Автореферат (1151534), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Часть полученных результатов диссертации были представлены в материалах VIII Всероссийской научно-практической конференции с международным участием на тему: «Молекулярная диагностика-2014» (Москва, 2014) и втрудах трех международных научно-практических конференций на тему: «Повышение конкурентоспособности животноводства и задачи кадрового обеспечения» (Быково, 2014; 2015; 2016). По теме диссертации опубликовано 10 научных работ, из них четыре в рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ журналах (Известия ТСХА, 2011, № 2; Известия ТСХА, 2011. № 5; Вестник РАСХН,2015. №1; Проблемы биологии продуктивных животных, 2015. №2).Основные положения, выносимые на защиту:– анализ результатов микроядерного теста у различных видов и пород сельскохозяйственных животных. Характеристика эритроцитов крови овец романовской породы с помощью микроядерного теста.– иммуногенетические особенности романовской породы овец по семи системам групп крови;– анализ полиморфных систем белков крови (гемоглобин, трансферрин, альбумин, преальбумин) у овец романовской породы;– оценка встречаемости аллелей гена многоплодия у овец романовской породы.Структура и объем диссертации.
Диссертационная работа состоит извведения, основной части диссертации, которая включает в себя обзор литературы, материал и методы исследований, результаты собственных исследований,обсуждение результатов исследований. Далее идет Заключение, в нее входятвыводы, практические предложения и список использованной литературы.
Материал в диссертации изложен на 131 страницах компьютерного текста, содержит 25 таблиц, 3 рисунка и 3 фото. Библиография включает 149 источников, втом числе 75 - на иностранных языках.2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙРабота проводилась на основании общей схемы исследований, представленной на рисунке 1. Исследования образцов крови местных пород крупногорогатого скота, лошадей, овец, коз и яков из Монголии (Хубсугул) проводилисовместно с сотрудниками лаборатории сравнительной генетики животныхИОГен РАН при содействии доктора Цэндсурэн Цэдев, сотрудника Институтабиологии Монгольской академии наук.Образцы крови от 34 овец эдильбаевской породы бирликского и суюндукского типов из ПЗ ООО «Волгоград–Эдильбай» Волгоградской области, атакже мазки крови орловских, русских, стандартбредных рысаков и их помесейиз конезавода “Поворот В.П.” Московской области и от 7 овцебыков с полуострова Таймыр исследовали под руководством академика РАН В.И.
Глазко ид.б.н., профессора Т.Т. Глазко.7Генетическая оценка видов и пород животных,разводимых в разных экологических условияхИсследованные виды и породы животных1. Микроядерный тест – романовская порода овец, разные половозрастные группы;эдильбаевская порода овец, бирликского и суюндукского типов, зона разведения – племенные хозяйства Ярославской и Волгоградской областей; лошади, яки, крупный рогатыйскот, местныепородыовеци коз – биосферныйзаповедник«Хубсугул»,Монголия;полиморфныхбелкову овецромановскойпороды – племенныехозяйстваВоронежскоЯровцебыки – полуостров Таймыр.2.
