Диссертация (1140276), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Исследовать морфологию, микроциркуляцию, экспрессию VEGF в очагеповреждения,неврологическийстатус,количественныйсоставклетокиконцентрацию эритропоэтина в крови в динамике экспериментальной ишемиикоры головного мозга.2. Изучить влияние эритропоэтина на неврологический статус, морфологию,микроциркуляцию, экспрессию VEGF в очаге повреждения, количественныйсостав клеток крови в динамике экспериментальной ишемии коры головногомозга.3.Изучитьвлияниенизкоинтенсивноголазерногоизлучениянаневрологический статус, морфологию, микроциркуляцию, экспрессию VEGF вочагеповреждения,количественныйсоставклетоккровивдинамикеэкспериментальной ишемии коры головного мозга.4.
Оценить влияние комбинированного применения эритропоэтина инизкоинтенсивноголазерногоизлучениянаневрологическийстатус,морфологию, микроциркуляцию, экспрессию VEGF в очаге повреждения,количественный состав клеток крови в динамике экспериментальной ишемиикоры головного мозга.Научная новизна исследованияВпервые проведена комплексная оценка изменений неврологическогостатуса,этологическогостатуса,микроциркуляции,морфологииочагаповреждения с экспрессией VEGF и гематологических показателей приэкспериментальнойишемиикорыголовногомозга,индуцированнойдиатермокоагуляцией пиальных сосудов. Продемонстрировано, что в динамикеэкспериментальной ишемии коры головного мозга фиксируется очаговыйневрологический дефицит, прогрессирующий по мере снижения в кровиколичества эритроцитов, концентрации гемоглобина, повышения количества8лейкоцитов,нейтрофилов,угнетаетсяориентировочно-исследовательскаяактивность животных.
В очаге повреждения прогрессивно снижается количествоинтактных нейронов, мелких сосудов, увеличивается количество нейронов схроматолизом, клеток-теней, площадь инфаркта, увеличение количества мелкихсосудов ассоциировано с повышением экспрессии VEGF.Впервые показано, что комбинированное применение эритропоэтина илазерного излучения при экспериментальной ишемии коры головного мозгаприводит в динамике наблюдения к восстановлению неврологического иэтологического статуса за счет улучшения микроциркуляции, повышенияэкспрессии VEGF, количества мелких кровеносных сосудов в очаге повреждения,восстановления количества интактных нейронов и сокращения площадиинфаркта, уменьшения количества нейронов с хроматолизом, клеток-теней,снижения количества лейкоцитов и увеличения количества эритроцитов,концентрации гемоглобина в крови.Особенностью нейропротекторного действия эритропоэтина выступаетувеличение количества эритроцитов, концентрации гемоглобина в крови, алазерного излучения – повышение экспрессии VEGF в очаге повреждения.Нейропротекторныйэффектэритропоэтинаилазерногоизлученияприэкспериментальной ишемии коры головного мозга максимально выражен прикомбинированном применении.
По результатам исследования получен патент«Способ лечения ишемии головного мозга в эксперименте» (Пат. РФ наизобретение № 2495688 от 20.10.2013 г.).Теоретическая и практическая значимость исследованияВ ходе проведенного исследования в экспериментальных условияхуточнены закономерности изменений неврологического и этологического статусапри экспериментальной ишемии коры головного мозга, индуцированнойдиатермокоагуляцией пиальных сосудов: роль изменений микроциркуляции,морфологии очага повреждения и экспрессии в нем VEGF, количественного9состава лейкоцитов и эритроцитарных индексов.
Установлена нейропротекторнаяроль комбинированного применения ЭПО и ЛИ при экспериментальной ишемиикоры головного мозга, опосредованная восстановлением микроциркуляции,повышением экспрессии VEGF, количества мелких кровеносных сосудов в очагеповреждения, увеличением количества интактных нейронов и уменьшениемплощади инфаркта, количества нейронов с хроматолизом, клеток-теней,снижением количества лейкоцитов и увеличением количества эритроцитов,концентрации гемоглобина в крови.Полученныерезультатырасширяютсовременныепредставленияомеханизме изменения гомеостаза при ишемических поражениях ЦНС, уточняютмеханизм и особенности нейропротекторного действия ЭПО и ЛИ, являютсяпредпосылкой для проведения дальнейших исследований по эффективностиприменения ЭПО и ЛИ при цереброваскулярной патологии.Основные положения, выносимые на защиту1.
В динамике экспериментальной ишемии коры головного мозганаблюдаютсяморфологические,клинические,инструментальныепризнакифокальной ишемии, повышение экспрессии в очаге VEGF, ассоциированного сколичеством мелких сосудов, увеличение количества нейтрофилов, снижениеколичества эритроцитов, концентрации гемоглобина в крови, ассоциированных споказателями неврологического и этологического статуса.2.
Применение эритропоэтина при экспериментальной ишемии корыголовного мозга восстанавливает неврологический и этологический статус,микроциркуляцию в очаге на 14 сутки, снижает площадь инфаркта, количествоповрежденных нейронов без изменения экспрессии VEGF во все сроки;увеличивает в крови количество эритроцитов, концентрацию гемоглобина,снижает количество лейкоцитов.3.
