Автореферат (1140763), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Цитокины (TNF, IL-1β, IL-6, IFNα, IFNγ, IL-4, IL-10, IL-1RA), хемокин (IL8) и sIgA (в моче) выявляли методом твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) сдетекцией продуктов реакции в диапазоне длины волны 405-630 нм с использованием коммерческих наборов ЗАО «Вектор-Бест». Компоненты системы комплемента (С3, С3а, С4, С5 иС5а) и фактор Н определяли с помощью диагностических наборов ООО «Цитокин» с использованием двух принципов: гемолитического метода учета активации системы комплемента иИФА-метода детекции терминального комплекса, выявляемого специфическими антителами.Активность С1-ингибитора определяли хромогенным методом по способности ингибироватьС1-эстеразу. Регистрация всех результатов иммуноферментного анализа осуществлялась припомощи автоматического ридера для ИФА Эфос 9305 (Россия).Фагоцитарную активность полиморфно-ядерных лейкоцитов крови после их выделения из крови на градиенте плотности фиколл-урографина (d=1,077) оценивали по общепринятой методике, определяя фагоцитарный индекс (ФИ), фагоцитарное число (ФЧ) и индексактивности фагоцитоза (ИАФ).
Активность кислород-зависимых систем нейтрофилов оценивали спектрофотометрически при помощи спектрофотометра PD 303 S Apel (Япония) по реакции восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест), спонтанного и стимулированногозимозаном, индексу стимуляции (ИСН) и функциональному резерву нейтрофилов (ФРН).Методы исследования оксидантного статусаИнтенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали по содержанию в плазме крови, эритроцитах и моче ацилгидроперекисей (АГП) и малоновогодиальдегида (МДА), образующих с тиобарбитуровой кислотой окрашенный комплекс, экстрагируемый бутанолом. Определение МДА и АГП проводили с помощью набора «ТБКАгат» («Агат-Мед» Россия), при использовании спектрофотометра «Апель-330» (Япония)10при длине волны 535 нм и 570 нм.
Для оценки состояния антиоксидантной системы определяли методом прямого/конкурентного твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) сдетекцией продуктов реакции в диапазоне длины волны 405-630 нм с применением готовыхкоммерческих наборов: активность супероксиддисмутазы (СОД) «Bender Medsystems» (Австрия) и каталазы «Cayman Chemical» (США). Общую антиокислительную активность(ОАА) определяли методом, основанным на степени ингибирования аскорбат- и ферроиндуцированного окисления твина-80 до МДА.
Уровень стабильных метаболитов оксида азота(СМNО) выявляли с использованием двух аналитических операций: измерение эндогенногонитрита и превращение нитрата в нитрит с использованием нитрит-редуктазы с последующим измерением общего нитрита по абсорбции азокрасителя в реакции Грисса при длиневолны 540 нм с применением набора для твердофазного ИФА фирмы «R&D» (Англия).Кроме этого, в плазме крови определяли уровень С-реактивного белка (СРБ) «Вектор-Бест»(Россия) и неоптерина «IBL» (Германия).Статистическая обработка полученных результатовСтатистическую обработку результатов исследования проводили с вычислениемсредних величин (M) и ошибки средней арифметической (m).
Существенность различий оценивали по U-критерию, а взаимосвязи устанавливали на основании коэффициента ранговойкорреляции Спирмена. Статистически значимыми считали различия с p<0,05. Степень расстройств лабораторных показателей рассчитывали по формуле (Земсков А.М. и др., 2007,2013):(показатель больныхпоказатель здоровых доноров- 1) 100%Примечание: в интервале более 66% полученная величина соответствует третьей степени лабораторных расстройств, от 34 до 66% - второй, от 1 до 33% - первой.11РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯСостояние иммунного статуса на системном уровне и эффективность базисноголечения при остром необструктивном и обструктивном пиелонефритеДо лечения, как при ОНП, так и ООП, отмечаются однотипные изменения встандартных лабораторных показателях (в периферической крови – нейтрофильныйлейкоцитоз, увеличение СОЭ, лейкоцитарного индекса интоксикации, индекса сдвигалейкоцитов, повышение креатинина (особенно при ООП), СРБ, в моче – лейкоцитурия,эритроцитурия, микроальбуминурия, повышение содержания эпителиальных клеток).
Кромеэтого, в сыворотке крови и моче пациентов с ООП выявлено снижение концентрациицистатина, а у больных ОНП – в моче белка. Проведенное базисное лечение способствовалонормализации или значительной коррекции всех измененных показателей.У пациентов с ОНП до начала лечения в плазме периферической крови установленоповышение концентрации провоспалительных цитокинов (TNF в 3,6 раза, IL-6 в 4,8 раз, IL-8в 2 раза), IFNα и IFNγ соответственно в 2,4 и 4,5 раз.