Генетический анализ овец романовской породы из племенных хозяйств Ярославской области, Республики Башкортостан и Республики Татарстан по 7 системам группкрови и 4-м полиморфным белкам (гемоглобин, трансферрин, альбумин, преальбумин).3. ДНК-анализ локуса ВМР-15 у овец романовской породы Воронежской области.Изученные показателиМикроядерныйтест- число микроядерв эритроцитах;- определение величины микроядерв эритроцитах;- классификациятипов микроядер вклетках;- анализ встречаемости эритроцитовс микроядрами уживотных разныхвидов и пород.Группы крови– характеристика овец романовской породыпо фенотипическимклассам,генотипам и аллелям семи систем групп крови.Полиморфныебелки- определение генотипов и аллелей влокусах полиморфных белков;ДНК-анализлокуса ВМР-15- встречаемость аллелей и генотипов в локусе ВМР-15 у овецромановской породы;- оценка генетического равновесия визученных локусах;- анализ взаимосвязигенотипов с многоплодием маток и жизнеспособностью ягнят;- определение уровня гетерозиготностии коэффициента эксцесса.характеристикапопуляций овец романовской породы.- характеристика овцематок с различными генотипами по хозяйственно-полезнымпризнакам.Выводы и практические предложенияПерспективы дальнейших исследованийРисунок 1 – Общая схема исследований8Для исследований по микроядерному тесту кровь брали также у 35 овецромановской породы: 8 баранов, 20 овцематок и 7 ягнят в возрасте 2 мес., принадлежавших племенным хозяйствам Ярославской области – ООО "КХ Абдулатипов С.М.", ООО "Атис СХ", ООО "Полет", ООО "Родина".
Цельную кровьотбирали в пробирки с консервантом в соотношении 1:4. Постановку микроядерного теста осуществляли по методике Н.А. Шапиро и др. (2003).Для подсчета эритроцитов с микроядрами брали каплю крови и разводилифизиологическим раствором (1:1), затем готовили мазки на обезжиренныхпредметных стеклах, обработанных смесью Никифорова. Мазки фиксировалиметиловым спиртом и высушивали при комнатной температуре. Окраску мазков проводили по методу Папенгейма с использованием растворов МайГрюнвальда и Гимзы. Для анализа клеток использовали бинокулярный микроскоп фирмы Motic со встроенным цифровым фотоаппаратом (DMBA300) приувеличении в 1000 раз. Подсчет эритроцитов с микроядрами проводили для каждого исследуемого животного в 37 рабочих полях. В каждом поле подсчитывали примерно по 80 эритроцитов, что суммарно составляет 3000 клеток.
Статистическую достоверность различий частот встречаемости цитогенетическиханомалий между группами животных оценивали по критерию Стьюдента. Полученные данные выражали в промилях (в ‰), т.е. числом эритроцитов с микроядрами к общему количеству подсчитанных клеток в процентах (ИвантерЭ.В., Коросов А.В., 2010).Исследования по частотам антигенов, аллелей и генотипов по 7 системамгрупп крови у овец романовской породы проводили на образцах, взятых из 4–ххозяйств: КХ Абдулатипова С.М. в Гаврилов-Ямском районе Ярославской области (n=40); КФХ З.Г. Алтынбаева Ишимбаевского района Республики Башкортостан (n=47); ООО «ПХ Пионер» Арского района Республики Татарстан(n=40) и ООО «Конезавод Воронцовский» Переславского района Ярославскойобласти (n=40).
Группы крови и полиморфизм белков крови определяли в лаборатории генетики сельскохозяйственных животных ВИЖа имени акад. Л.К.Эрнста совместно с д.б.н., профессором Н.С. Марзановым; к.б.н. Л.К. Марзановой и к.б.н. С.Н. Петровым. Определение эритроцитарных антигенов 7 системгрупп крови овец проводили по 15 сывороткам–реагентам.
Постановку реакцийгемолиза и агглютинации осуществляли по описанным ранее методикам (Н.С.Марзанов, 1994). Полиморфизм белков крови изучали с помощью электрофореза на полиакриламидном геле (ПААГ). Идентификацию вариантов белковкрови по локусам гемоглобина (НВ), трансферрина (TF), альбумина (ALB),преальбумина (PRE) проводили методом вертикального электрофореза на полиакриламидном геле (С.Н. Петров, 2008).Для исследования влияния полиморфного гена костного морфогенетического белка 15 (BMP-15) на плодовитость была взята цельная кровь от 50 овцематок романовской породы МУСХП «Прогресс» Воронежской области. Возраст животных на момент взятия образцов крови был примерно одинаковым исоставлял 4–5 лет. Выделение ДНК из цельной крови для определения нормального или дикого (W–wild) и мутантного (M–mutant) аллелей гена костного9морфогенетического белка 15 (BMP-15) проводили по методике, описанной Sh.Polley et al.
