Диссертация (1140388), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Выявленные изменения содержания клеточных элементов втканяхживотныхэтойподгруппы,по-видимому,отражаютхарактериммуносупрессивного действия циклофосфамида, так как известно, что этотпрепарат обладает стимулирующим эффектом в отношении гранулопоэза,одновременно вызывая угнетение лимфопоэза [63, 151].Так, выраженное увеличение нейтрофилов и тучных клеток объясняетсятем, что циклофосфамид обладает небольшим стимулирующим эффектом вотношении гранулопоэза при угнетении лимфопоэза. Стимуляция гранулопоэзачерез некоторое время сменяется его угнетением и развитием эффектанейтропении [63, 151, 155].
Снижение количества фибробластов может бытьобусловлено также прямым лимфопеническим эффектом циклофосфамида и еговлиянием на иммунокомпетентные клетки, которые, в свою очередь, оказываютрегуляторноевлияниенафибробласты.Так,цитокины,продуцируемыелимфоцитами, стимулируют (IL-1) и ингибируют продукцию коллагена (γинтерферон),атакжемодулируют(тромбоцитарный фактор роста) [165, 179].пролиферациюфибробластов107СтоиттакжеотметитьпоявлениеCD68+клеток,морфологическисоответствующих фибробластам. Наличие CD68+ фибробластов в дерме описанорядом авторов, и предполагает, что источник фибробластов из воспалительногопула может быть не только местной мехенхимальной дифференцировки, но имиелоидной. Есть основания полагать, о возможной миграции этих клеток издермы в зону имплантации катетера в условиях лимфопенического эффектациклофосфамида [105, 203].Имплантациякатетеров с предварительно выращенными биопленкамистафилококков (вторая подгруппа)Введение животным отрезков катетеров со сформированными на них invitro биопленками стафилококков приводит к их дальнейшему развитию in vivo созначительнымвозрастаниемскоплениймикроорганизмовнанаружнойповерхности имплантов в течение последующих трех суток экспериментов.Важно отметить в этих условиях увеличение в окружающих зонах количестватучных клеток, а также уменьшение толщины ограничительного вала вокруготрезков катетеров, и резкое снижение к третьим суткам содержания в этой зоненейтрофилов.Значительноенейтрофиловиуменьшениесодержанияпревалированиевмакрофагов,этотпериодвероятно,количествасвязаноснейтропеническим действием циклофосфамида.
Известно, что в условияхдефицита выделения иммунокомпетентными клетками медиаторов воспаленияокружающее биопленки пространство характеризуется резким ограничениемпроникновения в него гранулоцитов, функциональная активность которых взначительной степени подавлена [72, 75]. Таким образом, все перечисленныевыше факторы, по-видимому, способствуют увеличению численности клеточныхэлементов биопленок с активным ростом скоплений стафилококков наповерхностях отрезков катетеров.108Имплантация стерильных катетеров с однократным введением взвесистафилококковвокружающиеотрезкикатетеровтканииммуносупрессированых мышей (третья подгруппа)Принципиальных отличий в абсолютном и процентном соотношенииклеточного состава инфильтрата от изменений, обнаруженных в аналогичнойподгруппе без иммуносупрессии, выявлено не было.
Исключениями явилисьпродолжающийсянаповерхностяхотрезковкатетеровростскоплениймикроорганизмов и выраженное увеличение в зоне локализации имплантатовколичестватучныхклеток,по-видимому,обусловленноедействиемциклофосфамида (умеренное стимулирующее действие циклофосфамида награнулопоэз, в том числе и тучных клеток).Имплантация отрезков стерильных катетеров с ежесуточным в течение3 суток введением взвеси стафилококков в окружающие отрезки катетеровткани (четвертая подгруппа)Отличия от аналогичной подгруппы животных без иммуносупрессиизаключались в продолжающемся росте скоплений микроорганизмов как снаружи,так и в просветах отрезков катетеров, а также увеличением в окружающихимпланты тканях количества тучных клеток.
При этом со вторых суток в немотмечалось также резкое снижение количества макрофагов, нейтрофилов илимфоцитов (рис. 65), а также появление на третьи сутки экспериментов Тлимфоцитов (CD3+). Полученные данные свидетельствовали об угнетениииммунногоответаприиммуносупрессиинамассивноебактериальноеобсеменение. В данном случае, очевидно, также проявлялись изменения,обусловленные сочетанием действия как самого циклофосфамида, так имассивного бактериального обсеменения зоны имплантации катетера.
ПоявлениеТ-лимфоцитов на третьи сутки может быть связано с меньшим действиемциклофосфамида на Т-клеточное звено, в условиях массивного бактериальногообсемененияинедостаточностииммунного ответа [63, 94, 151].проявленияактивностидругихзвеньев109Количество клеток в полях зрения98765Макрофаги4Нейтрофилы3Фибробласты2Лимфоциты10123Без иммуносупрессии123Иммуносупрессия циклофсфамидомСуткиРис. 65. Изменение соотношения клеточного состава инфильтратов при ежесуточном введениивзвесей стафилококков в область имплантации отрезков катетеров без иммуносупрессии и нафоне иммуносупрессииТаким образом, при ежесуточном введении взвесей стафилококков в зоныимплантацииотрезковкатетеровнафонеиндуцированнойвведениемциклофосфамида иммуносупрессии в окружающих отрезки катетеров тканяхотмечается снижение содержания всех клеточных элементов.
