических кислот и др.

Ряд методов основан на способности сапонинов образовывать нерастворимые в воде или водном спирте соли с гидроксидом бария или ацетатом свинца и комплексы с холестерином, танинами, белками. Затем эти соли или комплексы разлагают.

Эти методы позволяют получить более чистую сумму сапонинов.

Качественный анализ

1. Реакция гемолиза. Готовят извлечение на изотоническом растворе натрия хлорида 1 : 30 настаиванием на кипящей водяной бане в течение 30 минут. К 2 мл извлечения добавляют 2 мл 2% взвеси дефибринированной крови. В присутствии сапонинов образуется прозрачный красный раствор ("лаковая кровь").

2. Реакция пенообразования. Водное извлечение из сырья (1 : 10) встряхивают в пробирке в течение 15 сек. Не исчезающая в течение 15 мин пена говорит о возможном присутствии сапонинов.

3. Хроматография в тонком слое. Водное или спиртовое извлечение хроматографируют на силикагеле или алюминия оксиде в подходящей системе растворителей. Для нейтральных сапонинов чаще всего используют н-бутанол – уксусная кислота – вода, для кислых – н-бутанол – водный аммиак в различных соотношениях. Систему подбирают экспериментально. На хроматограммах сапонины обнароуживают, проявляя различными кислотными реагентами: конц. Кислота серная, уксусный ангидрид, 25% раствор фосфорномолибденовой кислоты, треххлористая сурьма и др., часто в сочетании с кобальта хлоридом, ванилином, пара-диметиламинобензальдегидом и др.

Тритерпеновые сапонины проявляются в виде красновато- или буроватофиолетовых пятен.

Стероидные сапонины при проявлении хроматограмм 1% раствором сурьмы треххлористой, конц. кислотой серной и уксусным ангидридом образуют желтые (спиростановые) пятна (реакция Санье). В настоящее время хроматографический метод дает наиболее достоверное представление о наличии сапонинов в сырье.

1. Реакция Лафона. К 2 мл спиртового извлечения добавляют 1 мл кислоты серной концентрированной, 1 мл этанола и 1 каплю 10 % раствора железа сульфата. В присутствии сапонинов образуется сине-зеленое окрашивание.

2. При добавлении к 2 мл водного извлечения 1 мл 10% раствора натрия нитрата и 1 капли кислоты серной концентрированной образуется кроваво-красное окрашивание.

3. При добавлении к 2 мл спиртового извлечения 1 % раствора холестерина образуется белый осадок.

Количественное определение

Единого точного метода количественного определения сапонинов в сырье нет, ввиду их разнообразного строения.

1. Ранее использовали гравиметрический метод, основанный на физических свойствах сапонинов: разной растворимости гликозидов и агликонов. Сапонины из сырья экстрагируют метиловым или этиловым спиртом в аппарате Сокслета. Экстракт упаривают под вакуумом, сапонины осаждают органическим растворителем; отфильтровывают, промывают, высушивают до постоянной массы и взвешивают. Результаты получаются завышенные, так как кроме сапонинов осаждаются сопутствующие вещества. Более точные результаты могут быть получены, если провести гидролиз суммы сапонинов, отделить агликоны, высушить и взвесить.

2. В настоящее время для определения суммы сапонинов и индивидуальных веществ используют физико-химические методы (спектрофотометрия, колориметрия), основанные на способности сапонинов при нагревании давать окрашенные продукты с кислотными реагентами. Например, при определении суммы сапонинов каштана конского, синюхи голубой используют кобальта хлорид с кислотой серной концентрированной; женьшеня – ванилин с кислотой серной концентрированной, стероидных сапонинов – п-диметил-аминобензальдегид в 4 моль/л растворе кислоты хлористоводородной. Калибровочные графики строят по стандартному образцу (например, эсцину) или кобальта хлориду. Эти методы часто используют в сочетании с предварительным хроматографическим разделением суммы сапонинов. Для кислых сапонинов (например, аралозиды) используют потенциометрическое титрование после предварительного гидролиза сапонинов. Иногда для сырья, содержащего сапонины (при научных исследованиях) определяют пенное число и гемолитический индекс.

Пенное число – наименьшая концентрация извлечения из 1 г сырья, при встряхивании которого в течение 15 сек образуется устойчивая в течение 15 мин пена. Основан на физических свойствах сапонинов.

Гемолитический индекс – наименьшая концентрация извлечения из 1 г сырья или раствора чистого сапонина, которая вызывает гемолиз эритроцитов, содержащихся в 1 мл 2 % раствора дефибринированной крови барана. Извлечение сапонинов и разведение проводят изотоническим раствором. Готовится серия разведений и определяется наименьшая концентрация. При работе с кровью других животных параллельно ставят контроль со стандартным сапонином (0,02 % раствор дигитонина). Результаты выражают соотношением массы сырья (1 г) и разведения. Например 1:5000, 1:20000 и т.д.

