Автореферат (1151630), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Шестаягруппа включала коров, с интервалом от первого осеменения до плодотворногоболее 51 суток и не имела случаев мертворождений и абортов. В седьмойгруппе у коров отмечали аборты и мертворождения и период от первого доплодотворного осеменения находился в пределах до 50 суток. В восьмую группу вошли коровы с периодом от первого осеменения до плодотворного более 51суток и коровы имели как аборты, так и мертворожденных телят.
Кровь для исследований брали у коров из яремной вены до утреннего кормления в специальные гепаринизированные шприцы. Препараты метафазных хромосом готовили из лейкоцитов крови.Учет и просмотр препаратов осуществляли под микроскопом Biolar 1DP5A. У каждой особи просматривали не менее 100 метафаз. Классификациюцитогенетических нарушений оценивали по методике Бочкова Н.П. и др.(1989)при этом вели учет следующих кариологических показателей: плоидность; расположенность отдельно лежащих хромосом; наличие двух ХХ хромосом; отсутствие одной Х хромосомы; наличие структурных нарушений хромосом (разрывы, пробелы) и ассоциативную способность хромосом.
Для каждой коровы вкаждой группе в процентах от числа просмотренных метафаз определяли долюполиплоидных клеток, анеуплоидных клеток со структурными нарушениями иассоциациями хромосом.В работе использовались племенные и другие зоотехнические документы ЗАО ПЗ «Повадино». Для генетического анализа были проанализированыродословные коров и племенных быков. Данные по воспроизводительным качествам коров были получены из журналов осеменений и отелов, регистрацииприплода закрепляемых быков.
У коров учитывали: продолжительность сервиспериода, межотельного периода, индифференс-периода (от отела до плодотворного осеменения), интервал между первым и плодотворным осеменением, воз7раст первого осеменения, продолжительность стельности и продолжительностьсобственного эмбриогенеза.При оценке показателей продуктивности учитывали удой за первую лактацию, анализировали качественные показатели молочной продуктивности(массовую долю жира и белка). Расчетным путем определяли количество молочного жира и белка.В пробах сыворотки крови фотометрическим методом определяли содержание глюкозы, общего белка, альбуминов и глобулинов, содержание мочевины, общего билирубина и минеральных веществ, к которым относили кальций и фосфор. В пробах крови определяли активность аспартатаминотрансферазы (АСТ), аланинаминотрансферазы (АЛТ). Исследования были проведены влаборатории «Шанс-Био».Биометрическую обработку данных с вычислением общепринятых показателей как средней величины, среднеквадратического отклонения, ошибкисредней величины, критерия достоверности и коэффициентов корреляции проводили по формулам и алгоритмам (Бакай А.В., Кочиш И.И., СкрипниченкоГ.Г., 2006), с использованием компьютерных программ Microsoft Excel 2007 иStat graphics Plus.8Индифференс-период(от отела до первой охоты)Iдо 50 суток без нарушенийIIболее 51 суток безнарушенийIIIдо 50 суток + абортыи м/рIVболее 51 суток аборты и м/рИнтервал (от первого до плодотворного осеменения)VVIдо 50 суток без нарушенийболее 51 суток безнарушенийVIIдо 50 суток + абортыи м/рVIIIболее 51 суток +аборты и м/рПроисхождениеЛинейная принадлежность коровПлеменные быкиКариологический анализВоспроизводительныекачестваПродуктивностьПолиплоидия, Анеуплоидия, Аберрации, Ассоциации, ФрагментыИндифференс-период, сервис-период,межотельный период, возраст первогоосеменения, возраст первого отелаУдой за 305 суток первой лактации,массовая доля жира, массовая долябелка, количество молочного жира,количество молочного белкаБиохимический состав кровиГлюкоза, ммоль/л; общий белок, г/л; альбумины и глобулины, г/л; мочевина, ммоль/л;билирубин об., мкмоль/л; кальций, моль/л;фосфор, моль/л; АСТ, ед./л; АЛТ, ед./лСтатистический анализ ( ±Sx, r, td)Рисунок 1 – Схема исследований93.