Диссертация (1140764), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Иммунологические методы исследованияУровеньцитокинов, компонентов комплемента и их ингибиторовопределяли в плазме крови и моче. Для выявления цитокинов (IL-6, TNFα, IL-1β,IFNα, IFNγ, IL-10, IL-4, IL-1RA), хемокин (IL-8) и sIgA (в моче) использовалитвердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) с детекцией продуктов реакциив диапазоне длины волны 405-630 нм с помощью коммерческих наборов ЗАО«Вектор-Бест». Определение С3, С3а, С4, С5 и С5а-компонентов системыкомплемента и фактора Н проводили с использованием диагностических наборовООО «Цитокин», использованы принципы: ИФА-метода детекции терминальногокомплекса, выявляемого специфическими антителами и гемолитического методаучета активации системы комплемента. Для определения активности С1ингибитора использован хромогенный метод по способности ингибировать С1эстеразу.Необходимоотметить,чтодлярегистрациирезультатовиммуноферментного анализа применялся автоматический ридер для ИФА Эфос9305 (Россия).41Оценку фагоцитарной активности полиморфно-ядерных лейкоцитов кровипосле предварительного их выделения на градиенте плотности фиколлурографина (d=1,077) осуществляли по общепринятой методике: определяяфагоцитарное число (ФЧ), фагоцитарный индекс (ФИ) и индекс активностифагоцитоза (ИАФ).
Кислород-зависимые системы нейтрофилов изучались пореакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), спонтанного истимулированного зимозаном, с использованием спектрофотометра PD 303 S Apel(Япония), индексу стимуляции (ИСН) и функциональному резерву нейтрофилов(ФРН) [35].3.3. Методы исследования оксидантного статусаПроцессы перекисного окисления липидов (ПОЛ) изучали по уровню вплазме крови, эритроцитах и моче ацилгидроперекисей (АГП) и малоновогодиальдегида (МДА), образующих с тиобарбитуровой кислотой окрашенныйкомплекс, экстрагируемый бутанолом. МДА и АГП определяли с использованиемнабора «ТБК-Агат» («Агат-Мед» Россия) и спектрофотометра «Апель-330»(Япония) при длине волны 535 нм и 570 нм.
Состояние антиоксидантной системыоценивалисприменениемготовыхкоммерческихнаборовметодомпрямого/конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) сдетекцией продуктов реакции в диапазоне длины волны 405-630: активностьсупероксиддисмутазы (СОД) «Bender Medsystems» (Австрия) и каталазы «CaymanChemical» (США). Общая антиокислительная активность (ОАА) исследовалась спомощью метода, в основе которого лежит степень ингибирования аскорбат- иферроиндуцированного окисления твина-80 до МДА. Уровень стабильныхметаболитовоксидаазота(СМNО)выявлялисиспользованиемдвуханалитических операций: измерение эндогенного нитрита и превращение нитратав нитрит с использованием нитритредуктазы с последующим измерением общего42нитрита по абсорбции азокрасителя в реакции Грисса при длине волны 540 нм сприменением набора для твердофазного ИФА фирмы «R&D» (Англия).
Кромеэтого, в плазме крови определяли уровень С-реактивного белка (СРБ) «ВекторБест» (Россия) и неоптерина «IBL» (Германия).3.4. Статистическая обработка полученных результатов.Статистическаяобработкаполученныхрезультатовпроводиласьсвычислением средних величин (M) и ошибки средней арифметической (m),существенностьразличийоцениваласьпоU-критерию,взаимосвязиустанавливались на основании коэффициента ранговой корреляции Спирмена.Статистически значимыми считались различия с p<0,05.Поспециальнойформулебыларассчитанастепеньрасстройствлабораторных показателей [40, 100]:(показатель больныхпоказатель здоровых доноров- 1) 100%Примечание: в интервале более 66% полученная величина соответствует третьей степенилабораторных расстройств, от 34 до 66% - второй, от 1 до 33% - первой.43Глава 4.
Состояние иммунного статуса на системном уровне иэффективность базисного лечения при остром необструктивном иобструктивном пиелонефритеВ основе пиелонефрита лежит инфекционный воспалительный процесс,поражающий чашечно-лоханочную систему почки и ее интерстициальные ткани.Проникновение патогенов во внутреннюю среду организма приводит кмобилизации иммунной системы.
Ключевым событием при этом является контактпатогена с клетками иммунной системы, формирующими первую линию защитыи способными фагоцитировать и/или уничтожать микробные агенты. Такимиклеткамиявляютсялимфоидные, эпителиальные и миелоидные, причемпоследние осуществляют фагоцитоз, внутриклеточный киллинг (нейтрофилы,моноциты, макрофаги, миелоидные дендритные клетки) и внеклеточный киллинг(эозинофилы, нейтрофилы) [44, 122].В настоящее время остаются недостаточно изученными системныеиммунные нарушения у больных острым необструктивным и обструктивнымпиелонефритом.
Вместе с тем своевременная коррекция этих расстройств a prioriможет снизить риск развития ряда серьезных осложнений и хронизациизаболевания.При ОНП и ООП отмечаются сходные изменения в стандартныхлабораторных тестах (в периферической крови – нейтрофильный лейкоцитоз,увеличение СОЭ, лейкоцитарного индекса интоксикации, индекса сдвигалейкоцитов, повышение уровня СРБ, концентрации креатинина (особенно приООП), в моче – лейкоцитурия, микроальбуминурия, эритроцитурия, повышениесодержания эпителиальных клеток).Необходимо отметить, что в сывороткекрови и моче пациентов с ООП выявлено снижение концентрации цистатина, а вмоче больных ОНП – белка. Проведенное базисное лечение приводило кзначительной коррекции или нормализации всех измененных показателей.44При ОНП в плазме периферической крови отмечается повышениеконцентрации IL-6 в 4,8 раз, TNFα в 3,6 раза, IL-8 в 2 раза, IFNγ и IFNαсоответственно в 4,5 и 2,4 раза.
