Диссертация (1140886), страница 8
Текст из файла (страница 8)
При этом обращалось внимание на расположение костной тканив исследуемом образце.2.2.3. Гистологический методДля гистологического исследования при вскрытии трупов изымалиподъязычно-гортанно-трахеальный комплекс, проводили его внешний осмотри мануальное исследование. Далее осуществляли скелетирование и отслойкунадхрящницы с последующим забором части правой пластинки ЩХ,размерами до 1,5 см, в количестве 130 образцов от лиц мужского поларазличного возраста (рисунок 8).48Рисунок 8 – Схема забора материала для гистологическогоисследованияОбразцы ЩХ фиксировались в 10%-м растворе нейтрального формалинане менее 5 суток.
После промывки в проточной воде в течение 1 – 2 сутоквырезались продольные блоки. Далее проводилась декальцинация срезов в12%-м растворе азотной кислоты, стандартная спиртовая проводка с заливкойв парафин по общепринятой методике [110], из блоков изготавливали срезытолщиной 5 – 7 мкм с последующей окраской гематоксилином и эозином. Накаждом препарате производили качественное и количественное исследование.Вначале препараты изучались с помощью микроскопа Биолан Ломо (Россия)с целью определения качественных признаков для их дальнейшейколичественной оценки:– наличие костной и хрящевой ткани– количество и толщина костных балок– наличие жировой и ретикулярной ткани.С помощью микроскопа «Leiсa DM 1000», объектив «Leiсa HIPLAN10x/0.25»,«HIPLAN20x/0.10»вкаждомобъектепроводилимикрофотографирование с проведением дальнейшего морфометрическогоизмерения, используя для этого программу Megamоrph 12 (ООО ГистоЛаб,Москва) и программу графического анализа изображений (Adоbe PhоtоshоpСS6).
Микрофотографии делали с помощью системы анализа изображений в49виде графических файлов и сопрягались в формате JPEG. Дальнейшаяморфометрия проведена в соответствии с общими методологическимирекомендациями [3, 4, 19-21, 123, 172]. Были выделены 28 признаков длядальнейшей их количественной оценки (таблица 5).В каждом объекте в трех полях зрения микроскопа с пропуском 2 – 3поля зрения осуществляли измерение следующих параметров: площадькостной ткани, площадь хрящевой ткани, средняя площадь костной ткани вполе зрения, средняя площадь хрящевой ткани в поле зрения, средняя ширинахрящевой пластинки, толщина кортикальной пластинки, количество трабекулв препарате и в поле зрения микроскопа, средняя площадь трабекул, средняядлина трабекул, максимальная толщина трабекул, минимальная толщинатрабекул, средняя толщина трабекул, количество молодых хондроцитов,количество зрелых хондроцитов, ширина зоны молодого хряща, ширина зонызрелого хряща, соотношение зон зрелого и молодого хряща, площадьретикулярной и жировой ткани и их соотношение (рисунок 9-11).абРисунок 9 – Измерение площади костной ткани в поле зрения (а) иколичества молодых хондроцитов в поле зрения (б).Микрофотографии.
Окраска гематоксилин и эозин. Ув.:Ок.10, Об.1050Рисунок 10 – Измерение толщины и длины трабекул, измерение зонымолодого и зрелого хряща. Окраска гематоксилин и эозин.Микрофотография. Ув.: ок.10, об.10.Начальное поле зрения соответствовало левому верхнему участкупрепарата, далее предметное стекло смещалось слева направо и сверху вниз.Измерения проводились не во всех полях зрения, а с пропуском до 3 – 4 полейзрения. В дальнейшем была создана база данных, содержащая количественныезначения параметров от лиц с известным возрастом.Рисунок 11 – Этап измерения на препарате площади ретикулярнойткани.ОкраскагематоксилинМикрофотография.
