Диссертация (1140388), страница 11
Текст из файла (страница 11)
При окраске основнымкоричневым по Шубичу в инфильтрате вокруг катетера при осмотре 20 полейзрения было выявлено 40,0±3,1 дегрнанулирующих тучных клеток, выявляемыххарактерным окрашиванием (рис. 19, 20).Навторыесуткиэкспериментовмакрофагально-гранулоцитарныйкоэффициент немного увеличивался до 0,39. В инфильтрате также отмечалосьналичие тучных клеток и единичных плазматических клеток (рис. 21). Количествофибробластов на вторые сутки было достоверно меньше, чем в аналогичнойподгруппе без применения циклофосфамида и составляло 11,8±5,26% от составаклеточного инфильтрата против 35,7±11,01% (p=0,007). По сравнению с первымисутками количество лимфоцитов возрастало незначительно до 23,2±5,06% отобщегосоставаклеточногоинфильтрата.Прииммуногистохимическомисследовании лимфоциты, в основном, были представлены В-лимфоцитами(CD20+) и обладали CD3 отрицательной реакцией (CD3-), как и на первые суткиэксперимента.Необходимо отметить, что на третьи сутки количество макрофагов (CD 68+)в клеточном инфильтрате составляло 15,0±3,19% (с изменением МФ/ГФкоэффициентадо0,31)ипоявлялисьCD68+клетки,морфологическисоответствующие фибробластам (рис.
22). Количество лимфоцитов относительновторых суток незначительно уменьшилось и составляло 17,2±5,6% клеточногоинфильтрата.Приэтом,иммуногистохимическилимфоцитыобладали65отрицательной реакцией как на CD3, так и на CD20 рецепторы (CD3-, CD20-).Количество фибробластов в составе клеточного инфильтрата увеличивалось с1,0±0,4 клетки в поле зрения на вторые сутки экспериментов до 4,6±1,9 клетки вполе зрения на третьи сутки. При иммуногистохимическом исследованииокружающих катетер тканей на виментин и CD34 выявлялась положительнаяреакция (Vimentin+, CD34+) в течение всех трех суток, как и в аналогичнойподгруппе иммунокомпетентных животных.1,2МФ/ГФ коэффициент10,80,6Без иммуносупрессии0,4Иммуносупрессияциклофосфамидом0,20123СуткиРис.
17. Изменение макрофагально-гранулоцитарного коэффициента в клеточном инфильтратепри имплантации отрезков стерильных катетеров на фоне иммуносупрессии668*Количество клеток в полях зрения7*654Фибробласты3Лимфоциты210123Без иммуносупрессии123Иммуносупрессия циклофосфамидомСуткиРис. 18. Изменение количества фибробластов и лимфоцитов в клеточном инфильтрате приимплантации отрезков стерильных катетеров на фоне иммуносупрессии.* Различия достоверны (p<0,05), критерий Манна-УитниРис. 19. Положительная иммуногистохимическаяРис. 20. Положительная иммуногистохимическаяреакция на CD68 в цитоплазме макрофаговреакциятканей,окружающих отрезок стерильного катетера, наокружающихотрезокстерильногокатетера, на фоне иммуносупрессии.
1 сутки.(CD68+, x 1000)наCD20влимфоцитахтканей,фоне иммуносупрессии. 1 сутки. (CD20+, x 1000)67Рис. 21. Дегранулирующие тучные клетки вРис. 22. Положительная иммуногистохимическаятканях,стерильногореакция на CD68 в цитоплазме фибробластов,катетера, на фоне иммуносупрессии.
2 сутки.окружающих отрезок стерильного катетера, в(окраска гематоксилином и эозином, x 1000)условиях иммуносупрессии. 3 сутки. (CD68+, xокружающихотрезок1000)3.2.2. Вторая подгруппа: имплантация животным отрезков катетеров спредварительно выращенными на них биопленками стафилококковВо второй подгруппе животных при имплантации отрезков катетеров спредварительно выращенными на них двухсуточными биопленками, отличияморфологической картины от аналогичной контрольной подгруппы животныхзаключались в следующем. На вторые сутки количество фибробластов(Vimentin+) в клеточном инфильтрате достоверно увеличивалось с 1,2±0,6 клетокв поле зрения на первые сутки до 4,0±1,0 клеток в поле зрения на вторые(p=0,049), чего не наблюдалось в аналогичнойподгруппе мышей безиммуносупрессии (рис.