Эти методы не дают представления о количественном (%) содержании сапонинов, а свидетельствуют о поверхностной или гемолитической активности.

2. Растительное сырье, содержащее стероидные сапонины

2.1 Диоскорея ниппонская

Rhizomata cum radicibus Dioscoreae nipponicae корневища с корнями диоскореи ниппонской

Собранные в течение всего вегетационного периода (начиная с конца апреля до глубокой осени), тщательно очищенные от земли, освобожденные от остатков стеблей, разрезанные на куски и высушенные корневища с корнями дикорастущего или культивируемого многолетнего травянистого растения диоскореи ниппонской Dioscorea nipponica Makino, сем. Диоскорейные Dioscoreaceae; используют в качестве лекарственного сырья.

Диоскорея ниппонская (диоскорея японская) многолетняя двудомная травянистая лиана с горизонтальным толстым коричневато-белым ветвистым корневищем длиной до 1,5 м и диаметром до 3 см с немногочисленными тонкими, неветвистыми, упругими и жесткими корнями. Стебли тонкие, вьющиеся, длиной до 4 м; листья очередные, черешковые, широкояйцевидные с сердцевидным основанием. Нижние листья семилопастные, с короткими боковыми лопастями и более вытянутой крупной заостренной средней; верхние листья трех- и пятилопастные или с почти не выраженными лопастями. Цветки раздельнополые, мелкие, с простым шестираздельным желтовато-зеленым околоцветником, собранные в кисти. Плод почти сидячая, трехгнездная, широкоэллиптическая коробочка с тремя широкими крыльями на ребрах. Цветет в июле-августе, семена созревают в августе-октябре.

Это дальневосточный вид. Растет в Приморском крае, южных районах Хабаровского края и на юго-востоке Амурской области. Чаще всего встречается во вторичных растительных сообществах, возникающих на местах вырубок и пожаров, на старых залежах, где она развивает наиболее толстые и длинные корневища. Выше 500 м над уровнем моря в горы не поднимается.

Размножается диоскорея семенами, но лучше вегетативно отрезками корневищ длиной 10-12 см с заделкой в почву на глубину 10 см.

Химический состав. Действующими веществами корневищ с корнями диоскореи ниппонской являются стероидные сапонины (главный из них диосцин 2,2%), наиболее высокое содержание которых отмечено в фазу бутонизации. Кроме того, надо отметить присутствие крахмала, жирного масла.

Заготовка, первичная обработка и сушка. Сырье собирают в течение всего вегетационного периода, начиная с конца апреля и до глубокой осени, но для восстановления зарослей корневища с корнями лучше собирать в сентябре-ноябре (после созревания семян), когда они достигают максимальных размеров, хотя содержание диосгенина несколько снижается.

Необходимо оставлять примерно 1/3 встречающихся на участке растений. Не подлежат заготовке экземпляры высотой менее 1 м на место выкопанных растений рекомендуется высеять семена или зарыть кусочки корневищ. Повторная заготовка на одном и том же участке возможна лишь через 20 лет.

Корневища, располагающиеся между корнями деревьев, обычно выкапывают кирками. Сырье отряхивают от земли, удаляют стебли и загнившие части и рубят на куски длиной до 10 см, после чего складывают в мешки и в день сбора доставляют к месту сушки.

Оптимальной считается сушка в сушилках при температуре нагрева корневищ до 50С. Предварительно их подвяливают под навесами или на токах. Можно сушить сырье и на чердаках с хорошей вентиляцией, разложив корневища слоем не толще 10 см и периодически их переворачивая. Допускается сушка на солнце.

Стандартизация. Качество сырья регламентировано требованиями ФС 42-1521-80.

Внешние признаки. Цельное сырье представлено кусками цилиндрических, слегка изогнутых или перекрученных корневищ с корнями длиной до 30 см и диаметром до 2 см. Корневища снаружи светло-коричневые или желтоватые, продольно-морщинистые, покрыты тонким слоем пробки, которая обычно в сырье легко отслаивается. На верхней стороне четко видны остатки отмерших стеблей. От корневищ отходят немногочисленные упругие тонкие корни до 40 см длиной и около 1 мм в диаметре. Излом корневищ ровный, белый или кремовый. Запах слабый, специфический. Вкус горький, слегка жгучий. Измельченное сырье состоит из кусочков различной формы размером до 7 мм.

