Диссертация (1140388), страница 14
Текст из файла (страница 14)
49. Изменение макрафагально-гранулоцитарного коэффициента при имплантации отрезковкатетеров с бактериальными пленками и ежесуточном введении варнерина894.3.Третьяварнериномподгруппа:отрезковимплантациякатетеровипредварительнооднократноеобработанныхвведениевзвесистафилококковВ третьей подгруппе мышей с имплантацией отрезков стерильныхкатетеров, предварительно обработанных варнерином после однократноговведения взвесей стафилококков в операционную рану, выявлялись следующиеизменения.В первые сутки после подкожного введения отрезков катетеров воперационной зоне выявлялась клеточная инфильтрация окружающих тканей спреобладанием юных фибробластов (36,9±8.2% состава клеточного инфильтрата)с достоверным различием с аналогичной экспериментальной подгруппойживотныхкоторымпептидневводился(p=0,035).Макрофагально-гранулоцитарный коэффициент составлял 0,52 с содержанием лимфоцитов винфильтрате в количестве – 15,8±3,7%.На вторые сутки в окружающих катетер тканях появлялись фибрин,скоплениямикроорганизмов,единичныеплазматическиеобильнаяклетки.инфильтрацияполинуклеарами,Макрофагально-гранулоцитарныйкоэффициент оставался на уровне 0,52, при этом выявлялось достоверноеснижение (p=0,008) количества макрофагов (CD68+) по сравнению с аналогичнойподгруппой животных, которым варнерин не вводился (рис.
50-51).Навторыесуткидостоверноснижалоськоличествофибробластов(Vimentin+) в составе клеточного инфильтрата по сравнению с аналогичнойподгруппой мышей без введения варнерина – до 6,4±2,65% (p=0,009). Прииммуногистохимическом исследовании лимфоциты, количество которых всоставе клеточного инфильтрата возрастало в абсолютных и относительныхцифрах до 28,1±4,12%, были представлены Т- и B-лимфоцитами (CD3+, CD20+).Иммуногистохимическимреакция на CD34.методомвыявляласьвыраженнаяположительная90На третьи сутки после имплантации, состав клеточного инфильтрата былпрежним, но характеризовался достоверным снижением количества фибробластови обилием фибрина, по сравнению с аналогичной подгруппой без введенияварнерина (p=0,0001).
Скопления микроорганизмов выявлялись как в просветеотрезков катетера, так и в окружающих их тканях. В составе клеточногоинфильтрата так же не обнаруживались какие-либо существенные отличия попредыдущимсуткам.Так,макрофагально-гранулоцитарныйкоэффициентсоставлял 0,62, количество лимфоцитов несколько снижалось в процентномсоотношении – до 21,1±5,06%, а содержание фибробластов сохранялосьпрактически, на прежнем уровне – 6,6±2,71% клеточного состава инфильтрата(рис. 52-55).Рис. 50. Положительная иммуногистохимическаяРис. 51. Обилие нейтрофилов в инфильтратереакцияокружающемнаCD68вмакрофагахтканейотрезоккатетера,окружающих отрезок катетера, предварительнопредварительно обработанный варнерином собработанныйоднократнымварнериномсоднократнымвведением стафилококка.
2 сутки. (CD68+, x 1000)введениемстафилококка.2сутки. (окраска гематоксилином и эозином, x1000)91Рис. 52. Скопления стафилококков, фибрин вРис.инфильтратеинфильтрате окружающем отрезок катетера,окружающемпредварительноотрезокобработанныйкатетер,варнериномс53.Пролиферацияфибробластоввпредварительно обработанный варнерином соднократным введением взвеси стафилококка.
3однократнымсутки. (окраска гематоксилином и эозином, xстафилококка.1000)гематоксилином и эозином, x 1000)3введениемвзвесисутки.(окраска1,81,6МФ/ГФ коэффициент1,41,21Без варнерина0,8Варнерин0,60,40,20123СуткиРис. 54. Изменение макрофагально-гранулоцитарного коэффициента при однократномвведении взвеси стафилококков и предварительной обработке отрезков катетеров варнерином92Количество фибробластов в полях зрения3,5**3*2,52Без варнеринаВарнерин1,510,50123СуткиРис. 55.
