Автореферат (1141304), страница 4
Текст из файла (страница 4)
нПКО и нПО составил 0,1 мкг цефоперазона в 0,1 мл плазмы крови.17Цефоперазонtm = 6,84112Цефоперазонtm = 6,86mAUmAU00-1012345мин6789100Цефоперазонtm = 6,741097345мин6789102345мин67891040mAU6mAU213815432-110-1012345мин67891001Рисунок 5 – ЭФГ цефоперазона в составе плазмы: 0,1 мкг/0,1 мл (1);1,0 мкг/0,1 мл (2); 20 мкг/0,1 мл (3). ЭФГ 0,1 мл интактной плазмы (4).«Капель 105М»Таблица 9 - Оценка правильности и прецизионности методики определения цефоперазона вплазме кровиIntra – dayIntеr – dayМБС, Взято на Определено, в RSD, % ɛ,% МБС, Взято на Определено, в RSD, % ɛ,%мкг/мл анализ пересчёте на (n = 3) (n = 3) мкг/мл анализ пересчёте на (n = 3) (n = 3)плазма плазмы 1 мл МБСплазма плазмы 1 мл МБСмлмл(х,%; n = 3)(х,%; n = 3)1,00,187,002,88 3,581,00,187,001,75 2,1710,00,199,705,58 7,31 10,00,1102,301,49 1,86100,00,189,701,79 2,23 100,00,189,101,07 1,33200,00,1100,301,08 1,35 200,00,197,540,83 1,03При разработке методики идентификации и количественного определения цефоперазона вткани печени, проведена сравнительная оценка методов изолирования антибиотика сиспользованием таких экстрагентов как: водный раствор натрия гидроксида, рН 9,0, буферныйраствор Бриттона – Робинсона рН 9,0, ацетонитрил.
Полученное извлечение подвергалиэкстракционной очистке и проводили определение, как при исследовании мочи.Установлено, что наибольшая степень извлечения наблюдается при использовании водногораствора натрия гидроксида рН 9,0 и составляет 65,60% (n=2).При оценке линейности методики, проводили анализ семи проб интактной печени, содержащейот 0,1 до 20 мкг цефоперазона в 0,1 г ткани печени (y = -0,0179+0,1278×X; r = 0,9995).Разработанная методика идентификации и количественного определения цефоперазона в тканипечени на трёх уровнях концентрации, показывает, что выбранные условия пробоподготовки иэлектрофореза позволяют надёжно осуществить идентификацию антибиотика в присутствииэндогенных компонентов печени (рис.
9), а результаты количественного определения отражают18вполне удовлетворительную сходимость и воспроизводимость в пределах рекомендуемойаналитической области. нПКО и нПО составил 0,1 мкг антибиотика в 0,1 г ткани печени.10,70,61mAU0,4Цефоперазонtm=6,60Цефоперазонtm=7,452mAU0,50,30,200,10-0,1012345мин678910012345мин6789102345мин6789106Цефоперазонtm=7,2553314mAUmAU42100012345мин67891001Рисунок 6 – ЭФГ цефоперазона в составе печени: 0,1мкг/0,1г(1); 1,0мкг/0,1г (2); 20,0мкг/0,1г (3).ЭФГ контрольной пробы 0,1г печени (без добавления цефоперазона) (4)Таблица 10 – Оценка правильности и прецизионности определения цефоперазона в печениIntra – dayIntеr – dayМБС, Взято на Определено, RSD, % ɛ,% МБС, Взято на Определено, RSD, % ɛ,%мкг/г анализ в пересчёте (n = 3) (n = 3) мкг/г анализ в пересчёте (n = 3) (n = 3)печень печени на 1 г МБСпечень печени г на 1 г МБСг(х,%; n = 3)(х,%; n = 3)1,00,194,003,72 4,631,00,198,006,17 7,6710,00,194,701,22 1,52 10,00,199,005,62 6,99100,00,199,831,21 1,51 100,00,199,200,97 1,21200,00,1100,300,41 0,51 200,00,1100,290,56 0,70Идентификация и количественное определение цефоперазона вклинических объектах (тканях операционного поля) методомкапиллярного электрофорезаРазработанные экспрессные методики определения цефоперазона в биологическихобъектах, были применены для решения вопросов связанных с установлением эффективностипериоперационного однократного болюсного введения цефоперазона в профилактикепослеоперационных инфекций в области хирургического вмешательства и изученияраспределения антибиотика в тканях операционного поля.Исследования проводились на базе ГБКУЗ ЯО «Городская больница им.