Микроскопия. На поперечном срезе корневищ виден тонкий слой пробки. Кора узкая и состоит из мелких, тангентально-вытянутых клеток с неодревесневшими оболочками. В отдельных, более крупных клетках находятся пучки рафид длиной около 100 мкм, ориентированные вдоль корневища. Эндодерма выражена неясно. В центральном цилиндре расположены закрытые проводящие коллатеральные пучки более мелкие по периферии и более крупные округлые в центре. В пучках паренхима почти отсутствует, трахеиды широкопросветные. Клетки паренхимы многоугольные, плотно прилегающие друг к другу. Оболочки клеток одревесневшие, с многочисленными крупными порами. В клетках паренхимы в большом количестве простые крахмальные зерна различной формы (угловатые, округлые и др.) диаметром от 1,5 до 24 мкм. Вместе с друзами встречаются капли жирного масла.

Числовые показатели. Фуростаноловых гликозидов не менее 3%; влажность не более 13%; золы общей не более 3,5%; отшелушившейся пробки и обломков мелких корней диоскореи не более 1,5%; органической и минеральной примесей не более чем по 0,5%. Для измельченного сырья, кроме того, определяют содержание частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм, не более 1%, и частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 0,5 мм, не более 5%.

Хранение. Сырье хранят по общему списку. Срок годности 3 года.

Использование. Терапевтическое действие – сосудорасширяющее, гипотензивное, гиполипидемическое, гипохолестеринемическое, диуретическое, м-холиномиметическое. Показания: болезни сердечно-сосудистой, пищеварительной, репродуктивной, эндокринной системы. В клинике эффективна при лечении ревматоидных артритов, подагры. Из корневищ с корнями получают препарат "Полиспонин", содержащий водорастворимые сапонины. Применяется в комплексной терапии атеросклероза, гипертонической болезни. Ранее использовались корневища с корнями диоскореи кавказской Dioscorea caucasica Lipsky для получения препарата "Диоспонин" аналогичного действия.

2.2 Диоскорея дельтовидная

Rhizomata cum radicibus Dioscoreae deltoideae - корневища с корнями диоскореи дельтовидной

Собранные осенью, освобожденные от остатков стеблей, очищенные от земли, разрезанные на куски и высушенные при температуре не выше 50С корневища с корнями многолетней культивируемой лианы диоскореи дельтовидной Dioscorea deltoidea Wall., сем. Диоскорейные – Dioscoreaceae; используют в качестве сырья.

Диоскорея дельтовидная – многолетняя двудомная листопадная лиана. Корневища с клубневидными утолщениями, на изломе – желтые. Листья очередные, сердцевидные с оттянутой верхушкой.

Родина – Индия (штаты Джамму и Кашмир), Китай, Индокитай, но растения растут и плодоносят и в Подмосковье. Можно выращивать как многолетнее растение в Крыму, на Кубани, в Закавказье, Приморском крае и других районах. Размножается вегетативным способом (отрезками корневищ) и семенами. Площадь питания 6030 см. Наибольший прирост корневища дают на третьем году жизни, поэтому следует заготавливать растения именно этого возраста, одновременно закладывая новые плантации отрезками корневищ.

Химический состав. Корневища с корнями накапливают до 8% диосгенина, содержание которого повышается с возрастом растения.

Заготовка, первичная обработка, сушка, упаковка – см. Диоскорея ниппонская.

Стандартизация. Качество сырья регламентировано требованиями ТУ 64-4-63-85.

Внешние признаки. Цельное сырье состоит из кусков корневищ длиной до 10 см, толщиной около 2 см, очень плотных, узловатых, слабо разветвленных, с короткими отростками, на поверхности которых находятся группы спящих почек. Пробка частично отслаивается. От корневища отходят слабо разветвленные придаточные корни длиной до 20 см, толщиной около 1 мм, плотные, упругие.

Цвет корневищ с поверхности от светло-коричневого до серовато-коричневого, в изломе – от желтоватого до кремового с ярко-желтой полосой под пробкой; цвет корней от светло-желтого до светло-коричневого (с отшелушивающейся пробкой). Запах слабый, неприятный.

Измельченное сырье состоит из кусочков корневищ и корней различной формы размером до 7 мм. В сырье должно быть не менее 2,7% диосгенина при влажности не более 13%.

Микроскопия. На поперечном срезе корневища видна тонкая многослойная пробка, отслаивающаяся по феллодерме. Кора узкая, клетки паренхимы тонкостенные. Большую часть занимает центральный цилиндр, в котором разбросаны биколлатеральные и центрофлоэмные проводящие пучки. В клетках паренхимы коры и центрального цилиндра – рафиды, округлые или овальные крахмальные зерна размером 4-32 мкм, мелкие капли масла.

Характеристики

Список файлов курсовой работы