Автореферат (1141194), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Процесс выделения ДНК проводился спомощью реагентов для выделения геномной ДНК из цельной крови «ДНК-ЭКСТРАН-1»(ЗАО «Синтол», Россия).Методика определения метаболической активности изофермента CYP3A4 методомвысокоэффективной жидкостной хроматографииМатериал для исследования: 5 мл утренней мочи пациента, собранные на 2–5 день впробирки без консерванта и замораживалась при температуре минус 20 градусов поЦельсию. Содержание 6-бета-гидроксикортизола и кортизола определялось методомхромато-масс-спектрометрическогоанализанавысокоэффективномжидкостномхроматографе Agilent G1978B Multimode Sourse for 6410 Triple Quade LC/MS (AgilentTechnologies, Inc., USA).
Метаболическая активность CYP3А4 оценивалась по отношению 6бета- гидроксикортизол/кортизол в утренней моче. Для экстракции данных стероидов измочи использовался метод жидко-жидкостной экстракции смесью этилацетат/изопропанол(85/15). Экстракцию проводили дважды из 2 мл мочи четырьмя миллилитрами экстрагента.Для построения калибровочного графика были приготовлены путем добавления растворов12кортизолаи6-бета-гидроксикортизолаизвестныхконцентрацийкмочездоровыхдобровольцев.Статистическая обработка результатовСтатистическая обработка результатов проводилась в SPSS Statistics 20.0. Средниепоказатели представлены как М±SD, где М — среднее, SD — стандартное отклонение.Проверка нормальности распределения проводилась с помощью критерия КолмогороваСмирнова. Для оценки достоверности различий количественных показателей был примененоднофакторный дисперсионный анализ ANOVA, в случае ненормального распределения 14критерий Манна-Уитни или Крускала-Уолиса.
Определение влияния количественныхфакторов на активность тромбоцитов проводилась при помощи линейного регрессионногоанализа. Для установления различий категориальных показателей был применен критерийхи-квадрат Пирсона χ2. Влияния генов CYP3А5 и ABCB1 на агрегацию тромбоцитовоценивалось методом логистической регрессии; в число ковариат были так же включеныпеременные, имеющие тенденцию к значимости различий между группами агрегации ввариационном анализе. Для проверки соблюдения равновесия Харди – Вайнбергаприменялся точный критерий Фишера. Различия считались значимыми при р0,05.Результаты и их обсужденияПоказатели антигипертензивной эффективности и безопасности амлодипина у больныхс различными генотипами по АВСВ1 по полиморфному маркеру С3435ТВ результате генотипирования по ABCB1 были выявлены следующие генотипы пополиморфному маркеру С3435Т: генотип СС наблюдался (n=17), ТТ (n=30), СТ (n=53).
Поосновным анализируемым показателям значимых различий между группами пациентов сгенотипами СС, СТ и ТТ гена АВСВ1 по полиморфному маркеру C3435T не выявлено.Установлено, что антигипертензивная эффективность амлодипина при его курсовомприменении различается у пациентов с АГ I-II степени, имеющих генотипы СС, СТ, ТТ пополиморфномумаркеруС3435Т13генаABCB1(рис.1).Рис.1. Антигипертензивная эффективность амлодипина у больных АГ I-II ст.различными генотипами по полиморфному маркеру С3435Т гена АВСВ1Отличная антигипертензивная эффективность среди пациентов с генотипом СС выявлена в11,8% случаев, среди пациентов с генотипом СТ - в 33,9%, среди пациентов с генотипом ТТ в 43,3% случаев, (рСС-СТ = 0,02, рСС-ТТ = 0,02, рСТ-ТТ = 0,05).
Суммарная антигипертензивнаяэффективность у пациентов с генотипом СС составила 47,1%, у пациентов с генотипом СТ 66,0%, у пациентов с генотипом ТТ - 76,7% (рСС-СТ = 0,02, рСС-ТТ = 0,04, рСТ-ТТ = 0,05).Количество больных, которым потребовалось увеличение дозы амлодипина, средипациентов с генотипом СС составило 53,9%, среди пациентов с генотипом СТ - 34,0%, средипациентов с генотипом ТТ - 23,3% (рСС-СТ = 0,04, рСС-ТТ = 0,04, рСТ-ТТ = 0,35).