Изменение количества фибробластов в клеточном инфильтрате при однократномвведении взвеси стафилококков при предварительной обработке им отрезков катетеров.* Различия достоверны (p<0,05), критерий Манна-Уитни4.4. Четвертая подгруппа: имплантация отрезков стерильных катетеров сежесуточным введением взвесей стафилококков и варнеринаВ четвертой подгруппе мышей с ежесуточным введением взвесейстафилококков в зоны имплантации катетеров и последующим ежесуточнымвведением в ту же область препарата варнерина протекание воспалительногопроцесса имело выраженные особенности.Уже на первые сутки развития воспалительной реакции – в лейкоцитарнуюфазу – формирование скоплений микроорганизмов отмечалось на поверхностяхотрезков катетеров. По периферии отрезков катетеров отмечалось наличиевоспалительного инфильтрата, в основном, представленного нейтрофильнымигранулоцитами, доля которых составляла 51,4±8,5% от всего состава клеточногоинфильтрата, наблюдалось формирование микроабсцессов и участков отложения93фибрина.Винфильтратедегранулирующихтучныхиммуногистохимическомотмечалосьтакжеклетокединичныхиисследованиивналичиеклеточномбольшогоплазматических.инфильтратечислаПритакжевыявлялись Т-лимфоциты (CD3+) и небольшое количество B-лимфоцитов(CD20+), а также макрофаги (CD68+) и фибробласты (CD68+, Vimentin+) на долюкоторых приходилось 11,8±2,52% и 14,5±7,64% состава клеточного инфильтрата,соответственно.
Макрофагально-граулоцитарный коэффициент был равен 0,22.При иммуногистохимическом исследовании, окружающих отрезки катетеровтканей на CD34 (CD34+) выявлялась выраженная положительная реакция (рис.56- 58).На вторые сутки экспериментов морфологическая картина оставаласьпрежней с тенденцией к уменьшению объемов скоплений микроорганизмов, приэтом соотношение клеточного состава в инфильтрате, практически не изменялось.При иммуногистохимическом исследовании в составе клеточного инфильтратавыявлялись T-лимфоциты (CD3+), в клеточном инфильтрате обнаруживалисьтакже макрофаги (CD68+) и фибробласты (CD68+, Vimentin+) и выявляласьположительная реакция на CD34. Макрофагально-гранулоцитарный коэффициентсоставлял 0,18 (рис. 59,60).На третьи сутки исследований количество фибробластов (Vimentin+),синтезирующих коллаген, оставалось незначительным – 7,7±3,21%. При этом,также отмечалось уменьшение объема скоплений микроорганизмов и достоверноеувеличениеввоспалительноминфильтратеколичестванейтрофильныхгранулоцитов по сравнению с аналогичной подгруппой животных без введенияварнерина (p=0,024), а макрофагально-гранулоцитарный коэффициент возрасталдо 0,40.
Количество лимфоцитов в инфильтрате по сравнению с предыдущимисутками возрастало как в абсолютных, так и в относительных цифрах до35,4±3,62%. При иммуногистохимическом исследовании лимфоциты былипредставлены, в основном, B-лимфоцитами (CD20+). Иммуногистохимическаяреакция на CD34 была такой же ярко выраженной (рис. 61-64).94Необходимо отметить, что при введении варнерина ограничительный валвокруготрезковкатетеровнавсемпротяжении,какправило,имелнеравномерную толщину и большое количество складок, что ограничиловозможности проведения точных измерений. В группе животных без введенияварнерина данного явления не наблюдалось, что затрудняет его объяснение.Во всех экспериментальных группах животных при применении варнеринатакже выявляли содержание в инфильтратах плазматических клеток.
Их среднийуровень в течение трех суток оставался, примерно, одинаковым во всех группах, всреднем 0,3-1 клетка на поле зрения. Следует, однако, отметить интереснуюдинамику их содержания во второй и третьих подгруппах проявившуюся в том,что на вторые сутки отмечался двукратный подъем количества этих клеток соснижением на третьи сутки.Таким образом, введение интактным животным низкомолекулярногокатионного пептида варнерина как в виде инъекций, так и после сорбции наотрезках катетеров в асептических условиях, не оказывает влияния на клеточныйсостав инфильтратов, но обладает иммуномодулирующим действием тканей зонвведения, способствуя увеличению количества нейтрофильных гранулоцитов ипоявлению дифференцированных форм лимфоцитов.Ежесуточное введение низкомолекулярного катионного пептида варнеринав область имплантации отрезков катетеров с предварительно сформированнымибиопленкамикоагулазонегативныхантибактериальноедействие,бактерийS.epidermidisоказываетспособствующееисчезновениюскоплениймикроорганизмов на поверхностях отрезков катетеров.Имплантацияотрезковкатетеров,предварительнообработанныхнизкомолекулярным катионным пептидом варнерином, не оказывает влияния нарост колоний микроорганизмов.95Рис.Формирование56.микроорганизмовископленийвоспалительногоРис.
