1631210415-7aa5d1a33c60d25f6e8155093050c0b9 (558177), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Например, при действии N-бромсукцинимида натриалкиламмониевые соли уридинфосфатов в диоксане за несколько дней прикомнатной температуре удается получить практически количественные выходысоответствующих 5-бромпроизводных.Галогенирование можно проводить с использованием солей в присутствии аммонийцерий нитрата (гексанитратоцерата (IV) аммония). Выходы при этом превышают90%.17Галогенирование пиримидиновых оснований в составе нуклеозидов существеннооблегчается в присутствии аммоний-церий нитрата (гексанитратоцерат (IV)аммония, CAN). Выходы йод-, бром- и хлорпроизводных при этом превышают 90 %Кумаром и др.
был предложен эффективный синтез галогенпроизводных уридинаи дезоксиуридина, с помощью азида натрия, галогенирующих агентов (NBS, NCS,ICl), с выходами близких к количественным18Фторурацил относится к группе противоопухолевыхантиметаболитов. Является конкурентнымингибитором фермента тимидилатсинтетазы.19Спектральные и кислотно-основные характеристикинуклеозидных производных урацила и его галоидзамещенныхУменьшение рКа при введении галоида в гетероциклическоеядро дает возможность отделять галоидированныенуклеозиды от негалоидированных методами, основанными наразличии в величине заряда, например, ионообменнойхроматографиейСоединениеУридинДезоксиуридин5-Фторуридин5-Фтордезоксиуридин5-Хлоруридин5-Хлордезоксиуридин5-Бромуридин5-Бромдезоксиуридин5-Иодуридин5-ИоддезоксиуридинmaxpH 1.0-5.0262262271271278279279280291287pKa9.259.307.757.808.207.908.207.908.508.2020Для чего мы уделяем внимание вопросамгалоидирования гетероциклическихоснований?Необходимо решать задачи по введению репортерных групп вгетероциклические основания21Бромдезоксиуридин - мутаген••У бромдезоксиуридина по сравнению с уридином и тимином таутомерное равновесие между кето- иоксиформами в значительно большей мере смещено в сторону последней, хотя кетоформа остаетсядоминирующей.
Кетоформа сохраняет сродство к аденину, поэтому бромдезоксиуридин преимущественновключается в участки, на которых должен находиться дезокситимидин. Однако получающиеся матрицыиз-за повышенного содержания окситаутомера при участии в построении комплементарной цепи могутспособствовать отбору в точке нахождения фрагмента бромдезоксиуридина не аденилового, а гуаниловогонуклеотида.На месте исходной пары А-Т образуется пара GBr5U.
При последующем цикле репликации цепь,содержащая фрагмент дезоксигуанозина, будет способствовать отбору цитидилового нуклеотида, врезультате чего образуется пара G-C.Спектральные и кислотно-основные характеристики нуклеозидных производных урацила и егогалоидзамещенныхСоединениеУридинДезоксиуридин5-Фторуридин5-Фтордезоксиуридин5-Хлоруридин5-Хлордезоксиуридин5-Бромуридин5-Бромдезоксиуридин5-Иодуридин5-ИоддезоксиуридинmaxpH 1.0-5.0262262271271278279279280291287pKa9.259.307.757.808.207.908.207.908.508.2022Метод инкорпорации 5-бромдезоксиуридинаИНКОРПОРАЦИЯ – включение тест молекул вприродные макромолекулы.Используется для выявленияпролиферирующих клеток в живых тканях.5-Бромдезоксиуридин способен заменитьтимидин в процессе репликации ДНК.Иммуногистохимическое окрашивание сантителами к бромдезоксиуридину позволяетобнаружить включенныймодифицированный нуклеозид, тем самымвыявляя пролиферирующие клетки.Сверху - вниз: Проявление с помощью антибромдезоксиуридиновых антителбромдезоксиуридиновой метки в клеткахгладкомышечной опухоли; лейомиосаркомынизкой (6.1%) и высокой (17.4%) степенизлокачественности23СЕКВЕНИРОВАНИЕ ПО СЭНГЕРУ.ФЛУОРЕСЦЕНТНЫЕ МЕТОДЫ РЕГИСТРАЦИИМеченные терминаторы.
Задачабиооргаников – разработатьтакие флуоресцирующиепроизводные терминаторов,которые, несмотря наприсоединение к основаниюобъемистого радикала, сохранялибы субстратные свойства.Четыре терминатора – производные четырех dNTP, которыевозбуждаются при 488 нм, но дают четыре разных спектрафлуоресценции. Это позволяет проводить электрофорез продуктоврепликации в одном капилляре, однако регистрировать не только самфакт флуоресценции, но и спектр каждого выходящего из капиллярапродукта терминации, что позволяет идентифицировать последовательнокаждыйвходящийвпродуктрепликациитерминирующийдидезоксинуклеотид.Получение терминирующих дидезоксипиримидин-5’-трифосфатовдля секвенирования по Сэнгеру.25Тимидилат-синтаза – фермент-мишень для химиотерапии ракаТимидин-5’-монофосфат (dTMP) образуется из dUMPв реакции, катализируемой тимидилатсинтазой.Донором метильной группы, появляющейся в 5положении пиримидинового кольца в молекуле dTMP,служит кофермент тимидилатсинтазы – N5,N10метилен-Н4-фолат.
С помощью этого кофермента вмолекулу dUMP включается метиленовая группа ивосстанавливается в метильную, используя 2 атомаводорода от Н4-фолата. Источник метиленовойгруппы – глицин. Метиленовая группа в молекулеметилен- Н4-фолата может превращаться в другиеодноуглеродные фрагменты: метильный (–СН3),метенильный (-СН=) и формильный.26ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ dUMP С НУКЛЕОФИЛЬНЫМИ РЕАГЕНТАМИ ИНУКЛЕОФИЛЬНЫМИ ГРУППАМИ БЕЛКА27Отличительные особенности фторпроизводных уридина при введенииметильной группы28.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