В целом на фонеамлодипина в суточной дозе 5 мг было 66 пациентов с хорошей эффективностью, 34больным потребовалось увеличение дозы до 10 мг/сут.По данным офисного измерения АД степень снижения САД составила у пациентов сгенотипом СС -4,94±2,91, у пациентов с генотипом СТ-5,86±2,12, у пациентов с генотипомТТ -6,00±2,20% (рСС-СТ=0,5, рСС-ТТ=0,04, рСТ-ТТ=0,30); степень снижения ДАД составила 6,47±1,62 у пациентов с генотипом СС, -7,60±2,46 у пациентов с генотипомСТ, -8,37±1,53% у пациентов с генотипом ТТ (рСС-СТ=0,06, рСС-ТТ=0,04, рСТ-ТТ=0,45) (рис.2).14Рис.
2. Влияние амлодипина на показатели САД, ДАД и ЧСС по данным офисногоизмерения АД у больных АГ I-II степени с различными генотипами по полиморфномумаркеру С3435Т гена АВСВ1 (∆ %)Аналогичная закономерность выявлена в динамике САД и ДАД по данным СМАД.Анализ межгрупповых различий методом Манна-Уитни выявил достоверные различиямежду генотипами CC и TTпо степени снижения САД и ДАДпо данным офисногоизменения АД и по результатам СМАД (во всех случаях р<0,05): достоверные различиямежду генотипами CC и СTи генотипами СТ и ТТ по количеству больных с отличнойантигипертензивной эффективностью (р=0,02), суммарной(отл.+хор.) антигипертензивнойэффективностью(р=0,04),удовлетворительнойантигипертензивнойэффективностью(р=0,04), и количеством пациентов с потребностью в увеличении дозы амлодипина (р=0,04).Между генотипами СТ и ТТ ни по одному из показателей достоверных различий невыявлено.
Анализ межгрупповых различий по методу Крускала-Уоллиса (ANOVA) такжевыявил достоверные различия между генотипами ТТ, СТ и СС по количеству больных сотличной антигипертензивной эффективностью (р=0,04), по суммарной антигипертензивнойэффективности (р=0,04), удовлетворительной антигипертензивной эффективностью (р=0,04),и количеством пациентов с потребностью в увеличении дозы амлодипина (р=0,05).Анализ частоты развития НПР у больных в зависимости от генотипа по полиморфномумаркеру С3435Т гена ABCB1 показал, что максимальное количество НПР, преимущественнов виде отеков нижних конечностей, имело место у пациентов с генотипом СС, минимальное у пациентов с генотипом ТТ, проявлявшееся в виде гиперемии кожных покровов.Значимость межгрупповых различий при использовании метода Манна-Уитни составила:р=0,05 (СС против CT); р=0,05 (CC против TT); р=0,06 (CT против TT); при методеКрускала-Уоллиса - р=0,05.15Анализ сопоставления данных по антигипертензивной эффективности и переносимостиамлодипина у больных АГ I-II степени с различными генотипами по полиморфному маркеруС3435Т гена ABCB1 свидетельствует о том, что при генотипе ТТ имеют место наибольшаяэффективность в сочетании с минимальной частотой НПР, при генотипе СС – наиболеенизкая эффективность и максимальная частота развития НПР, при генотипе ТС –промежуточные показатели эффективности и переносимости (табл.