23). Кроме фибробластов (10,0±6,0%) в первые сутки всоставеклеточногоинфильтратавыявлялисьнейтрофилы(45.3±8.73%),макрофаги (20.2±4.65%) и лимфоциты (24.5±8.53%), а также единичныеплазматическиеклетки.Значениемакрофагально-гранулоцитарногокоэффициента в первые сутки составляло 0,44. При иммуногистохимическом68исследовании лимфоциты, в основном, были представлены В-лимфоцитами(CD20+) и давали CD3-отрицательную реакцию (CD3-). Иммуногистохимическоеисследование окружающих отрезки катетеров тканей на присутствие CD34 впервые сутки характеризовалось положительной реакцией. При окраске основнымкоричневым по Шубичу в инфильтратах вокруг отрезков катетеров при осмотре20 полей зрения было выявлено 40±5,1 дегранулирующих тучных клеток,количество которых было в два раза больше, чем у интактных животныханалогичной подгруппы.
Также при окраске по Броун-Хоппс, в отличие отаналогичной подгруппы без иммуносупрессии, небольшие скопления бактерийвыявлялись уже в первые сутки, и размеры их увеличивались ко вторым суткам(рис. 24-25).На вторые сутки исследований количество нейтрофилов в клеточноминфильтрате уменьшилось с 6,2±2,1 клеток в поле зрения на первые сутки до3,8±1,5. За счет этого произошло увеличение макрофагально-гранулоцитарногокоэффициента до 0,73. Одновременно в клеточном инфильтрате отмечалосьснижение количества лимфоцитов до 14,4±3,64%.Натретьисуткиэкспериментовростскоплениймикроорганизмовпродолжался уже на фоне сформированного ограничительного вала, состоящегоиз коллагеновых волокон и фибробластов (Vimentin+), количество которыхсоставляло 28,7±11,29% от состава клеточного инфильтрата.
Содержаниенейтрофилов к третьим суткам, по сравнению с аналогичной подгруппойживотных, не получавших иммунодепрессант, резко снизилось до 21,5±5,26% отклеточногосоставаинфильтрата(p=0,045).Приэтом,макрофагально-гранулоцитарный коэффициент был равен 1,00 (рис.
23). В целом, элементыклеточногоинфильтратабылипредставлены,примерно,водинаковыхпроцентных соотношениях: макрофаги (CD 68+) – 21,5±9,5%, нейтрофилы –21,5±5,26%, фибробласты – 28,75±11,29%, а лимфоциты – 28,25±12,62%.Иммуногистохимически в инфильтрате среди лимфоцитов выявлялось небольшоеколичество Т-лимфоцитов (CD3+/-) и значительное количество B-лимфоцитов69(CD20+). При иммуногистохимическом исследовании окружающих отрезоккатетеров тканей на CD34 положительная реакция (CD34+) выявлялась к третьимсуткам.При окраске основным коричневым по Шубичу в инфильтратах вокруготрезков катетеров количество тучных клеток, дающих характерное окрашивание,несколько снижалось к третьим суткам и составляло 32±2,2 дегранулирующихтучных клеток, дающих характерное окрашивание (рис. 26-27).Количество клеток в поле зрения12*1086*Нейтрофилы4Фибробласты201231Без иммуносупрессии23ИммуносупрессияциклофосфамидомСуткиРис.23.
Изменение количества нейтрофилов и фибробластов в клеточном инфильтрате вокруготрезков катетеров с биопленками S.epidermidis 33 на фоне иммуносупрессии* Различия достоверны (p<0,05), критерий Манна-Уитни70Рис.24.воспалительнаяРис. 25. Тучные клетки (окрашены коричневыминфильтрация, слой фибрина вблизи отрезкацветом) в тканях окружающих отрезок катетера скатетерапредварительносУмереннаяпредварительновыращеннымивыращеннымиразвитиябиопленкамибиопленками после развития иммуносупрессии.
