Диссертация (1140388), страница 12
Текст из файла (страница 12)
Скопления микроорганизмов внутри иреакциявокругнаCD20влимфоцитахтканейотрезкакатетераприоднократномокружающих отрезок катетер при однократномвведениивведенииимплантации катетера на фоне иммуносупрессии.взвесистафилококканаиммуносупрессии. 3 сутки. (CD20+, x 1000)фоневзвесистафилококкавзону3 сутки. (окраска гематоксилином и эозином, x 100,х 200)743.2.4. Четвертая подгруппа: имплантация животным отрезков стерильныхкатетеров с ежесуточным введением взвесей стафилококков в зонуимплантацииВ четвертой подгруппе при ежесуточном введении взвеси стафилококка взону имплантации отрезка катетера морфологические отличия также начиналисьсо вторых суток.Так, скопления микроорганизмов увеличивались, но, в отличие отаналогичной подгруппы животных без введения циклофосфамида, к третьимсуткам он наблюдался, в том числе и внутри отрезка катетера, что в том числевыявлялось окрашиванием по Броун-Хоппс (рис.
33-34).По сравнению с аналогичной подгруппой иммунокомпетентных животныхко вторым суткам отмечалось достоверное снижение количества макрофагов(p=0,002) и лимфоцитов (p=0,029), а содержание лимфоцитов снижалось вабсолютных и относительных цифрах с 32,67±10,03% на первые сутки и до8,8±6,41% на вторые. При иммуногистохимическом исследовании лимфоциты, восновном, были представлены В-лимфоцитами (CD20+) с единичными Тлимфоцитами (CD3). В составе клеточного инфильтрата со вторых сутокколичество фибробластов (Vimentin+) достигало 34,6±13,46% и оставалось науровне 22,72±7,96% к третьим суткам, что было в первую очередь связано суменьшением в абсолютном и процентном соотношении количества нейтрофилови лимфоцитов.
При иммуногистохимическом исследовании окружающих катетертканей на CD34 выявлялась положительная реакция.На третьи сутки экспериментов отмечалось резкое увеличение объемабактериальных скоплений, подтверждаемое окраской по Броун-Хоппс, сформированием ограничительного вала из фибробластов и коллагеновых волокон(Vimentin+) по периферии отрезка катетера, а также резкое снижением количестванейтрофилов в клеточном инфильтрате, по сравнению с аналогичной подгруппойинтактных животных (p=0,04). Макрафагально-гранулоцитарный коэффициентнезначительно уменьшался - 1,98.
При иммуногистохимическом исследовании75окружающих отрезок катетера тканей на CD34 также выявлялась положительнаяреакция. При окраске основным коричневым по Шубичу в инфильтрате вокругкатетера обнаруживалось 20±2 диффузно расположенных тучных клеток дающиххарактерное окрашивание.
К третьим суткам иммуногистохимически выявиласьположительная реакция на CD3 и CD20 (CD3+, CD20+) , при общем увеличении вабсолютных и относительных цифрах количества лимфоцитов до 17,14±7,1% отобщего состава клеточного инфильтрата, по сравнению с предыдущими сутками(рис. 35-37).Рис.33.СкоплениямикроорганизмоввРис. 34. Воспалительный инфильтрат, скопленияокружающих отрезок катетера тканях (черно-микроорганизмовсиниекатетера при многократном введении взвесейучастки)приимплантацииотрезковввнутризонуивокругимплантацииотрезкакатетеров с многократным введением взвесейстафилококковотрезкастафилококков на фоне иммуносупрессии.
2 сутки.стерильного катетера на фоне иммуносупрессии. 2(окраска по Броун-Хоппс, x 200)сутки. (окраска гематоксилином и эозином, x 100)76Рис. 35. Положительная иммуногистохимическаяРис.реакциявоспалительнаянаCD20влимфоцитахтканей,36.Скоплениямикроорганизмов,инфильтрация,итяжиокружающих отрезок катетера, при многократномфибробластов при многократном введении взвесейвведениистафилококковвзвесейстафилококковнаиммуносупрессии. 3 сутки. (CD20+, x 1000)фоневзонуимплантацииотрезкастерильного катетера на фоне иммуносупрессии. 3сутки. (окраска гематоксилином и эозином, x 200)10*Количество клеток в полях зрения98765Макрофаги4Нейтрофилы3Лимфоциты2*1*012Без иммуносупрессии3123Иммуносупрессия циклофосфамидомСуткиРис.
