Диссертация (1140088), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Каждаягруппа состояла из 15 пациентов.В качестве основного метода лечения терапии во всех группах больныхприменялась фототерапия. Для контроля иммунологических показателей быланабрана группа здоровых доноров состояла из 15 человек, не страдающихпсориазом и не имеющих сопутствующую патологию.В соответствии с поставленной целью исследование было проведено вкачестве открытого рандомизированного контролируемого.Применение данного метода (в нашем исследовании: рандомизацияпростая, с использованием таблицы случайных цифр) позволило провестиравномерное распределение больных по возрасту, длительности и тяжестизаболевания.Возраст больных от 18 до 68 лет (рисунок 2). Большинство больных,при распределении по возрастным группам, находилось в активномтрудоспособном возрасте 18-40 лет (60%).РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ПАЦИЕНТОВ ПО ВОЗРАСТНЫМГРУППАМ.КОЛИЧЕСТВО БОЛЬНЫХ (%)51-60 лет20%41-50 лет12%61-70 лет8%18-30 лет45%31-40 лет15%Рисунок 2.
Распределение пациентов по возрастным группам.49Давностью заболевания у больных варьировала от 1 года до 48 лет. Данныео продолжительности заболевания представлены на рисунке 3.РАСПРЕДЕЛЕНИЕ ПО ДЛИТЕЛЬНОСТИ АНАМНЕЗА.≤45 лет8%>45 лет5%≤30 лет15%≤5 лет35%≤15 лет37%Рисунок 3. Распределение пациентов по длительности анамнеза.Локальный статус кожного процесса соответствовал клинической формепсориаза, вульгарный псориаз, или разновидности вульгарного псориаза,экссудативному псориазу.
Кожный процесс носил распространенный характер(>20% поверхности тела) и был представлен папулами и бляшками различныхразмеров, с выраженной инфильтрацией, обильным шелушением по всейповерхности элементов. Субъективные ощущения в виде зуда отмечали 76%пациентов.Факторами, вызывающими обострение, были: нервный стресс илиперенапряжение - у 45% больных, обострение фокальной инфекции- у 10%,употребление алкоголя у 20% больных, сезонный фактор имел место у 15%больных, обострение без видимой причины отмечали 12,5% и обострение нафоне травматизации отмечало 5% больных (рисунок 4).50Рисунок 4.
Распределение пациентов по триггерным факторам.Сопутствующую патологию имели все больные(рисунок 5).Рисунок 5. Распределение больных по сопутствующей патологии.Из рисунка следует, что среди больных псориазом практически уполовины больных наблюдались заболевания сердечно-сосудистой системы ипищеварительного тракта (% и % соответственно). Так же обращало вниманиевысокийпроцентпациентовсметаболическимсиндромом(30%).51Анамнестически коморбидные состояния неблагоприятно влияли на течениепсориаза,что проявлялось частыми рецидивами и кратковременнойремиссией.В большинстве случаев течение псориаза носило хроническийрецидивирующий характер с обострениями преимущественно в осеннезимний период, количество обострений варьировало от одного до 3-4 в год.Учитывая длительный анамнез у большинства больных все пациенты донашего исследования получали различные методы лечения (рисунок 6).Рисунок 6. Предшествующая терапия.Все пациенты использовали глюкокортикостероидные мази, в том числеи комбинированные препараты с салициловой кислотой.
Также пациентыбыли хорошо знакомы с традиционными средствами мазевой терапии, такимикак нафталановая, ихтиоловая, дегтярная мази. Так как в группы исследованиябыли включены пациенты с распространенными формами, часть из которыххарактеризовалась частыми рецидивами и упорным течением заболевания, тозначительный процент больных уже имел опыт лечения такими методами какцитостатики,иммунносупресооры,кортикостероиды.Многиебольныесистемныеприменялиретиноиды,системныефизиотерапевтическиеметоды. Из фототерапии наибольшее количество больных уже применялоПУВА-терапию с хорошим эффектом522.2 Методы исследованияМетоды обследования соответствовали стандартам при данной патологии ивключающие осмотр с оценкой дерматологического статуса c использованиемобщепринятогоиндексаPASI(Psoriaticareaandseverityindex)идерматологического индекса качества жизни - ДИКЖ. Согласно с задачамиисследования до и после лечения проводилась оценка параметров клеточного игуморального иммунитета, а также показателей цитокинового статуса сывороткикрови.2.2.1 Дерматологические индексыДерматологический индекс качества жизни (ДИКЖ) рассчитывается путемсуммирования баллов по каждому вопросу.
Результат может варьироваться от 0до 30 баллов. Максимальное значение индекса – 30. И чем ближе показатель кэтой отметке — тем более негативно заболевание сказывается на качестве жизнипациента (Таблица 1).В нашем исследовании ДИКЖ оценивался у всех больных псориазом.Таблица 1. Анкета для пациента для определения ДИКЖВопросы1.
Испытывали ли Вы зуд, жжение илиболезненность на прошлой неделе?2. Испытывали ли Вы ощущениенеловкости или смущение в связи ссостоянием Вашей кожи?3. Как сильно Ваши проблемы с кожеймешали Вам заниматься уборкой домаили покупками?4. Насколько сильно состояние Вашейкожи влияло на выбор Вашегогардероба на прошлой неделе?ОченьсильноДостаточносильноНезначительным образомНет535. Как сильно влияло состояние Вашейкожи на Ваш досуг и социальнуюактивность на прошлой неделе?6. На прошлой недел состояние ВашейкожимешалоВам заниматьсяспортом?7. Пропускали ли Вы учебу,отсуствовали на работе из-за состоянияВашей кожи?даНетЕсли Вы ответили «нет», то насколькосильно Вас беспокоило состояниеВашей кожи, когда вы находились наработе или учебе?8.