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1 Кариотипический статус коров с различными нарушениями репродуктивных функцийК аномалиям образующим спонтанную кариотипическую изменчивостьотносят числовые или геномные (полиплоидия и анеуплоидия) мутации, а также структурные или хромосомные (пробелы, разрывы, фрагменты, делеции идр.) мутации. Цитогенетический анализ может дать объективную информациюо стабильности генома животных. Спектр и частота геномных нарушений представлена в таблице 1.Таблица 1 - Спектр и частота хромосомных мутаций у коров с нарушениями репродуктивных функций (n=232)ГруппыПолиплоидия,Анеуплоидия,коров%%I0,98±0,01***3,55±0,013,55±0,01***55,00±0,36II1,12±0,013,20±0,024,17±0,0352,00±0,54III2,30±0,025,60±0,028,43±0,02***58,69±3,97IV2,44±0,035,80±0,038,65±0,05***88,00±2,60V2,00±0,02**4,18±0,014,89±0,0168,79±1,66VI2,00±0,01**4,77±0,014,47±0,0141,44±3,29VII1,98±0,035,60±0,05**8,53±0,0471,71±0,74VIII2,50±0,035,90±0,03**8,91±0,0489,00±2,08Аберрации, %Ассоциации,%Примечание: здесь и далее достоверно: *) при P>0,95; **) при P>0,99; ***)при P>0,999При оценке частоты полиплоидных клеток в клетках крови у коров сразными воспроизводительными качествами нами установлено, что достовернобольшим уровень полиплоидии оказался у коров восьмой группы (2,50 %), которые имели частые случаи мертворождений и абортов и отличались наиболеепродолжительным периодом (более 51 суток) от первого осеменения до плодо10творного.
Наименьшая доля полиплоидных клеток встречается у коров первойгруппы (0,98 %), имеющих индифференс-период до 50 суток и при использовании которых не наблюдались аборты и мертворожденные телята (Р>0,999).В первой группе у коров с индифференс-периодом до 50 суток (они неимели нарушений репродуктивных функций), доля анеуплоидных клеток составляет 3,55 %, тогда как у коров третьей группы с индифференс-периодом от51 суток и имеющих аборты уровень анеуплоидии возрастает до 5,60 %, в четвертой группе коров с нарушениями воспроизводительных способностей анеуплоидии составила 5,80 %.
Достоверно большим уровень, анеуплоидных клеток также отмечался в седьмой и восьмой группах – 5,60 % и 5,90 %, соответственно (Р>0,99).При оценке спектра хромосомных нарушений установлено, что доляаберрантных клеток оказалась наименьшей в первой группе (3,55 %), тогда какв третьей и четвертой группах мы наблюдаем достоверно большую долю клеток с разрывами хромосом 8,43 % и 8,65 %.(Р>0,999).У коров разных групп способность вступать в ассоциации различалась инаходилась в пределах от 41,44 % до 89,00 %. В большей степени это явлениепроявилось у коров восьмой группы с наличием абортов, мертворождений ипродолжительностью периода от первого осеменения до плодотворного более51 суток – 89,0 %.У коров с наличием случаев мертворождений уровень ассоциативнойспособности хромосом находился в пределах от 41 до 88 %, у коров без нарушений от 41,44 до 55,00 %.
Более частые объединения хромосом состояли из 3- 4 хромосом, реже встречались ассоциации из двух хромосом. В целом у коровс нарушениями репродуктивных функций ассоциативная способность достоверно выше, чем у коров с отсутствием таковых.Мы провели анализ полиплоидных клеток с целью установления плоидности каждой из них. Анализ материалов таблицы 2 показал, что среди полиплоидных клеток меньше всего было тетраплоидных (4n) и больше всего октоплоидных (8n) клеток.11Таблица 2 – Число наборов хромосом в полиплоидных клеткахГруппыкоровПолиплоидия,%IIIIIIIVVVIVIIVIII0,98±0,01***1,12±0,012,30±0,022,44±0,032,00±0,02**2,00±0,01**1,98±0,032,50±0,03Число наборов хромосом в одной клетке,% от числа полиплоидных клеток4n6n8n и более18,628,453,020,334,245,517,229,353,519,836,443,816,935,647,518,341,146,117,438,144,516,737,445,9Причиной анеуплоидии является нерасхождение хромосом или хроматид в митозе или мейозе.