Что касается противовоспалительных цитокиновзарегистрировано их разнонаправленное изменение (повышение IL-10 в 7,9, IL-4 в5,7 раз, снижение IL-1RА в 2,3 раза). Уровень IL-1β статистически не изменялся.Проведенное базисное лечение нормализовало уровень содержание IFNα,корригировались, но не достигала уровня здоровых, содержание IFNγ, IL-6, IL10, IL-1RА, еще в большей степени повышался уровень IL-4, без измененийостались концентрации остальных исследованных цитокинов (таблица 1, рисунок1).При ООП выявлены однонаправленные, но значительно более выраженныеизменения цитокинового спектра: повышение уровня IL-1β в 1,6 раза, TNFα в 5,8раз, IL-8 в 2,2 раз, IL-6 в 10,1 раз, IFNα и IFNγ соответственно в 8,9 и 13,4 раз, IL10 и IL-4 в 10,1 и 16 раз, снижение IL-1RА в 1,8 раз.
После лечения неизменилось, по сравнению с исходными данными, содержание IL-4 и IL-8, еще вбольшейстепениснижалсяуровеньIL-1RА,концентрацияостальныхисследованных цитокинов корригировалась, но не достигала уровня здоровыхдоноров (таблица 1, рисунок 1).У пациентов с ОНП перед началом лечения в плазме крови зарегистриваныизменения 3 показателей из 7 системы комплемента: повышение содержания С3компонента комплемента на 28,6%, С5а на 22,4% и снижение ингибитора системыкомплемента фактора Н на 46,1%. После проведенного базисного лечения всепараметры системы комплемента оказались в пределах нормы, за исключениемфактора Н (таблица 2, рисунок 1).45Таблица 1Цитокиновый спектр плазмы крови при остром необструктивном и обструктивном пиелонефрите (M±m).12345Больные острым пиелонефритомнеобструктивнымобструктивнымПослеДо леченияДо леченияПосле леченияЛечения18,9±3,1*117,4±2,2*130,1±4,2*1,216,3±3,3*1,4ПоказателиЕдиницыизмеренияЗдоровыеTNFαпкг/мл5,2±0,6IL-1βпкг/млIL-6пкг/мл3,1±0,41,7±0,23,3±0,28,2±0,9*13,8±0,34,1±1,0*1,25,1±0,3*1,217,3±2,5*1,24,0±0,4*1,410,3±2,0*1,4IL-8пкг/мл21,2±2,143,1±4,8*136,2±4,0*145,8±5,2*137,9±6,0*1IFNαпкг/мл5,9±0,714,2±1,3*16,2±1,1*252,3±8,8*1,220,1±3,8*1,4IFNγпкг/мл0,29±0,021,3±0,08*10,42±0,04*1,23,9±0,6*1,22,7±0,2*1,4IL-4пкг/мл0,3±0,021,7±0,2*13,1±0,3*1,24,8±0,5*1,25,3±0,6*1IL-10пкг/млIL-1RАпкг/мл4,3±0,3559,0±25,134,0±2,1*1248,3±3,6*120,7±1,8*1,2326,0±14,2*1,243,5±2,7*1,2304,5±8,9*1,220,0±1,1*1,4275,2±10,4*1,4Примечание.
На этой последующих таблицах: звездочкой отмечены достоверные отличия средних арифметических (p < 0,05);цифры рядомсо звездочкой – по отношению к показателям какой группы даны эти различия.46Таблица 2Показатели системы комплемента плазмы крови при остром необструктивном и обструктивномпиелонефрите (M±m)1ПоказателиЕдиницыизмеренияС3мг/длС3аС4нг/млмг/длС5нг/млС5аС1-инг.Фактор НЗдоровые2345Больные острым пиелонефритомнеобструктивнымобструктивнымПослеПослеДо леченияДо лечениялечениялечения67,0±3,643,4±4,393,8±4,3*140,8±3,765,1±3,1*242,4±5,0111,3±4,6*1,256,1±4,0*1,263,0±2,5*448,1±3,3*420,8±1,521,8±1,719,6±1,426,7±2,0*1,217,8±1,9*4нг/млмкг/мл6,2±0,23,8±0,076,3±0,34,9±0,1*15,9±0,43,7±0,2*28,3±0,3*1,212,6±1,4*1,25,5±0,5*46,1±0,9*1,4250,1±12,3221,7±14,1243,8±15,0302,5±14,8*1,2287,7±13,2*1мкг/мл103,0±5,755,5±6,8*157,7±3,4*182,0±4,4*1,288,5±5,7*147Обозначения:1 – радиус окружности – значение показателей у здоровых доноров (1 группа);2–– значения показателей у больных ОНП до лечения (2 группа);3–– значения показателей у больных ООП до лечения (3 группа);4–– показатели достоверно не отличаются (p > 0,05) по отношению к 1группе;5 – все показатели 2 группы достоверно отличаются от показателей 3 группы заисключением уровня IL-8.Рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