В отношении противовоспалительныхцитокинов выявлено их разнонаправленное изменение (повышение IL-4 в 5,7, IL-10 в 7,9 рази снижение IL-1RA в 2,3 раза). Уровень IL-1β статистически не изменился. После проведенного базисного лечения нормализовалось содержание IFNα, корригировалось,но не доуровня значений здоровых доноров содержание IL-6, IFNγ, IL-10, IL-1RA, еще в большейстепени повышался уровень IL-4, без изменений остались концентрации остальных исследованных цитокинов (таблица 1, рисунок 1).У больных ООП выявлены значительно более выраженные изменения цитокиновогоспектра: повышение уровня TNF в 5,8 раз, IL-1β в 1,6 раз, IL-6 в 10,1 раз, IL-8 в 2,2 раз, IFNαи IFNγ соответственно в 8,9 и 13,4 раз, IL-4 и IL-10 в 16 и 10,1 раз, снижение IL-1RA в 1,8раз.
После лечения не изменилось содержание IL-8 и IL-4, еще в большей степени снижалсяуровень IL-1RA, концентрация остальных исследованных цитокинов корригировалась, но недо уровня здоровых доноров (таблица 1, рисунок 1).Исследование системы комплемента установило у пациентов с ОНП перед началомлечения в плазме крови изменения 3 показателей из 7: повышение содержания С 3компонента комплемента на 28,6% и С5а на 22,4% и снижение ингибитора системы комплемента фактора Н на 46,1%. После проведенного лечения все параметры системы комплемента оказались в пределах нормы, за исключением фактора Н (таблица 1, рисунок 1).У пациентов с ООП изменения оказались более значительными, так как выявленоповышение всех компонентов системы комплемента от 22,1 до 69,8% и разнонаправленноеизменение ингибиторов – повышение С1-инг.
на 17,3% и снижение фактора Н на 20,4%.12После проведенного базисного лечения уровень С3, С3а, С4, С5–компонентов комплементанормализовался,а С5а корригировался. Концентрация ингибиторов осталась на уровненачала лечения (таблица 1, рисунок 1).Для медицинской практики представляет большой интерес характер и степеньизменения показателей системы комплемента и сети цитокинов при ОНП и ООП наначальной стадии заболевания.При анализе исследованных 16 показателей у пациентов с ОНП и ООП до началалечения установлено статистически достоверное различие 15 из них (93,8%) в абсолютномотношении, и, что значимо, 5 показателей (С3а, С4, С5, С1-инг. и IL-1β) у пациентов ООПоказались выше значений у больных ОНП (таблица 1).При поступлении в клинику у больных ОНП выявлено падение фагоцитарнойактивности гранулоцитов (снижение ФИ, ФЧ и ИАФ) и повышение кислородзависимогометаболизма нейтрофилов: показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста и ФРНбыли выше таковых у здоровых доноров.
ИСН был ниже нормальных значений. После базисноголеченияФЧнормализовалось,аостальныепоказателифункционально-метаболической активности нейтрофилов корригировались в сторону показателей здоровыхдоноров, но не достигали нормальных значений (таблица 1, рисунок 1).У пациентов с ООП до лечения выявлены сходные с вышеописанными, но гораздоболее выраженные отклонения показателей функции полиморфно-ядерных лейкоцитов отнормы. При выписке этих больных ФРН и ИСН оставались практически на том же исходносниженном уровне; степень отклонений остальных показателей активности нейтрофиловуменьшалась, но полной их нормализации не происходило.Выявленные общие и специфические изменения иммунологических показателейплазмы крови и мочи у больных ООП и ОНП не только дополняют текущие представленияоб иммунопатогенезе этих заболеваний, но и являются фундаментом для разработки методовранней диагностики этих форм пиелонефрита.
Кроме того, установленные дефекты фагоцитарной функции нейтрофилов в свете данных литературы о подавлении активности этих клеток возбудителями пиелонефрита создают задел для направленного поиска эффективныхсредств иммунокоррекции среди препаратов, воздействующих на фагоцитарное звено иммунитета, как важного компонента комплексного лечения и реабилитации больных ООП иОНП. Кроме того, в качестве объектов выбора в этом плане внимания заслуживают средства,способные регулировать продукцию провоспалительных цитокинов.13Таблица 1Иммунные показатели на системном уровне у больных при остром необструктивном и обструктивном пиелонефрите (M±m).1ПоказателиЕдиницыИзмеренияTNFIL-1βIL-6IL-8IFNαIFNγIL-4IL-10IL-1RAС3пкг/млпкг/млпкг/млпкг/млпкг/млпкг/млпкг/млпкг/млпкг/млмг/длС3аС4С5нг/млмг/длнг/млС5аС1-инг.Фактор НФИФЧНСТ-сп.НСТ-ст.нг/млмкг/млмкг/мл%усл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