57. Скопления нейтрофилов в клеточноминфильтратеприежесуточномвведенииинфильтрата из нейтрофилов, макрофагов ивзвесей стафилококков в зону имплантациифибрина при ежесуточном введении взвесейотрезкастафилококков в зону имплантации отрезкаежесуточным введением туда же варнерина. 1катетерасутки (окраска гематоксилином и эозином, xипоследующимежесуточнымвведением туда же варнерина. 1 сутки (окраскакатетераипоследующим200)гематоксилином и эозином, x 100)Рис. 58. Положительная иммуногистохимическаяРис.реакция на CD34 в тканях окружающих отрезокмикроорганизмовкатетеравзвесейинфильтрата из нейтрофилов, макрофагов истафилококков и варнерина. 1 сутки (CD34+, xфибрина при ежесуточном введении взвесей400)стафилококков в зону имплантации отрезкасежесуточнымвведениемкатетера59.иФормированиеипоследующимскопленийвоспалительногоежесуточнымвведением туда варнерина.
2 сутки (окраскагематоксилином и эозином, x 100)96Рис.ВоспалительныйизРис. 61. Остатки скоплений микроорганизмов,нейтрофилов, макрофагов, фибрина и тканевогофибрин при ежесуточном введением взвесейдетритастафилококков в зону имплантации катетера60.приежесуточноминфильтратвведениивзвесейстафилококков в зону имплантации катетера ии последующимежесуточным введениемпоследующим ежесуточным введением туда жеварнерина. 3 сутки (окраска гематоксилиномварнерина.
2 сутки (окраска гематоксилином ии эозином, x 100, х 200)эозином, x 100, х 200)Рис. 62. Широкая зона фибрина, небольшиеРис.скопленияиммуногистохимическая реакция на CD20 вмикроорганизмовислабая63.воспалительная инфильтрация вокруг отрезкалимфоцитахкатетера при ежесуточном введении взвесейкатетера с ежесуточным введением взвесейстафилококков в зону имплантации катетера истафилококков и варнерина. 3 сутки (CD20+, xпоследующим ежесуточным введением туда же1000)варнерина. 3 сутки (окраска гематоксилином иэозином, x 200)тканейПоложительнаяокружающихотрезок97Количество нейтрофилов в полях зрения65*4Без варнерина3Варнерин210123СуткиРис.64.
Изменение количества нейтрофилов в клеточном инфильтрате вокруг отрезковкатетеров при ежесуточном введении взвесей стафилококков и варнерина* Различия достоверны (p<0,05), критерий Манна-Уитни98Таблица 9Иммуногистохимические реакции окружающих отрезок катетера тканей вэкспериментальных подгруппах животныхИГХ маркерыCD68 CD34 CD3 CD20 VimentinГруппа животных с иммуносупрессией1"+""+""-""+""+"Стерильные катетеры2"+""+""-""+""+"(Подгруппа 1)3"+""+""-""-""+"1"+""+""-""+""+"Катетеры с биопленками2(Подгруппа 2)"+/3"+""+"""+""+"1Однократное введение взвесистафилококка2(Подгруппа 3)3"+""-""+""+"1Ежесуточное введение взвеси"+/стафилококка2"+""+"""+""+"(Подгруппа 4)3"+""+""+""+"Группа животных с иммуносупрессией и применением варнерина1"-""-""-""-""-"Стерильные катетерыпредобработанные варнерином2"+""-""+""+/-""-"(Подгруппа 1)3"+""+""+""+""+"Катетеры с биопленками и1ежесуточное введение2"+""+""-""-""+"варнерина3(Подгруппа 2)"+""-""-""-""+/-"Однократное введение взвеси1стафилококка на2"+""+""+""+""+"предобработанные варнериномкатетеры3(Подгруппа 3)1"+""+""+""+/-""+"Ежесуточное введение взвеси2"+""+/-" "+""-""+"стафилококка и варнерина"+/(Подгруппа 4)3"+""+"""+""+"ГруппыСутки99Таблица 10Изменения процентного соотношения клеточного состава инфильтратаокружающих отрезки катетеров тканей в экспериментальных подгруппахживотныхГруппыСуткиКлеточные элементы M±mnМакрофаги