3).Таблица 3Суммарные показатели эффективности и переносимости амлодипина у больных АГ I-IIстепени с различными генотипами по полиморфному маркеру С3435Т гена ABCB1Генотип пополиморфномумаркеру С3435Тгена ABCB1Количество больных сотличной и хорошейантигипертензивнойКоличествобольных сНПР,эффективностью, абс.Достоверность различийметодами Манна-Уитни иКрускала-Уоллисаабс. (%)(%)СС (n = 17)8 (47,1)6 (35,3)ССvs CT: p = 0,06*; 0,05**СТ (n =53)35 (67,0)6 (11,3)CC vs TT: р = 0,04*; 0,05**CT vs TT: р = 0,05*; 0,06**ТТ (n=30)23 (76,7)2 (6,7)Крускала-Уоллиса: р=0,04*;0,05**Примечание:* - достоверность различий показателей эффективности,**- достоверность различий показателей безопасностиПоказатели антигипертензивной эффективности и безопасности амлодипина у больныхс различными генотипами CYP3A5 по полиморфному маркеру A6986GВ результате проведенного генотипирования было установлено следующее распределениеобследованных пациентов по генотипам: генотип AG имел место у 9 пациентов (9%), GG - у91 пациента (91%), AA - 0 пациентов (0%).
Пациенты с генотипами AG и GG не отличалисьпо исходным клинико-демографическим показателям между собой и от исследуемой группыпациентов в целом. Анализ антигипертензивной эффективности амлодипина у больных пополиморфному маркеру A6986G гена CYP3A5 показал, что среди больных с генотипомAGотличная антигипертензивная эффективность зарегистрирована у 0 пациентов сгенотипом AG (0%), у 33 пациентов с генотипом GG (36%). Хорошая антигипертензивнаяэффективность зарегистрирована у 7 пациентов с генотипом AG (78%), у 26 пациентов сгенотипомGG(29%).Удовлетворительная16антигипертензивнаяэффективностьзарегистрирована у 2 пациентов с генотипом AG (22,2%), у 32 пациентов с генотипом GG(35,2%) (табл.
4)Таблица 4Антигипертензивная эффективность амлодипина у больных АГ I-II степени сразличными генотипами по полиморфному маркеру A6986G генаCYP3A5 (M±m)Различия междуАнтигипертензивнаяэффективностьВ целом погруппе(n = 100)AGGG(n=9)(n=91)группами пометоду МаннаУитни, рAG vs GGОтличная, абс. (%)33 (33)0 (0)33 (36)0,02*Хорошая, абс. (%)33 (33)7 (78)26 (29)0,02*66 (66)7 (78)59 (65)34 (34)2 (22)32 (35)0,234 (34)2 (22)32 (35)0,05Суммарная антигипертензивнаяэффективность0,35(отличная + хорошая), абс. (%)Удовлетворительная, абс. (%)Количество больных, которымпотребовалось увеличение дозы,абс.
(%)По данным офисного измерения АД, у пациентов с генотипом GG отмечено статистическизначимое более выраженное снижение как систолического -8,38 ± 2,4(AG -6,71 ± 3,22 ,%) (р=0,04), так и диастолического -9,11 ± 4,08 (AG -7,39 ± 3,18 , %) артериальногодавления (рAG-GG = 0,03) (рис.3).Увеличение дозы до 10 мг потребовалось 2-м больным с генотипом AG и 32-м больным сгенотипом GG, что в процентном соотношении составило 22% и 35% соответственно.По данным СМАД несколько большая степень снижения среднесуточных, среднедневных исредненочных значений САД и ДАД выявлена у больных с генотипом AG. Однако, прианализе межгрупповых различий по методу Манна-Уитни между генотипами AG и GGстатистически значимой разницы по степени снижения этих показателей не выявлено17AG0-1-2-3-4-5-6-7-8-9-10GG-3,0-3,6-7,12-7,39-8,38-9,11САД, ∆, %ДАД, ∆, %ЧСС, ∆, %Рис.3.
Влияние амлодипина на показатели САД, ДАД и ЧСС по данным офисногоизмерения АД у больных АГ I-II степени с различными генотипами по полиморфномумаркеру A6986G гена CYP3A5 (∆ % )Анализ НПР у больных с различными генотипами по полиморфному маркеру A6986G генаCYP3A5 показал, что у 4 из 9 больных (44%) с генотипом AG были зафиксированы НПРпреимущественно в виде отеков нижних конечностей, у больных с генотипом GGабсолютное число НПР, преимущественно в виде гиперемии кожных покровов, было больше(n=10), что в процентном соотношении составило всего 11% (достоверность межгрупповыхразличий AG против GG р=0,04).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
