Диссертация (1140388), страница 13
Текст из файла (страница 13)
МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА МОДЕЛИ КАТЕТЕРАССОЦИИРОВАННОЙ ИНФЕКЦИИ НА ФОНЕ ИММУНОСУПРЕССИИ ПРИВВЕДЕНИИ ЖИВОТНЫМ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНОГО КАТИОННОГОПЕПТИДА ВАРНЕРИНА4.1. Первая подгруппа: имплантация стерильных отрезков катетеровпредварительно обработанных варнериномВ первой подгруппе при имплантации мышами отерзков стерильныхкатетеров, предварительно обработанных варнерином, ответная реакция тканейживотных характеризовалась последовательной сменой фаз воспаления вокруготрезков катетеров в течение всего периода исследования. В первые суткипреобладала лейкоцитарная фаза с фибринозно—лейкоцитарной инфильтрацией ипреобладанием в клеточном инфильтрате нейтрофилов – 60,7±5,45%, которыхбыло достоверно больше по сравнению с контрольной подгруппой животных безвведения пептида (p=0,008).
При этом, в инфильтрате обнаруживались макрофаги,доля которых составляла 9,7±3,71% состава всего клеточного инфильтрата созначением макрофагально-гранулоцитарного коэффициента 0,15. Количествофибробластов в инфильтрате было крайне незначительно, достигая 3,0±3,0%.Содержание лимфоцитов в клеточном инфильтрате составляло 26,7±4,84%.Результаты иммуногистохимической окраски лимфоцитов на CD3 и CD20 былиотрицательные (табл. 9-11, рис. 38-41).На вторые сутки содержание нейтрофилов в инфильтрате снижалось до30,7±10,82% с возрастанием макрофагально-гранулоцитарного коэффициента до0,7.
Данные изменения свидетельствовали о наступлении макрофагальной фазывоспалительного процесса. При иммуногистохимическом анализе окружающихкатетер тканей на виментин и CD34 выявлялась отрицательная реакция в течениепервых и вторых суток, в отличие от аналогичной подгруппы без примененияварнерина, где первые двое суток она была положительная83На третьисутки регистрировалось большое количествоэлементовгрануляционной ткани, представленных тонкими коллагенновыми волокнами,остаткамифибрина,тонкостеннымисосудами(CD34+),единичнымиплазматическими клетками и фибробластами (Vimentin +).
Часть фибробластовбылаCD68+и,возможно,мигрировалаиздермы,что,вобщем,свидетельствовало о наступлении фибропластической фазы, хотя количествосамих фибробластов составляло всего 8,6±642% от всего состава клеточногоинфильтрата. Среди лимфоцитов на вторые и третьи сутки была выявленаположительная реакция на CD3 и CD20, а количество самих лимфоцитов втечение всего срока эксперимента составляло, с небольшими колебаниями около25% от состава клеточного инфильтрата (рис. 42-44).При однократном введении антибактериального пептида варнерина вобластьимплантациистерильногокатетераморфологическаякартинасоответствовала подгруппе с предварительной обработкой варнерином катетера.Количество нейтрофилов в полях зрения12*1086Без варнеринаВарнерин420123СуткиРис.
38. Изменение количества нейтрофилов в клеточном инфильтрате при имплантацииотрезков стерильных катетеров и введении варнерина*Различия достоверны (p<0,05), критерий Манна-Уитни84Рис. 39. Положительная иммуногистохимическаяРис. 40. Отрицательная иммуногистохимическаяреакцияреакциянаокружающихCD68вотрезокмакрофагахстерильноготканейкатетеранаокружающихCD20вотрезоклимфоцитахстерильноготканейкатетерапредварительно обработанного варнерином. 1предварительно обработанного варнерином.
1сутки. (CD68+, x 1000)сутки. (CD20-, x 200)Рис. 41. Отрицательная иммуногистохимическаяРис. 42. Положительная иммуногистохимическаяреакция на виментин втканях окружающихреакция на виментин в тканях окружающихотрезок стерильного катетера предварительноотрезок стерильного катетера предварительнообработанного варнерином. 1 сутки. (Vimentin+, xобработанного варнерином. 3 сутки. (Vimentin+, x400)400)85Рис.