Также этому может способствовать элиминация поврежденных хромосом. Результаты исследования анеуплоидии представлены втаблице 3.Таблица 3 - Анеуплоидия у коров с нарушениями репродуктивныхфункций, %ГруппыкоровГипоплоидияГиперплоидияАнеуплоидияIIIIIIIVVVIVIIVIII2,99±0,042,66±0,064,69±0,054,93±0,023,52±0,034,07±0,067,47±0,047,77±0,040,56±0,020,54±0,010,91±0,010,87±0,020,66±0,010,70±0,011,06±0,031,14±0,013,55±0,013,20±0.025,60±0,025,80±0,034,18±0,014,77±0,018,53±0,058,91±0,03Истиннаяанеуплоидия(расчетная)1,121,081,821,741,321,402,122,28Анализ данных таблицы 3 показал, что анеуплоидия в основном формируется за счет гипоплоидных клеток.12При изучении спектра структурных нарушений хромосом (таблица 4)было установлено, что у коров нарушения хромосом представлены как одиночными фрагментами, так и парными.
У коров первой группы одиночныхфрагментов больше, почти в два раза, чем парных. Такое же явление мы наблюдаем у коров седьмой группы парных фрагментов 1,12 %, против 2,40 %одиночных.Таблица 4 - Частота хромосомных и хроматидных разрывов у коров с разными формами нарушений репродуктивных функций, %ФрагментыГруппы коровРазрывыВсегоаберрацийодиночныепарныевсегоI1,300,702,001,553,55II1,250,822,072,104,17III2,111,353,464,978,43IV2,171,934,104,558,65V1,540,902,442,454,89VI1,000,881,882,594,47VII2,401,123,525,018,53VIII2,171,894,064,858,913.2 Кариотипическая нестабильность у потомков разныхплеменных быковВ условиях ЗАО ПЗ «Повадино» создано уникальное стадо, животныеимеют высокую продуктивность. При анализе цитогенетических нарушений(таблица 5) у потомков племенных быков разных линий установлено, что дочери отдельных племенных быков имеют высокий процент как аберрантных клеток, равно как и повышенный уровень анеуплоидии и полиплоидии.13Таблица 5 - Цитогенетические показатели у коров разных генотипов с нарушениями репродуктивных функций, %Спектр и частота нарушенийхромосомПолиплоидия Анеуплоидия АберрацииЛинияПлеменные быкиРефлекшнСоверинг198998Ног Бадус-М 490459(8 группа)Вис БэкАйдиал1013415МонтвикЧифтейн95679Лугант - М 463781(3 группа)Аякс 10895003(7 группа)Пегас 1210(7 группа)Бутембо-М 364143450(4 группа)4,20±0,115,00±0,088,10±0,093,90±0,126,30±0,107,50±0,084,00±0,085,60±0,108,50±0,092,90±0,104,70±0,127,50±0,113,00±0,095,80±0,088,6±0,123.3 Хозяйственные и биологические особенности коров с разными нарушениями репродуктивных функцийНами проведен сравнительный анализ некоторых показателей плодовитости у коров с нарушениями репродуктивных функций (таблица 6).Таблица 6 - Показатели плодовитости у коров с разными формами нарушений репродуктивных функцийПродолжительность, сутокГруппыкоровnIСтельностьСервиспериодИндифференс-периодИнтервалМежотельныйпериод38270±178,0±0,3***48±130,0±0,3348±1**Возрастпервогоосеменения513±1II20271±195,0±0,5**77±118,0±0,5366,0±0,5552±1826±1III39277±1143±1***34,0±0,4109±1420±1579±1852±1IV17277±2152±3***97±155±1429±2597±2874±2V57277±188±139,0±0,349,0±0,2362±1549±1821±1VI43269±1138±175,0±0,363,0±0,3419±1528±1803±1VII12269±2129±185±144±1398±3597±2870±3VIII6260±1137±1**64±173±1397±2630±2**907±3**14Возрастпервогоотела788±1При оценке межотельного периода установлено, что достоверно меньшим по продолжительности он был у коров первой группы 348 суток, противкоров всех остальных групп (Р>0,999).Поздним сроком полового созревания и прихода в охоту характеризовались коровы восьмой группы - 21,0 месяц (630 суток), у них же был и болеепоздний отел 907 суток в отличие от коров остальных групп (Р>0,99).3.4 Корреляция между показателями кариотипической нестабильности укоров с разными формами нарушений репродуктивных функцийНами предпринята попытка установления возможности прогнозирования одних кариотипических показателей по уровню других, связанных в тойили иной степени.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