37. Изменения количества макрофагов, нейтрофилов и лимфоцитов в клеточноминфильтрате при ежесуточном введении взвесей стафилококков в область имплантацииотрезков катетеров на фоне иммуносупрессии*Различия достоверны (p<0,05), критерий Манна-Уитни77Таким образом, при ежесуточном введении животным взвеси стафилококкав зону имплантации катетера, при развитии иммуносупрессии обусловленнойвведениемциклофосфамида,втканях,окружающихкатетер,снижаетсясодержание всех иммунокомпетентных элементов – макрофагов, нейтрофильныхгранулоцитов и лимфоцитов, отражающее подавление клеточного иммунитета.Рост колоний микроорганизмов на имплантированных отрезках катетеровнаиболеевыраженприподавлениииммуннойзащитывведениемциклофосфамида. При этом формирование воспалительного инфильтрата ископлений микроорганизмов обнаруживалось как снаружи, так и внутри просветаотрезка катетера, в отличие от иммунокомпетентных животных, у которыхмикробные колонии и воспалительный инфильтрат обнаруживались толькоснаружи катетера.Важно отметить, что иммуносупрессия при моделировании катетерассоциированной инфекции мышей характеризуется более четкими различиямимежду суточными изменениями в воспалительном процессе и выраженности егопроявлений,чтомоделированияиммуносупрессии.явилосьобоснованиемкатетер-ассоциированнойдляпроведенияинфекцииименнодальнейшегонафоне78Таблица 5Иммуногистохимические реакции тканей лабораторных мышей окружающихотрезок катетера в экспериментальных подгруппах животныхГруппыСтерильные катетеры(Подгруппа 1)Катетеры сбиопленками(Подгруппа 2)Однократное введениевзвеси стафилококка(Подгруппа 3)Ежесуточное введениевзвеси стафилококка(Подгруппа 4)Стерильные катетеры(Подгруппа 1)Катетеры сбиопленками(Подгруппа 2)Однократное введениевзвеси стафилококка(Подгруппа 3)Ежесуточное введениевзвеси стафилококка(Подгруппа 4)ИГХ маркерыCD68 CD34 CD3CD20Интактные животные1"+""-""+"2312"+""+""+/-""+"3"+""+""-""+"1"+""+""+"23123"+""+""-""+"Животные с иммуносупрессией1"+""+""-""+"2"+""+""-""+"3"+""+""-""-"1"+""+""-""+"23"+""+""+/-""+"123"+""-""+"12"+""+""+/-""+"3"+""+""+"СуткиVimentin"+""+""+""+""+""+""+""+""+""+""+""+""+"79Таблица 6Изменения процентного соотношения клеточного состава инфильтратаокружающего отрезок катетера в экспериментальных подгруппах животныхПодгруппыСуткиnКлеточные элементы M±mМакрофагиНейтрофилыФибробластыЛимфоцитыМФ/ГФ*Группа интактных животныхСтерильныекатетеры(Подгруппа 1)Катетеры сбиопленками(Подгруппа 2)Однократноевведение взвесистафилококка(Подгруппа 3)Ежесуточноевведение взвесистафилококка(Подгруппа 4)123123126453578725,5±6,5124±5,7426±4,614,67±7,8825,2±6,3612,71±3,8123,12±5,0917,85±3,6629,17±7,6729,5±2,8725,6±6,6143±5,1330,8±10,0144,43±5,5526,88±4,8520±2,774,33±1,9635,75±11,0124±2,8412,33±6,2216,2±5,0632,14±7,797,12±3,5127,29±9,0541±6,6110,75±4,1324,4±3,3230±1,7327,8±10,9710,72±2,6942,88±3,2634,86±6,690,870,811,010,340,810,280,860,8931248323±9,0823,12±5,0944±5,2929,5±9,226,88±4,8526,67±9,3328,75±12,477,12±3,517,33±2,3318,75±9,1942,88±3,2622±5,680,770,861,640,893625,16±7,2228,17±7,9412,67±6,7934±6,82Группа животных с