1послеиммуносупрессии.1сутки.сутки. (окраска гематоксилином и эозином, x 200)(Окраска основным коричневым по Шубичу, x400)Рис. 26. Положительная иммуногистохимическаяРис. 27. Обширные скопления микроорганизмовреакция на CD68 в макрофагах, окружающихмежду коллагеновыми волокнами вокруг отрезкаотрезок катетера с предварительно выращеннымикатетерабиопленками после развития иммуносупрессии. 3биопленками после развития иммуносупресси. 3сутки. (CD68+, x 1000)сутки. (окраска гематоксилином и эозином, x 200)спредварительновыращеннымиТолщина ограничительного вала при имплантации отрезков катетеров спредварительно выращенными на них двухсуточными биопленками на фонедействия циклофосфамида вокруг катетера по сравнению с аналогичнойподгруппой без иммуносупрессии достоверно уменьшалась (рис. 28).71Толщина ограничительного вала (мкм.)70605040стерильный катетер30катетер с биопленкой20катетер с биопленкой нафоне иммуносупрессии100123СуткиРис.
28. Изменение толщины ограничительного вала за трое суток вокруг отрезка катетера вразличных подгруппах3.2.3. Третья подгруппа: имплантация животным отрезков стерильныхкатетеров с однократным введением взвеси стафилококков в зонуимплантацииВ третьей подгруппе при однократном введении взвеси стафилококка в зонуимплантации отрезка катетера, при исследовании реакции тканей были выявленыследующие отличия от аналогичной подгруппы иммунокомпетентных животных.На первые сутки нейтрофилы составляли 26,17±6,48% от всего клеточногоинфильтрата со значением макрофагально-гранулоцитарного коэффициента 1,25.При этом, количество макрофагов и лимфоцитов было, примерно, одинаково исоставляло 32,83±7,07% и 32,67±10,03%, соответственно. На долю фибробластовприходилось 8,33±2,95% от состава инфильтрата.На вторые сутки рост скоплений микроорганизмов не замедлялся, аколичество макрофагов достоверно увеличивалось по сравнению с аналогичнойподгруппой без иммуносупрессии (p=0,02).
Развитие макрофагальной фазывоспаленияподтверждалосьувеличениеммакрафагально-гранулоцитарного72коэффициента до 1,56. В этих же условиях проявлялась тенденция к раннемунаступлению фибропластической фазы, так как количество фибробластов всоставе клеточного инфильтрата составляло - 14,4±5,67%, за счет абсолютного ихувеличения с 0,7±0,2 клеток в поле зрения на первые сутки до 2,6±1,0 на вторые.Оставшуюся часть инфильтрата представляли лимфоциты – 29,2±5,32% иединичные плазматические клетки.К третьим суткам на фоне слабого развития грануляционной ткани,состоящей из нитей фибрина и тонкостенных сосудов (CD34+), обнаруживалсявыраженный вал из фибробластов (Vimentin+) и коллагенновых волокон.Количество фибробластов в процентном соотношении возрастало и составляло28,87±6,1% от общего содержания клеток инфильтрата. Это происходило, впервую очередь, за счет уменьшения количества макрофагов, как в абсолютных,так и в относительных цифрах (17±2,93% - на третьи сутки).
В результатемакрофагально-гранулоцитарный коэффициент на третьи сутки резко уменьшалсядо 0,51. В то же время количество лимфоцитов незначительно уменьшалось исоставляло 21,38±5,83%. При иммуногистохимическом исследовании лимфоцитыв основном были представлены В-лимфоцитами (CD20+) и обладали CD3отрицательнойотмечался,какреакциейна(CD3-).поверхности,Росттакскопленийивнутрибактериальныхотрезкаклетоккатетера,чтоподтверждалось окраской по Броун-Хоппс. При окраске основным коричневымпо Шубичу в инфильтрате вокруг катетера выявлялось около 35±4 диффузнорасположенных тучных клеток, дающих характерное окрашивание (рис. 29-32).73Рис.поРис.
30. Положительная иммуногистохимическаяпериферии катетера (черно-синие участки) приреакция на CD34 в тканях окружающих отрезокимплантации отрезков катетеров с однократнымкатетеравведениемстафилококка на фоне иммуносупрессии. 3 сутки.29.Скоплениявзвесимикроорганизмовстафилококканафонеиммуносупрессии. 3 сутки. (окраска Броун-Хоппс,приоднократномвведениивзвеси(CD34+, x 1000)x 400)Рис. 31. Положительная иммуногистохимическаяРис. 32.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
