Автореферат (1151315), страница 3
Текст из файла (страница 3)
конф. «Социальная работа в современном мире:взаимодействие науки, образования и практики» (Белгород, 2014); междунар.науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы общества, науки и образования:8современное состояние и перспективы развития» (Курск, 2015); междунар.научной конф. «Актуальные проблемы современной биохимии и клеточнойбиологии» (Днепропетровск, 2015), расширенном заседании кафедрыфизиологии, фармакологии и токсикологии имени А.Н.
Голиков и И.Е. МозговаФГБОУ ФГБОУ ВО МГАВМиБ – МВА имени К.И. Скрябина (Москва, 2015);междунар. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы общества, науки иобразования: современное состояние и перспективы развития» (Курск, 2016);расширенном заседании кафедры физиологии, фармакологии и токсикологииимени А.Н. Голиков и И.Е. Мозгова ФГБОУ ФГБОУ ВО МГАВМиБ – МВАимени К.И. Скрябина (Москва, 2016).Публикации. Результаты исследований представлены в 47 печатныхработах, из них: 13 статей в профессиональных изданиях, рекомендованныхВАК РФ, 4 статьи в профессиональных изданиях, рекомендованных ВАКУкраины, 3 патента на изобретение, 1 заявка на патент, 1 монография, 2учебных пособия, а также тезисы докладов в материалах конгрессов, научныхконференций, симпозиумов.Объем и структура диссертации.
Диссертация изложена на 341 страницепечатного текста и состоит из общей характеристики работы, обзоралитературы, описаний материалов и методов исследований, результатовсобственныхисследований,обсужденияполученныхрезультатовисследований, выводов и списка использованных источников. Работа содержит103 рисунка и 9 таблиц. Перечень цитируемой литературы включает 591источник, в том числе 157 отечественных и 434 иностранных.2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.Исследования проведены в 2006…2016 гг. на базе кафедры физиологии,фармакологии и токсикологии имени А.Н.
Голикова и И.Е. Мозгова ФГБОУ ВО«Московская государственная академия ветеринарной медицины ибиотехнологии имени К.И. Скрябина», научно-исследовательских лабораторийкафедры биофизики и биохимии Днепропетровского национальногоуниверситета имени Олеся Гончара,научно-исследовательского центрабиобезопасности и экологического контроля ресурсов АПК Днепропетровскогогосударственного аграрно-экономического университета, лабораторий кафедрытехнологии продуктов питания ФГБОУ ВО «Керченский морскойтехнологический университет» и частного акционерного общества «АгроСоюз» Синельниковского района Днепропетровской области с использованиемживотных разных таксонов. Для решения поставленных задач работу сэкспериментальными животными выполняли в соответствии с «Правиламипроведения работ с использованием экспериментальных животных»(приложение к приказу министерства здравоохранения СССР от 12.08.1977 г.,№7550) и Хельсинской Декларацией 2000 г.Биологические тест-объекты, используемые в исследовании, показаны нарис.
1, количество и возрастные группы исследованных животных – в табл. 1,схема проведения исследований – на рис. 2.9алюминийМодельные экспериментыКрысыдрессенасвинецхлорбензолмазутПлотваобыкновеннаяСолнечный окуньПАГпромышленные органические растворителиПриродные условияЗагрязнение среды обитания ксенобиотикамикадмийсуммарноедействиеметалловПродуктынефтепереработкиБычок-песочникКарасьСвиньидрессенаРечная дрейссенаЧерноморскаямидияРис 1 Биологические тест-объекты, используемые в исследовании состоянияживотных разных таксонов в онтогенезе при загрязнении среды обитания промышленнымиполлютантами (металлами и органическими ксенобиотиками)Методы исследования. Различные по физико-химическим свойствамфракции белков получали путем последовательной экстракции из тканейводорастворимых (в 50 мМ трис-буфере с рН 7,8), и цитоскелетных белков (тотже буфер, который дополнительно содержал 4 М мочевины).