(2009) и О.П. Малюченко и др. (2011). Работа по отработке режимаПЦР–анализа была выполнена с использованием научного оборудования Центра коллективного пользования ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии"Биотехнология". Учет полученных данных по количеству родившихся ягнят,количеству ягнят на момент отбивки, числу яловых и выбракованных маток затри года осуществляли совместно со специалистами МУСХП «Прогресс» Воронежской области с учетом генотипов ВМР-15 локуса.
Обработку популяционно-генетических характеристик проводили на основе общепринятых подходов. Частоту встречаемости антигенов, аллелей и генотипов рассчитывали исходя из уравнения Харди–Вайнберга (Н.С. Марзанов, 1991). Коэффициент эксцесса (D), показывающий нехватку или избыток наблюдаемой гетерозиготностиу исследуемых популяций в сравнении с ожидаемой, определяли по формуле,описанной И.А. Захаровым (2006): D = (Ho–He)/He, где Ho – наблюдаемая гетерозиготность, He – ожидаемая гетерозиготность. Статистический анализ полученных данных осуществлялся по Спирмену и Стьюденту (С. Гланц, 1999).Часть цифровых материалов обрабатывали общепринятыми методами вариационной статистики с применением компьютерных программ: Microsoft OfficeExcel, 2003; STATISTICA for Windows. Version 7.
1999.3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1. Характеристика овец местной селекции из различных регионовРоссийской Федерации и Республики Монголия по микроядерному тесту.По эдильбаевской породе исследовано два внутрипородных типа – бирликскийи суюндукский. Проведен также сравнительный анализ результатов микроядерного теста у других пород овец, разводимых в различных зонах РоссийскойФедерации и Монголии (таблица 1).Различия по результатам микроядерного теста в эритроцитах наиболеевыражены между ярочками разных внутрипородных типов.
У ярок бирликскоготипа частота встречаемости эритроцитов с микроядрами (5,2±0,2‰) была достоверно выше (Р<0,001)по сравнению с овцами суюндукского типа(3,5±0,2‰). По представленным данным видно, что частоты встречаемостиэритроцитов с микроядрами у взрослых особей романовской породы (5,3±0,03)оказались близкими с такими породами овец, как эдильбаевская (бирликскийтип) (5,2±0,2‰), калмыцкая (4,3±0,3‰), монгольские местные (5,3±0,4‰).Причиной дифференциации суюндукского и бирликского типов можетбыть то, что племенные заводы располагались в разных экологических условиях. Племзавод «Бирлик» расположен в Приуралье, в Западно–Казахстанскойобласти.
Овцы суюндукского типа были приобретены из ПК «Макаш» Атыраузской области. Данный племзавод располагается рядом с широко известнымАзгирским ядерным полигоном Волгоградской области. Наблюдаемая дифференциация по микроядерному тесту обусловлена тем, что овцы суюндукскоготипа подвергались постоянному действию факторов экологического стресса всвязи с близостью мест их разведения к региону с высоким уровнем радионуклидного загрязнения.10Таблица 1 – Частота встречаемости эритроцитов с микроядрамиу исследованных пород овец, взрослые животные (‰)Породы овецnЧисло микроядер на 1000 клетокРомановская29Монгольская местная27Калмыцкая27Эдильбаевская, внутрипородные типы:Бирликский165,3±,035,3±,044,3±0,3СуюндукскийВсего3,5±0,2*4,6±0,3181174,6±0,3Примечания: * - разница данных между овцами суюндукского и бирликского типами,а также с породами: романовская, монгольская местная и калмыцкая была статистическидостоверной (Р<0,001)Хроническое действие естественного отбора способствует воспроизводству животных с повышенной устойчивостью к факторам экологическогостресса.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