Нейтрофилы ФибробластыГруппа животных с иммуносупрессиейЛимфоцитыМФ/ГФ*11616±3,6254,25±6,828,5±3,4621,25±6,070,2921018,3±6,3646,7±6,5611,8±5,2623,2±5,060,393515±3,1948±9,3819,8±9,0617,2±5,60,31Катетеры сбиопленками(Подгруппа 2)1620,17±4,6545,33±8,7310±624,5±8,530,442521,2±6,7729±8,0835,4±9,3814,4±3,640,733421,5±9,521,5±5,2628,75±11,2928,25±12,621,00Однократное введениевзвеси стафилококка(Подгруппа 3)1632,83±7,0726,17±6,488,33±2,9532,67±10,031,252534,4±4,8622±4,1414,4±5,6729,2±5,321,563817±2,9332,75±5,5828,87±6,121,38±5,830,51Ежесуточное введениевзвеси стафилококка(Подгруппа 4)1632,83±7,0726,17±6,488,33±2,9532,67±10,031,252539,8±6,3417±10,4434,4±13,468,8±6,412,34Стерильные катетеры(Подгруппа 1)3740±11,6420,14±13,4622,72±7,9617,14±7,1Группа животных с иммуносупрессией и применением варнеринаСтерильные катетеры139,66±3,7160,67±5,453±326,67±4,84предобработанные2421,75±3,8130,75±10,8222,75±9,0124,75±15,79варнерином3511,2±5,1962,4±13,868,6±6,417,8±9,63(Подгруппа 1)Ежесуточное введение13221,9±3,8838,56±4,5416,72±3,322,82±3,47варнерина на катетеры21120±4,9450,73±6,939,09±9,0920,18±5,82с биопленками(Подгруппа 2)31013,7±6,2448,4±10,4217±8,5720,9±9,47Однократное введение11116,37±4,130,9±9,6636,9±8,2115,83±3,74стафилококка на22322,65±4,5642,83±3,366,43±2,6528,09±4,12предобработанныеварнерином катетеры(Подгруппа 3)31127,73±7,7144,54±5,926,64±2,7121,09±5,06Ежесуточное введение11411,78±2,5251,43±8,5814,5±7,6422,29±7,67взвеси стафилококка и2811,62±2,7962,38±7,639,62±5,3516,38±5,21варнерина(Подгруппа 4)31416,93±4,3440±6,747,71±3,2135,36±3,62* МФ/ГФ – Макрофагально-гранулоцитарный коэффициент1,980,150,70,170,560,390,280,520,520,620,220,180,42100Таблица 11Изменения абсолютного соотношения клеточного состава инфильтратаокружающих отрезки катетеров тканей в экспериментальных подгруппахживотныхГруппыСуткиnМакрофагиКлеточные элементы M±mНейтрофилы ФибробластыГруппа животных с иммуносупрессией1160,8±0,22,5±0,30,4±0,1Стерильные катетеры2102,0±0,83,5±0,81,0±0,4(Подгруппа 1)352,8±0,88,4±1,64,6±1,9163,0±0,86,2±2,11,2±0,6Катетеры сбиопленками252,4±0,63,8±1,54,0±1,0(Подгруппа 2)343,3±1,93,0±1,03,5±1,3162,7±0,82,0±0,60,7±0,2Однократное введениевзвеси стафилококка255,4±1,23,4±1,12,6±1,0(Подгруппа 3)382,0±0,34,0±0,93,0±0,5162,7±0,82,0±0,60,7±0,2Ежесуточное введениевзвеси стафилококка252,4±0,71,2±0,81,6±0,6(Подгруппа 4)382,5±0,80,8±0,21,8±0,5Группа животных с иммуносупрессией и применением варнеринаСтерильные катетеры131,3±0,310,0±2,6*0,6±0,6предобработанные241,0±0,01,5±0,61,0±0,4варнерином(Подгруппа 1)360,8±0,43,1±1,20,5±0,3Ежесуточное введение1321,2±0,2*2,6±0,40,9±0,2варнерина на2111,8±0,33,2±0,80,4±0,4*катетеры сбиопленками(Подгруппа 2)3100,9±0,42,3±0,50,8±0,4*Однократное введение1111,2±0,31,8±0,62,9±0,6*взвеси стафилококка2231,4±0,2*3,2±0,40,3±0,1*на предобработанныеварнерином катетеры(Подгруппа 3)3111,6±0,24,0±0,70,5±0,2*Ежесуточное введение1141,0±0,24,9±1,30,4±0,1взвеси стафилококка и281,2±0,34,8±0,81,0±0,5варнерина(Подгруппа 4)3141,3±0,44,0±1,2*0,6±0,2Лимфоциты0,8±0,12,4±0,61,2±0,42,3±1,01,8±0,44,3±1,72,3±0,73,8±0,43,1±1,02,3±0,70,8±0,52,0±0,94,0±0,01,5±0,91,3±0,71,7±0,31,2±0,31,3±0,61,3±0,32,3±0,42,2±0,61,5±0,31,6±0,52,7±0,5* p ≤ 0,05 по сравнению с аналогичными сутками аналогичной подгруппы без примененияварнерина, критерий Манна-Уитни101ГЛАВА 5.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