Ув.: ок.10, об.10.иэозин.51Таблица 5 – Первичные морфометрические параметры для измерения№1Имя признака Название признакаP1Площадь костнойЕдиница измерения Способ измерения%ткани в препаратеС помощью программы графический редактор измеряется площадь,занимаемая костной тканью на всем препарате, при условии чтоплощадь всего препарата принята за 100%2P2Средняя площадьед.костной ткани вНа препарате при увеличении в 20 раз считается площадь костнойткани в 5 полях зрения, с пропуском 2 – 3 поля зренияпрепарате3P3Площадь костноймкм2тканиС помощью программы графический редактор измеряется площадькостной ткани в 5 полях зрения микроскопа с пропуском каждоговторого поля зрения на увеличении 10, результаты измеренияплощади костной ткани в пяти полях зрения суммируются,полученное значение делится на 5, в результате получена средняяплощадь костной ткани в поле зрения микроскопа4P4Среднее количествоед.костных балок в полеНа препарате при увеличении в 20 раз считается количество всехкостных балок в 5 полях зрения, с пропуском 2 – 3 поля зрения.зрения5P5Количество костныхбалок в препаратеед.На препарате при увеличении в 20 раз считается количество всехкостных балок52Продолжение таблицы 56P6Средняя площадьмкм2трабекулВ препарате на увеличении 20 в 5 полях зрения с пропуском в 2 полязрения при помощи программы измеряется площадь всех трабекулв поле зрения, затем проводится расчет среднего показателя дляобразца7P7Минимальная длинамкмтрабекулВ препарате на увеличении 20 в 5 полях зрения с пропуском в 2 – 3поля зрения при помощи программы измеряется минимальная длинавсех костных балок (трабекул) в поле зрения, затем проводитсярасчет среднего показателя для образца.8P8Максимальная длинамкмтрабекулВ препарате на увеличении 20 в 5 полях зрения с пропуском в 2 – 3поля зрения при помощи программы измеряется максимальнаядлина всех костных балок (трабекул) в поле зрения, затемпроводится расчет среднего показателя для образца.9P9Средняя длинамкмтрабекулВ препарате на увеличении 20 в 5 полях зрения с пропуском в 2 – 3поля зрения при помощи программы измеряется длина всех костныхбалок (трабекул) в поле зрения, затем проводится расчет среднегопоказателя для образца10P10МаксимальнаямкмВ препарате на увеличении 20 в 5 полях зрения с пропуском в 2 – 3толщина трабекул вполя зрения при помощи программы измеряется толщина всехмкмкостных балок (трабекул) в поле зрения, выбирается максимальноезначение для образца.53Продолжение таблицы 511P11МинимальнаямкмВ препарате на увеличении 20 в 5 полях зрения с пропуском в 2 – 3толщина трабекул вполя зрения при помощи программы измеряется толщина всехмкмкостных балок (трабекул) в поле зрения, выбирается минимальноезначение для образца.12P12Средняя толщинамкмтрабекулВ препарате на увеличении 20 в 5 полях зрения с пропуском в 2 – 3поля зрения при помощи программы измеряется толщина всехкостных балок (трабекул) в поле зрения, считаются минимальное имаксимальное значения для образца, вычислено среднее значениетолщины трабекул13P13ТолщинамкмСпомощьюпрограммыизмеряетсятолщинакортикальнойкортикальнойпластинки по периметру образца в 5 полях зрения с пропускомпластинкикаждого второго поля зрения микроскопа на увеличении 20 (10),результаты измерений в пяти полях зрения суммируются,полученное значение делится на 5, в результате получена средняятолщина кортикальной пластинки в поле зрения микроскопа.14P14Средняя площадьжировой тканимкм2С помощью программы измеряется площадь жировой ткани в 5полях зрения с пропуском каждого второго поля зрения микроскопана увеличении 20, результаты измерения в пяти полях зрениясуммируются, полученное значение делится на 5, в результатеполучено среднее значение площади жировой ткани в поле