Содержаниеобщего белка определяли двумя методами [Miller, 1964; Bradford, 1985].Исследование содержания и состава нейроспецифических белков проводили спомощью электрофореза в полиакриламидном геле [Laemmli, 1970],иммуноэлектрофореза [Grabar, 1980] и имуноблотинга [Towbin, 1988] сиспользованием моноспецифических антисывороток и моноклональныхантител. Антитела против ГФКБ, S100β и анти-IgG кролика, меченныепероксидазой хрена, приобретены в Sigma, Santa Cruz Biotechnology (USA).Количественное содержание специфических белков определяли поотносительной плотности и площади иммунопреципитатов с использованиемпрограммы "LabWork 4.0" (UVP, Великобритания, 2001) [Struzynska L.
et al.,2001; Baydas G. et al., 2003]. Астроглиальный реактивный ответ определяли10иммуногистохимическим методом с использованиемфиксированных срезов [Coventry B.J. et al., 1995].криостатныхиТаблица – 1 Количество и возрастные группы исследованных животныхТаксон, вид/порода/линияСолнечный окуньLepomis gibbosusКарась обыкновенныйСarasius сarasiusБычок песочникNeogobius fluviatilisПлотва обыкновеннаяRutilus rutilusМидия черноморскаяMytilus galloprovincialisДрейссена речнаяDreyssena polymorphaЛабораторные крысылинии WistarПомесь породкрупная белая и ландрасВозрастРыбы, n = 7156-7 месяцев2-3 года3-4 годастарше 5 лет6-7 месяцев2-3 года3-4 годастарше 5 лет3-4 годаКоличество особей/голов3-4 годаДвустворчатые моллюски, n = 1203-4 года3-4 годаКрысы, n=1801 сутки10 суток21 сутки14 суток28 суток42 суток56 суток70 сутокСвиньи, n=1400-23 суток1 год2020120202020125202451056060202020123030301812020Уровеньперекисногоокислениялипидов(ПОЛ)втканяхэкспериментальных и контрольных животных определяли по содержаниюконечных продуктов ПОЛ (ТБК-активных соединений) [Ohkawa et.
al., 1979;Чевари С. и соавт., 1991]]; Уровень антиоксидантной защиты оценивали поактивности каталазы [Королюк М.А. и др., 1988], супероксиддисмутазы (СОД)[Чевари С. и др., 1985], глутатионредуктазы [Regoli F. et al., 2004], глутатион-Sтрансферазы [Gorbi S. et al., 2004], глутатионпероксидазы [Gunzler W.A. et al.,1979]; лейкоцитарную формулу исследовали методом подсчета различныхформ лейкоцитов в мазках крови, окрашенных гематоксилином и эозином поРомановскому-Гимза; фагоцитарную активность лейкоцитов, фагоцитарноечисло, индекс завершенности фагоцитоза определяли по степени поглощения11микробных клеток тест-культуры Staphylococcus aureus; функциональнуюактивность нейтрофилов оценивали с помощью теста, основанного навосстановлении нитросинего тетразолия (НСТ-тест); бактерициднуюактивность сыворотки крови определяли по методике О.В.
Смирновой и Т.А.Кузьминой; активность лизоцима в сыворотке крови определяли по степенилизиса бактерий тест-культуры Micrococcus lisodeicticus.АктивностькаталазыСодержаниецитоскелетногоГФКБголовной мозг, печеньАктивностьСОДМолозиво, кровьСодержаниеТБК-активныхпродуктовКомплексисследуемыхпоказателейСодержание отдельныхфракцийиммуноглобулинов вмолозивеБактерициднаяактивность молозиваАктивность лизоцима всыворотке кровиКоличествогранулоцитовСодержаниецитоплазматического протеинаS100βКоличествогранулоцитовИммуногистохимическаяоценка тканейСуммарное количествомоноцитов илимфоцитовголовной мозггепатопанкреас,жабрыКровьЛейкоцитарнаяформулаФагоцитарнаяактивность лейкоцитовАктивностьглутатион-S-трансферазыАктивностьглутатион-редуктазыАктивность каталазыАктивность СОДСодержаниеТБК-активных продуктовСодержание цитоскелетногоГФКБСодержаниецитоплазматическопротеина S100βСодержаниеТБК-активных продуктовФагоцитарное числоИндекс завершенностифагоцитозаБактерициднаяактивность сывороткикровиАктивность лизоцима всыворотке кровиРис 2 Схема проведения исследованийРезультатыисследованийобрабатывалисиспользованиемпараметрических и непараметрических статистических критериев для малыхвыборок: t-критерия Стьюдента, U-критерия Уилкоксона-Манна-Уитни и тестКолмогорова-Смирнова [Кокунин, 1975; Лакин, 1990].
Расчеты проводились спомощью программ "Statistica 6.0" и "Excel 2007". Изменения показателейсчитали достоверными при P < 0,05.123 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1 Использование показателей оксидативного стресса в качествеиндикатора повреждений в условиях воздействия промышленныхполлютантов. Результаты исследований дают основания утверждать, чтомеханизмы токсических эффектов промышленных поллютантов тесно связаныс изменением окислительно-восстановительного баланса и увеличениемколичества оксидативных повреждений клеток.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