Н.А. Семашко»,г. Ярославль, совместно с сотрудниками кафедры общей хирургии ФГБОУ ВО «Ярославскогогосударственного медицинского университета» (заведующий кафедрой, д.м.н., профессорЛаричев А.Б.) на группе больных оперируемых по поводу грыж различной локализации,19которым однократно, внутривенно вводили 1 г цефоперазона не ранее чем за 20 минут до началаоперативного вмешательства. Отбор проб тканей с операционного поля и биологическихжидкостей (крови и мочи) осуществляли через определённые промежутки времени (навески непревышали 0,1 г ткани и 0,1 мл жидкости). Последующую пробоподготовку, идентификацию иколичественное определение проводили согласно методикам, разработанным на модельныхбиологических смесях. На рисунке 10, в качестве примера, предоставлена ЭФГ цефоперазона,выделенного из брюшины через 20 минут после внутривенного введения 1 г антибиотика, иЭФГ повторного анализа исследуемого извлечения, с добавлением 1 мкг цефоперазона.
Приповторном анализе наблюдался рост пика соответствующего цефоперазону.АЦефоперазонtm = 6,79Б11mAUmAUЦефоперазонtm = 6,8000012345мин678910012345мин678910Рисунок 7 – ЭФГ цефоперазона, выделенного из брюшины через 20 минут после в/в введения 1г препарата (А) и с введением в пробу 1 мкг цефоперазона – стандарта (Б)Таким образом, результаты исследования цефоперазона в клинических объектахпоказывают, что идентификация цефоперазона осуществляется в селективных условиях приэтом исследуется минимальное количество объекта, что позволяет уменьшить количествосоэкстрактивных веществ в пробах, и в сочетании с приёмом стекинга при электрофорезеобеспечивает высокую чувствительность методики.В таблице 11 представлена динамика изменений концентрации цефоперазона в тканяхпередней брюшной стенки, крови и моче.20Таблица 11 - Динамика концентрации цефоперазона в биологических объектах (в мкг / 0,1 г,мл;х̅±∆х)Этап исследования20 мин40 минкровь (n=10)3,09±0,592,63±0,34моча (n=6)169,8±42,53кожа (n=7)4,15±0,536,02±0,41*подкожная жировая клетчатка (n=10)2,95±0,652,58±0,39апоневроз (n=7)5,15±1,296,36±1,16мышца (n=6)3,84±0,5911,83±1,11*брюшина (n=5)9,96±1,4819,08±0,77** – p<0,05 по сравнению с предыдущим этапом исследования,Анализ результатов показал:Исследуемый объект60 мин2,34±0,56319,4±50,16*15,31±0,75*2,52±0,6528,68±4,23*3,47±1,25*16,74±2,46 Концентрация антибиотика в крови уменьшается, а в моче увеличивается в пределахисследованного временного промежутка от 20 до 60 минут после введения препарата Введённый за 20 минут до операции антибиотик эффективно пенетрирует во все тканиоперационного поля и стойко определяется спустя 60 минут Наибольшая концентрация определяется в коже, апоневрозе, брюшине и статистическидостоверно увеличивается в течении изученного временного интервала.
Несколько нижеопределяется концентрация препарата в подкожной жировой клетчатке и мышце, носохраняется на стабильном уровне в течении длительного времени, что гарантируетпрофилактическую ценность метода и минимизирует послеоперационные раневыеосложнения.Таким образом, разработанные электрофоретические методики определения цефоперазона вклинических объектах предлагаются в качестве способа объективного контроля уровнясодержания антибиотика в тканях операционного поля и биологических жидкостях, с цельюпротивоинфекционной профилактики и лечения гнойных хирургических инфекций.ВЫВОДЫ1. Изученыоптимальныеусловияэлектрофореза-скринингарядаантибиотиковцефалоспоринового ряда, в том числе цефоперазона, методом электрофореза на бумаге («ПВЭФ– 1»; электролит – буферный раствор Бриттона – Робинсона рН 1,8), позволившего на этапегруппового обнаружения выделить исследуемый антибиотик в отдельную, третьюэлектрофоретическую группу (чувствительность обнаружения на ЭФГ - 1 мкг цефоперазона впробе, детектор – пары йода).