Лазерная терапия при экспериментальной ишемии коры головного мозгаприводит к более позднему по сравнению с эритропоэтином восстановлению10неврологического и этологического статуса, количества лейкоцитов в крови,морфологии очага повреждения, но повышению в нем во все сроки наблюденияэкспрессии VEGF, ассоциированного с количеством кровеносных сосудов.4. Комбинированное применение эритропоэтина и лазерного излучения приэкспериментальной ишемии коры головного мозга приводит к восстановлениюневрологического и этологического статуса, микроциркуляции в очаге с 14 суток,к более раннему по сравнению с монотерапией эритропоэтином или лазернымизлучением восстановлению количества эритроцитов, лейкоцитов в крови,морфологии очага повреждения, увеличению количества глиоцитов и экспрессииVEGF.Методология и методы исследованияМетодология диссертационной работы была спланирована в соответствии сцельюизадачамиисследования.
Исследованиевыполненонакафедрепатологической физиологии, на базе Научно-исследовательского институтаиммунологии Федерального государственного бюджетного образовательногоучреждениямедицинскийвысшегообразованияуниверситет»«Южно-УральскийМинистерствагосударственныйздравоохраненияРоссийскойФедерации и в Государственном бюджетном учреждении здравоохранения«Многопрофильный центр лазерной медицины» Министерства здравоохраненияЧелябинской области.Организация исследования одобрена этическим комитетом ФГБОУ ВОЮУГМУ Минздрава России (протокол № 4 от 21.04.2017).
Экспериментальныеисследования выполнены на 200 белых нелинейных крысах массой 220±20 г всоответствии с Европейской конвенцией о защите позвоночных животных,используемых для экспериментов или в иных научных целях (ETS № 123 от18.03.1986, Страсбург), Рекомендациями Европейской Комиссии 2007/526/EC от18 июня 2007 года, Директивой 2010/63/EU Европейского парламента и СоветаЕвропейского Союза от 22 сентября 2010 года по охране животных,11используемых в научных целях.Ишемию коры головного мозга (ИКГМ) у крыс моделировали под общимнаркозом («Золетил», МНН: тилетамина гидрохлорид, золазепама гидрохлорид,Франция) по методике, описанной Chen S.
T., путем диатермокоагуляциипиальных сосудов коры головного мозга по периметру трепанационногоотверстия в области задних отделов левой лобной доли и передних отделов левойтеменной доли головного мозга (прецентральные и постцентральные извилинылевогополушарияголовногомозга)[127].ИКГМверифицировалиморфологическими методами. Животные были случайным образом разделены на5 групп: группа 1 (n=40) – ложнооперированные; группа 2 (n=40) – животные сИКГМ; группа 3 (n=40) – животные с ИКГМ, которым через 3, 24, 48 часов послеиндукции ИКГМ внутрибрюшинно вводили ЭПО в составе препарата «Эпокрин»(МНН: эпоэтин альфа, ФГУП «Гос.НИИ ОЧБ» ФМБА, Россия) в разовой дозе5 000 МЕ/кг; группа 4 (n=40) – животные, которым через 2 часа после индукцииИКГМ однократно воздействовали на область ишемического очага лазернымизлучением с длиной волны 970 нм аппаратом «ИРЭ-Полюс» (ООО НТО «ИРЭПолюс», Россия); группа 5 (n=40) – животные с ИКГМ, которым через 2 часапосле индукции ИКГМ проводили дистанционное накожное облучение лазером,как в группе 4, а через 3, 24 и 48 часов вводили рекомбинантный ЭПО, как вгруппе 3.
Исследования проводили на 3, 7, 14, 30 сутки после ИКГМ.Забор крови осуществляли под общим наркозом («Золетил», МНН:тилетамина гидрохлорид, золазепама гидрохлорид, Франция) после вскрытиягрудной клетки пункцией сердца в области левого желудочка. Исследованиеморфологии очага ишемии проводили через 3, 7, 14, 30 суток послемоделирования ишемии. Для достижения цели и решения поставленных задачисследованияиспользованыследующиеметоды:экспериментальногомоделирования, оценки неврологического статуса по шкале Garcia J. H.,этологическогостатусавактографе«открытоеполе»,допплеровскойфлуориметрии для оценки микроциркуляции в очаге ишемии, гематологические,иммуноферментного анализа, морфологические и иммуногистохимические,12статистические.Степень достоверности и апробация результатовДостоверность результатов работы, правомочность основных положений ивыводов основаны на достаточном числе наблюдений экспериментальногофрагмента работы, полноте и широте литературно-библиографической справки,использовании современных методов статистической обработки материаловисследования с применением пакета прикладных программ IBM SPSS Statistics19.Основные положения диссертации представлены на научно-практическихконференцияхпатологоанатомовЮжногоУрала«Актуальныевопросыпатологоанатомической практики» (Челябинск, 2014, 2015), на 10-й конференциихирургов Челябинской области «Актуальные вопросы хирургии» (Челябинск,2014), на научно-практической конференции «Лазерные технологии в медицине»(Москва, 2014), на II Международной научно-практической конференции понейрореабилитации в нейрохирургии (Казань, 2014), на ХIV научно-практическойконференции «Поленовские чтения» (Санкт-Петербург, 2015), VII Всероссийскомсъезде нейрохирургов (Казань, 2015), на Всероссийской научно-практическойконференции «Актуальные вопросы неврологии» (Челябинск, 2015), VIIIМеждународной (XVитоговой) научно-практической конференции молодыхученых ЮУГМУ (Челябинск, 2018).Личный вклад автора в проведенное исследованиеЛичныйвкладавторасостоитвнепосредственномучастиивдиссертационном исследовании на всех его этапах.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