иммуносупрессиейСтерильныекатетеры(Подгруппа 1)Катетеры сбиопленками(Подгруппа 2)Однократноевведение взвесистафилококка(Подгруппа 3)Ежесуточноевведение взвесистафилококка(Подгруппа 4)12312312161056546516±3,6218,3±6,3615±3,1920,17±4,6521,2±6,7721,5±9,532,83±7,0734,4±4,8654,25±6,8246,7±6,5648±9,3845,33±8,7329±8,0821,5±5,2626,17±6,4822±4,148,5±3,4611,8±5,2619,8±9,0610±635,4±9,3828,75±11,298,33±2,9514,4±5,6721,25±6,0723,2±5,0617,2±5,624,5±8,5314,4±3,6428,25±12,6232,67±10,0329,2±5,320,290,390,310,440,731,001,251,5631286517±2,9332,83±7,0739,8±6,3432,75±5,5826,17±6,4817±10,4428,87±6,18,33±2,9534,4±13,4621,38±5,8332,67±10,038,8±6,410,511,252,343740±11,6420,14±13,4622,72±7,9617,14±7,11,98* МФ/ГФ – Макрофагально-гранулоцитарный коэффициент80Таблица 7Изменения абсолютного соотношения клеточного состава инфильтратаокружающего отрезок катетера в экспериментальных подгруппах животныхПодгруппыСуткиnМакрофагиКлеточные элементы M±mНейтрофилы ФибробластыЛимфоцитыГруппа интактных животныхСтерильныекатетеры(Подгруппа 1)Катетеры сбиопленками(Подгруппа 2)Однократноевведение взвесистафилококка(Подгруппа 3)Ежесуточноевведение взвесистафилококка(Подгруппа 4)12312312645357873,5±1,15,3±1,65,0±0,71,6±0,92,4±0,83,1±1,33,5±1,12,2±0,53,8±1,26,3±1,35,4±1,44,6±0,32,4±0,69,2±1,9*3,3±0,62,7±0,50,5±0,27,0±2,15,0±1,11,3±0,61,4±0,56,1±1,8*0,8±0,33,4±1,2*5,5±0,92,5±0,94,8±0,73,3±0,32,2±0,72,5±0,75,7±1,14,2±0,9312348362,2±0,43,5±1,18,3±0,82,8±0,93,2±0,83,3±0,66,0±2,63,6±1,44,0±2,40,8±0,31,3±0,30,8±0,42,2±1,15,7±1,14,3±1,43,0±0,4Группа животных с иммуносупрессиейСтерильныекатетеры(Подгруппа 1)Катетеры сбиопленками(Подгруппа 2)Однократноевведение взвесистафилококка(Подгруппа 3)Ежесуточноевведение взвесистафилококка(Подгруппа 4)1231231216105654650,8±0,2**2,0±0,82,8±0,83,0±0,82,4±0,63,3±1,92,7±0,85,4±1,2**2,5±0,33,5±0,88,4±1,66,2±2,13,8±1,53,0±1,0**2,0±0,63,4±1,10,4±0,11,0±0,4**4,6±1,91,2±0,64,0±1,0**3,5±1,30,7±0,22,6±1,00,8±0,1**2,4±0,61,2±0,42,3±1,01,8±0,44,3±1,72,3±0,73,8±0,43128652,0±0,32,7±0,82,4±0,7**4,0±0,92,0±0,61,2±0,83,0±0,50,7±0,21,6±0,63,1±1,02,3±0,70,8±0,5**382,5±0,80,8±0,2**1,8±0,52,0±0,9* p ≤ 0,05 по сравнению с первыми сутками первой подгруппы (отрезки стерильных катетеров)без иммуносупрессии, критерий Манна-Уитни** p ≤ 0,05 по сравнению с аналогичными сутками аналогичной подгруппы безиммуносупрессии, критерий Манна-Уитни81Таблица 8Толщина ограничительного вала вокруг отрезка катетера (мкм.)ПоказательСтерильные отрезкиОтрезки катетеров сбиопленкамикатетеровS.epidermidis 33Отрезки катетеров сбиопленкамиS.epidermidis 33 на фонеиммуносупрессииСутки123123123M27,036.622.561,3*49,6*43,3*34,0**44,8*30,4**3.5913.887.36.129.455.716.417.493.71m1.1341.652.042.981.722.022.371.17n101218910111010100.0050.0110.00010.0210.1130.007p* Различия достоверны по сравнению с первой подгруппой (отрезки стерильных катетеров) безиммуносупресии, критерий Манна-Уитни** Различия достоверны по сравнению с первой (отрезки стерильных катетеров) и второйподгруппам (отрезки катетеров с биопленками) без иммуносупрессии, критерий Манна-Уитни82ГЛАВА 4.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