43. Положительная иммуногистохимическаяРис. 44. Положительная иммуногистохимическаяреакция на CD68 вреакцияокружающихотрезокфибробластах тканейстерильногокатетеранаокружающихCD20вотрезоклимфоцитахстерильноготканейкатетерапредварительно обработанного варнерином. 3предварительно обработанного варнерином. 3сутки. (CD68+, x 1000)сутки. (CD20+, x 1000)4.2. Вторая подгруппа: имплантация отрезков катетеров с предварительновыращенными на них двухсуточными биопленками стафилококков и сежесуточным введением варнеринаВо второй подгруппе мышей после имплантации им катетеров спредварительно выращенными в течение двух суток бактериальных пленок, иежесуточного введения варнерина в операционную зону в течение трех суток впротекании воспалительного процесса были выявлены следующие особенности.В первые сутки после имплантации в операционной зоне отмечали отек иповышенноекровенаполнениеокружающихотрезоккатетератканейсвыпадением фибрина.
Клеточный инфильтрат был представлен, в основном,нейтрофилами, содержание которых достигало 38,56±4,54% всего клеточногоинфильтрата.Винфильтратетакжеопределялосьбольшоеколичестводегранулирующих тучных клеток и единичные плазматические клетки (рис. 45).При этом количество макрофагов было достоверно ниже, чем в препаратаханалогичной подгруппы животных без введения варнерина (p=0,024), составляя21,9±3,88% от клеточного состава инфильтрата со значением макрофагально-86гранулоцитарногокоэффициента0,56.Внебольшомколичестветакжеобнаруживались и фибробласты, составляя 16,7±3,3% клеток инфильтрата.Рис. 45.
Дегранулирующие тучные клетки в тканях окружающих отрезок катетера спредварительно выращенными биопленками и ежесуточным введением варнерина. 1 сутки(окраска гематоксилином и эозином, x 1000)На вторые сутки фибрин обнаруживался не только снаружи, но и впросвете катетера. При этом выявлялось очаговое скопление клеток –лимфоцитов (CD3-, CD20-), распадающихся с образованием «гнойных телец»нейтрофилов и скоплений микроорганизмов (рис. 46).
По периферии отрезкакатетера обнаруживались макрофаги (CD68+), фибробласты (Vimentin+) иединичныеплазматическиеклетки(CD20-).Приэтоммакрофагально-гранулоцитарный коэффициент уменьшался до 0,39, за счет увеличенияпроцентногосодержаниянейтрофильныхгранулоцитоввинфильтрате(50,73±6,93%). Следует также отметить, что по сравнению с группой животных,которым пептид не вводился, количество фибробластов достоверно снижалось(p=0,002).
При иммуногистохимическом исследовании окружающих отрезоккатетера тканей выявлена положительная реакция на CD34.87Натретьипредставленсуткиэкспериментовлимфоцитами,воспалительныймакрофагами,инфильтратнейтрофилами,былединичнымиплазматическими клетками, а фибробласты, часть из которых была CD68+,формировали ограничительный вал вокруг отрезка катетера. При этом, ихколичество было достоверно ниже, чем в подгруппе без использования варнерина(p=0,033).
Обращало на себя внимание отсутствие скоплений стафилококка (рис.47).Иммуногистохимическоеисследованиеинфильтратавыявилоположительную реакцию на CD20 у части лимфоцитов, что позволило отнести ихк B-лимфоцитам. Реакция на CD3 и CD34 была во всех случаях отрицательная, ареакция на виментин слабоположительная (Vimentin +/-).Макрофагально-гранулоцитарный коэффициент в этих условиях снижался до 0,28, за счетуменьшения количества макрофагов в клеточном инфильтрате до 13,7±6,24%(рис. 48-49). Количество лимфоцитов (CD3-, CD20-) в течение трех суток, как и впредыдущей экспериментальной подгруппе мышей, составляло, с небольшимиизменениями, около 20% от состава всего клеточного инфильтрата.Рис. 46. Скопления микроорганизмов, фибрин,Рис.клетки воспалительного инфильтрата внутри иткани, фибробласты, единичные макрофаги,вокруг отрезка катетера при имплантациилимфоцитыкатетераимплантацииспредварительновыращенными47.Фибрин,вокругволокнаотрезкакатетерассоединительнойкатетераприпредварительнодвухсуточными биопленками и ежесуточномвыращенными двухсуточными биопленками ивведении 1 мл варнерина.
2 сутки (окраскаежесуточном введении 1 мл варнерина. 3 суткигематоксилином и эозином, x 100, x 200)(окраска гематоксилином и эозином, x 100, x200)88Количество фибробластов в полях зрения6*5*43Без варнеринаВарнерин210123СуткиРис. 48. Изменение количества фибробластов в клеточном инфильтрате при имплантацииотрезков катетеров со сформированными на них биопленками бактерий S.epidermidis 33 приежесуточном введении варнерина*Различия достоверны (p<0,05), критерий Манна-Уитни1,2МФ/ГФ коэффициент10,80,6Без варнеринаВарнерин0,40,20123СуткиРис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