зрениямикроскопа54Продолжение таблицы 515P15Средняя площадьмкм2ретикулярной тканиС помощью программы измеряется площадь ретикулярной ткани в 5полях зрения с пропуском каждого второго поля зрения микроскопана увеличении 20, результаты измерения в пяти полях зрениясуммируются, полученное значение делится на 5, в результатеполучено среднее значение площади ретикулярной ткани в полезрения микроскопа16P16Соотношение P14 к-показатель площадь ретикулярной ткани в мкм2P1517P17Площадь хрящевойПоказатель средняя площадь жировой ткани в мкм2 делится на%ткани в препаратеС помощью программы измеряется площадь, занимаемая хрящевойтканью на всем препарате, при условии что площадь всего препаратапринята за 100%18P18Средняя площадь-С помощью программы измеряется площадь хрящевой ткани в 5хрящевой ткани вполях зрения с пропуском каждого второго поля зрения микроскопаполе зренияна увеличении 10, результаты измерения площади хрящевой тканив пяти полях зрения суммируются, полученное значение делится на5, в результате получена средняя площадь хрящевой ткани в полезрения микроскопа55Продолжение таблицы 519P19Площадь хрящевоймкм2тканиС помощью программы измеряется площадь хрящевой ткани в 5полях зрения микроскопа с пропуском каждого второго поля зренияна увеличении 10, результаты измерения площади хрящевой тканив пяти полях зрения суммируются, полученное значение делится на5, в результате получена средняя площадь хрящевой ткани в полезрения микроскопа20P20Среднее количествоедмолодыхмолодых хондроцитов, затем вычисляется среднее значение дляхондроцитов21P21Количество молодыхНа препарате от 3 до 5 полей зрения проводится подсчет количестваобразцаедНа препарате при увеличении 20 в 5 полях зрения с пропуском в 2 –хондроцитов в поле3 поля зрения считается количество молодых (одиночных)зренияхондроцитов, далее производится расчет среднее значения дляобразца.22P22Количество зрелыххондроцитов в полезренияедНа препарате при увеличении 20 в 5 полях зрения с пропуском в 2-3полязрениясчитаетсяколичествозрелых(изогрупп,сгруппированных, групповых, лакунарных) хондроцитов, далеерасчет среднего значения для образца.Обращалось внимание на количество хондроцитов в лакуне.56Продолжение таблицы 523P23Ширина зонымкммолодого хрящаС помощью программы измеряется ширина зоны молодого хряща в5 полях зрения с пропуском каждого второго поля зрениямикроскопа на увеличении 20, результаты измерения ширины зонымолодого хряща в пяти полях зрения суммируются, полученноезначение делится на 5, в результате получена средняя ширина зонымолодого хряща в поле зрения микроскопа24P24Ширина зоны зрелогомкмхрящаС помощью программы измеряется ширина зоны зрелого хряща в 5полях зрения с пропуском каждого второго поля зрения микроскопана увеличении 20, результаты измерения ширины зоны зрелогохряща в пяти полях зрения суммируются, полученное значениеделится на 5, в результате получено среднее значение в поле зрениямикроскопа.25P25Соотношение-Р24/Р2526P26Средняя ширинахрящевой пластинкиПоказатель Ширина зоны молодого хряща делится на показательШирина зоны зрелого хрящамкмС помощью программы измеряется ширина хрящевой ткани попериметру образца в 5 полях зрения с пропуском каждого второгополя зрения микроскопа на увеличении 20(10), результатыизмерения ширины хрящевой ткани в пяти полях зрениясуммируются, полученное значение делится на 5, в результатеполучена средняя площадь хрящевой ткани в поле зрениямикроскопа57Продолжение таблицы 527P27Соотношение Р3/Р19-Показатель площадь костной ткани в мкм2 делится на показательплощадь хрящевой ткани в мкм228P28Соотношение Р1/Р17-Показатель площадь костной ткани в % делится на показательплощадь хрящевой ткани в %582.2.4.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