На втором этапе электрофореза-скрининга антибиотиковпредложена методика внутригрупповой идентификации по ЭФС («ПВЭФ – 1», электролит –буферный раствор Бриттона – Робинсона, рН 1,8 ÷ 8,0).2. Результаты исследования цефалоспориновых антибиотиков, в том числе цефоперазона, методомэлектрофореза на бумаге, показали, что на их групповое обнаружение и внутригрупповую213.4.5.6.7.идентификацию не оказывают существенного влияния соэкстрактивные веществабиологических объектов (моча, печень, почка).Предложена методика дополнительной идентификации и количественного определенияцефоперазона с использованием отечественной системы для капиллярного электрофореза«Капель – 105М», которая является доступной, экспрессной и характеризуется экономнымрасходованием проб и реактивов.
Установлены валидационные характеристики разработаннойметодики (специфичность, селективность, правильность, прецизионность, пределколичественного определения).Установлены оптимальные условия экстракции цефоперазона из водных растворов.Разработаны методики изолирования цефоперазона из модельных проб мочи, крови и печени.Получена удовлетворительная воспроизводимость результатов на трёх уровнях концентрации впределах рекомендованной аналитической области. Нижний предел количественногоопределения составил 0,1 мкг антибиотика в 0,1 мл мочи, крови и 0,1 г печени.Показана возможность применения разработанной методики идентификации иколичественного определения цефоперазона методом капиллярного электрофореза вклинических биологических объектах, при этом установлено, что введённый за 20 минут дооперации антибиотик эффективно пенетрирует в ткани операционного поля и стойкоопределяется спустя 60 минут во всех тканях.
Наибольшая концентрация определяется в коже,апоневрозе и брюшине.Разработаные методики определения цефоперазона в клинических объектах на базе системы длякапиллярного электрофореза «Капель – 105М», предлагаются в качестве способа объективногоконтроля уровня содержания антибиотика в мягких тканях операционного поля и вбиологических жидкостях, с целью противоинфекционной профилактики и лечения гнойныххирургических инфекций.Предложенные электрофоретические методики анализа цефоперазона внедрены впрактику химико-токсикологических лабораторий,бюро судебно-медицинскойэкспертизы и наркологических больниц городов Ярославля и Владимира, а также вучебныйпроцессстудентовфармацевтическогофакультетаФГБОУВО«Ярославский государственный медицинский университет».Практические рекомендации1.
Результаты исследования предложены для целей химико-токсикологической практики приисследовании цефоперазона в биологических объектах на базе доступных отечественныхэлектрофоретических приборов («ПВЭФ – 1», «Капель – 105М»)2. Разработанные электрофоретические методики позволяют проводить анализ цефоперазона вклинических биологических объектах с использованием небольших навесок (0,1 г ткани, 0,1 млбиологической жидкости) и предлагаются в качестве способа объективного контроля уровня22концентрации антибиотика в тканях операционного поля с целью потивоинфекционнойпрофилактики при хирургических вмешательствах.1.2.3.4.5.Перспективы дальнейшей разработки темыДальнейшие исследования будут направлены на расширение программы электрофоретическогоскрининга, с включением как новых представителей антибиотиков цефалоспоринового ряда, таки представителей других групп антибактериальных средств, обладающих токсичностью и неизученных в химико-токсикологическом отношении; разработку скрининговых методованализа указанных веществ на базе капиллярного электрофореза в сочетании с идентификациейпо электрофоретическим спектрам.Целесообразно продолжить дальнейшую разработку и внедрение экспрессных методик влабораторно-клиническую диагностику для проведения мониторинга концентрацииантибактериальных средств, в тканях операционного поля, с целью оптимизацииантибиотикотерапии не только в общей хирургической практике, но и в челюстно-лицевойхирургии в стоматологической практике.Список работ, опубликованных по теме диссертацииИзучение условий скринингового обнаружения ряда азотсодержащих соединений основногохарактера методом электрофореза на бумаге / А.Н.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