Влияло ли состояние Вашей кожи наВаши отношения с родственниками,партнерами, друзьями на прошлойнеделе?9. Насколько сильно Ваши проблемы скожей влияли на Вашу сексуальнуюжизнь?10. На прошло неделе насколькосильно лечение заболевания кожипричиняло Вам неудобства, отнималовремя, создавало проблемы?2.2.2. Методы лабораторной диагностикиИммунологический метод диагностикиУ доноров и больных до и после лечения производился забор венознойкрови с целью оценки иммунного статуса: субпопуляционного составалимфоцитов и цитокинового профиля.Определение субпопуляционного состава лимфоцитов:Анализ субпопуляционного состава лимфоцитов проводили с помощьюмоноклональных антител (МАТ) методом проточной цитометрии. При этомопределяли следующие субпопуляции лимфоцитов: Т-лимфоциты (CD3+,CD3+CD4+ и CD3+CD8+), активированные Т-лимфоциты (CD3+HLA-DR+ и54CD3+CD25+),В-лимфоциты(CD19+),атакжеTh17-лимфоциты(CD3+CD4+CD161+).Определение В- и Т-лимфоцитов (в т.ч.
активированных) проводили спомощью МАТ, меченныхдвумя флуоресцентными красителями -флюоресцеина изотиоцианатом (FITC) и фикоэритрином (PE) – т.н. «двойнаяметка» (пробирки №№1-6). Определение Th17-лимфоцитов проводили спомощью МАТ, меченных тремя флуоресцентными красителями - FITC, PE ификоэритрином-Cy5 (РС5) – т.н. «тройная метка» (пробирки №№7-8).Подготовка цитометрических проб для анализа проводилась одинаково, а саманализ, в связи с использованием разного количества флуоресцентныхкрасителей, различался.Подготовка цитометрических проб: цельную гепаринизированнуюкровь раскапывали в 7 цитометрических пробирок, в которые затем добавлялиМАТ с различными флуоресцентными красителями (табл. 2).Пробирки аккуратно встряхивали на вортексе, инкубировали при +4С втечение 20 мин, после чего для разрушения эритроцитов добавлялилизирующий раствор и инкубировали еще 10 мин при комнатной температуре.После окончания инкубации пробы отмывали 1 раз фосфатно-солевымбуфером, анализировали на проточном цитометре FacsCalibur (BectonDickenson, США).Таблица 2.
Схема раскапывания МАТ в цитометрические пробирки.Флуоресцентный краситель к соответствующему CD№ пробиркимаркеруFITCPEPC51*Мышиный IgG1Мышиный IgG1-2CD3CD19-3CD3CD4-4CD3CD8-555CD3HLA-DR-6CD3CD25-7**CD4Мышиный IgG1CD38CD4CD161CD3* - пробирка №1 (т.н. изотипический контроль 1) являетсяконтрольной и определяет степень неспецифического связыванияFITC- и PE-меченных МАТ.** - пробирка №7 (т.н. изотипический контроль 2) являетсяконтрольнойдляпробирки№8иопределяетстепеньнеспецифического связывания PE-меченных МАТ.Анализ цитометрических проб с «двойной меткой»:ЗаписьсигналаоткрасителяFITCпроизводилинаканалефлуоресценции FL-1; от красителя PE - на канале флуоресценции FL-2.Записывали не менее 10000 событий на пробу.Создавали точечный график в координатах FSC против SSC иустанавливали регион 1 (R1), охватывающий популяцию лимфоцитов, какпоказано на рис.
1А. Затем создавали точечный график в координатахкраситель FITC против красителя PE, все события в который попадают из R1.На этом графике устанавливали квадрантный маркер для выделенияпозитивных и негативных событий по каналам флуоресценции.Усиление и цветовая компенсация сигналов в каналах FITC (FL-1) и PЕ(FL-2) должно быть таким, чтобы в изотипическом контроле 1 (пробирка №1),популяция лимфоцитов по обоим каналам флуоресценции находилась впределах 1 -й декады логарифмических шкал в левом нижнем квадранте (рис.1Б) и составляла 98-100%.При анализе пробирки №2 процент событий в правом нижнем квадрантебудетравенпроцентномусодержаниюCD3+-Т-лимфоцитовсредилимфоцитов; процент событий в левом верхнем квадранте будет равенпроцентному содержанию CD19+-лимфоцитов среди лимфоцитов (рис.
7В).56При анализе пробирки №3 процент событий в правом верхнем квадрантебудет равен процентному содержанию CD3+CD4+-Т-лимфоцитов средилимфоцитов (рис. 7Г).При анализе пробирки №4 процент событий в правом верхнем квадрантебудет равен процентному содержанию CD3+CD8+-Т-лимфоцитов средилимфоцитов (рис. 7Д).При анализе пробирки №5 процент событий в правом верхнем квадрантебудет равен процентному содержанию CD3+HLA-DR+-лимфоцитов средилимфоцитов (рис. 7Е).При анализе пробирки №6 процент событий в правом верхнем квадрантебудет равен процентному содержанию CD3+CD25+-лимфоцитов средилимфоцитов (рис. 1Ж).Анализ цитометрических проб с «тройной меткой»:Запись сигнала от CD4-FITC производили на канале флуоресценции FL1; от красителя PE - на канале флуоресценции FL-2; от CD3-PC5 - на каналефлуоресценции FL-3. Записывали не менее 10000 событий на пробу.Создавали точечный график в координатах FSC против SSC иустанавливали регион 1 (R1), охватывающий популяцию лимфоцитов, какпоказано на рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