Рост бактериальныхколоний на имплантированных отрезках катетеров в этих условиях был ярчевыражен, нежели у животных, не подвергавшихся действию иммунодепрессанта.Приэтомотмечалосьформированиевоспалительногоинфильтратасоскоплениями микроорганизмов как снаружи, так и внутри просвета отрезковкатетеров, в отличие от группы интактных животных, у которых колониибактерий и воспалительный инфильтрат обнаруживались только на внешнихповерхностях имплантов.Системное действие циклофосфамида на клеточный пул в очаге воспаления,связанное в первую очередь с его лимфопеническим эффектом способствуетснижению регенераторного потенциала в тканях у мышей, при высоком уровне110которогонаблюдаласьнечеткостьграницмеждуфазамивоспаленияивыраженности его проявлений (рис.
66,67). При имплантации отрезков катетероввокруг них формируется ограничительный вал, состоящий из фибрина, клетоквоспалительногоинфильтратаипродуктовихраспада.Толщинаограничительного вала обратно пропорциональна степени бактериальногообсеменения и дополнительно снижается на фоне иммуносупрессии. Данныеизменения явились обоснованием для проведения дальнейшего моделированиякатетер-ассоциированной инфекции именно на фоне иммуносупрессии.Антибактериальные пептиды, являясь частью врожденного иммунитетавсех многоклеточных организмов, также продуцируютсяодноклеточнымиорганизмами для подавления ближайшего бактериального окружения [62, 91,164]. АБП проявляют свое литическое действие не только в отношениипланктонных культур, но и в отношении уже сформированных биопленки, вчастности, стафилококков [144].
Кроме того, отмечается возможность подавленияприкрепления бактерий и колонизации имплантатов за счет покрытияповерхностейперспективных,антимикробнымирассматриваютсяагентами,средикоторых,низкомолекулярныеихвкачествекатионныепептидыбактерий [91, 144].В специальных экспериментах in vitro были получены первые результатыотносительноингибирующегодействиянаформированиебиопленокнизкомолекулярного катионного пептида варнерина, синтезируемого бактериямиStaphylococcus warneri KL-1 [24]. Подавляющий эффект пептида проявлялся какна стадии образования, так и на сформированных пленках при концентрациях,превышающих минимальную ингибирующую концентрацию для планктоннойкультуры.111100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%ФибробластыПодгруппа 4Подгруппа 32Подгруппа 2Подгруппа 1Подгруппа 31Подгруппа 4МакрофагиПодгруппа 2Подгруппа 1Подгруппа 4Подгруппа 3Подгруппа 2Подгруппа 1Нейтрофилы3Рис.
66. Изменение процентного соотношения основных клеточных элементов инфильтратов вподгруппах за трое суток без иммуносупрессии100%90%80%70%60%50%40%30%20%10%0%Подгруппа 3Подгруппа 4МакрофагиПодгруппа 22Подгруппа 11Подгруппа 4Подгруппа 3Подгруппа 2Подгруппа 1НейтрофилыПодгруппа 4Подгруппа 3Подгруппа 2Подгруппа 1Фибробласты3СуткиРис. 67.
Изменение процентного соотношения основных клеточных элементов инфильтратов вподгруппах за трое суток на фоне иммуносупрессии112Третья группа: моделирование катетер-ассоциированной инфекции на фонеиммуносупрессии при введении животным низкомолекулярного катионногопептида варнеринаИмплантациястерильныхотрезковкатетеров,предварительнообработанных варнерином (первая подгруппа).Подкожное введение отрезков катетеров, обработанных варнерином,приводит к достоверному увеличению в инфильтратах зоны их локализацииколичества нейтрофилов на первые сутки экспериментов.
На третьи сутки в этихзонах иммуногистохимически отмечалось наличие Т- и В-лимфоцитов (CD3+,CD20+) с отсутствием положительной реакции на виментин и CD34 в первые двоесуток эксперимента. Известно, что антибактериальные пептиды кроме активациилитического разрушения бактерии, имеют непосредственное влияние на организмхозяина [67, 68, 118, 120, 193]. Так, увеличение нейтрофилов в клеточноминфильтратеможетантибактериальнымибытьобъясненопептидамитучныхспособностьюклеток,которые,привлеченияповышаютпроницаемость микроциркуляторного русла для различных гуморальных иклеточных факторов иммунного ответа.Имеются данные о том, что и самиантибактериальные пептиды - являются сильными хемоаттрактантами дляантиген-представляющих клеток [111, 110, 169].Известно, что синтез и модификация виментина – важнейшего белкапромежуточных филаментов, соединительной ткани во многом осуществляетсямакрофагами с участием провоспалительных цитокинов [182].
При этом высокаяэкспрессия виментина свидетельствует об активности процессов репарации иразвития пула мезенхимальных клеточных элементов в очаге воспаления [182].Важноотметитьтакжевыявленнуюрядомавторовспособностьантибактериальных пептидов ингибировать синтез провоспалительных цитокинов[121, 128, 169]. Возможно, низкая экспрессия виментина в данной подгруппемышей была обусловлена подобными свойствами варнерина как эффективногоантибактериального пептида.113В соответствии с представленным, следует отметить, что рецепторы CD34эндотелиальных клеток сосудов являются одним из видов эффекторных молекулклеточной адгезии и относятся к муциноподобным адрессинам, наряду сGlyCAM-1, MadCAM-1. Развитие воспалительных процессов сопровождаетсяповышениемэкспрессииадгезивныхмолекулнаэндотелиоцитах,чтообеспечивает аккумуляцию лейкоцитов в микроциркуляторном русле зонывоспаленияиихэкстравазациювткань.Действительно,иммуногистохимическими исследованиями показано, что высокая экспрессияCD34 свидетельствует об активации воспалительных и репаративных процессов втканях [77].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
