Диссертация (1140088), страница 10
Текст из файла (страница 10)
2А. Затем создавали точечный график в координатах CD3PC5 против CD4-FITC, как показано на рис. 2Б, все события в которыйпопадают из R1. На этом графике устанавливали регион 2 (R2) для выделениясобытий, позитивных по CD3 и CD4. Эти события являются CD3+CD4+-Тлимфоцитами.57АR1Г7,7100,0mIgG1 FITCД63,0CD3 FITCЕCD3 FITC2,9CD3 FITCЖ14,2CD25 PECD8 PEHLA-DR PE22,738,8CD4 PEВCD19 PEmIgG1 PEБR1CD3 FITCCD3 FITCРисунок 7.
Принцип анализа цитометрических проб с «двойной меткой».Примечание: Цифры в квадрантах означают процент субпопуляциилимфоцитов в данном квадранте от общего числа лимфоцитов.После этого создавали точечный график CD4-FITC против CD161-PE,как показано на рис. 2В и 2Г, все события в который попадают из R2. Этисобытия являются CD3+CD4+CD161+-лимфоцитами (Th17-лимфоцитами).Устанавливают квадрантный маркер как показано на рис.
8В и 8Г. Приэтом процент событий в правом верхнем квадранте будет равен процентномусодержаниюCD3+CD4+CD161+-клетоксредиCD3+CD4+-Т-лимфоцитов.Усиление и цветовая компенсация сигналов в канале PC5 (FL-3) должно бытьтаким, чтобы в изотипическом контроле 2 (пробирка №7), популяция Th17лимфоцитов по каналу PC5 находилась в пределах 1 -й декадылогарифмической шкалы в левом нижнем квадранте (рис. 8В). Положениегоризонтальной черты маркера должно быть таким, чтобы процент событий в58правом верхнем квадранте (CD161+-события) в изотипическом контроле 2(пробирка №7) не превышало 0,5% (рис. 8В).АБR2R2R1R1ВГ16,6%CD161 PE0,4%Рисунок 8.
Принцип анализа цитометрических проб с «тройной меткой».Примечание: Цифры в квадрантах означают процент CD3+CD4+CD161+клеток среди CD3+CD4+-Т-лимфоцитов.Определение цитокинового профиля:В сыворотке крови определяли концентрацию цитокинов IFNα, IFNγ,TNFα, IL-17 и IL-22. Определение проводили методом твердофазногоиммуноферментного анализа (ИФА) с помощью коммерческих наборов фирмООО «Цитокин», Россия (IFNα, IFNγ, IL-1β, IL-6, IL-8, TNFα) и eBioscience,США (IL-17, IL-22) в соответствии с прилагающимися к ним протоколами.Общий принцип постановки ИФА для определения концентрации указанныхцитокинов представлен на рис.9.59Внесение сыворотки в лунки ИФА-планшета с иммобилизированными первымиантителами к определяемому цитокинуИнкубация и отмывкаВнесение в лунки вторых антител к определяемому цитокинуИнкубация и отмывкаВнесение в лунки конъюгата с ферментом пероксидазойИнкубация и отмывкаВнесение в лунки субстратной смесиВнесение в лунки стоп-реагента для остановки реакцииИзмерение оптической плотности лунок на спектрофотометреРисунок 9.
Блок-схема постановки ИФА.Концентрация ИЛ-1б (пг/мл)500400300200100000,511,52Оптическая плотностьРисунок 10. Калибровочный график ИФА для определенияконцентрации ИЛ-1β в сыворотке крови60Затем в линейных координатах строили график зависимости оптическойплотности (ед.
опт. плотн.) от концентрации определяемого цитокина вкалибровочных пробах (пг/мл). Калибровочные пробы прилагались к наборами содержали определяемый цитокин в известной концентрации. На основаниикалибровочного графика определяли концентрацию цитокина в исследуемыхсыворотках. Калибровочный график на примере ИЛ-1β представлен на рис. 10.2.2.3 Техническая характеристика методов лечения.Лечение осуществлялось на аппарате Waldman UV-7001 K («Waldman»,Германия) (рисунок 11). Аппарат оснащен 40 люминесцентными лампами: 20ламп F85/100W-TL01 и 20 ламп F85/100W-PUVA, излучающих узкополосныесредневолновыелучисдлинойволны311нмиширокополосныедлинноволновые лучи с длинной волны в диапазоне 320-400 нм.
Данная кабинаобеспечивает равномерное распределение ультрафиолетовых лучей по всейРисунок 11. Кабина для ультрафиолетового облучения61поверхности туловища. В кабину вмонтированы специальные датчики, которыепозволяют контролировать и учитывать интенсивность ультрафиолетовогоизлучения. А так же лечение проводилось на узкополосной эксимерной системеquantel derma 308 nm («Alma Lasers GmbH», Германия) (рисунок 12).
Даннаяметодика фототерапии, позволяет облучать, высоконаправленным светом длинойволны 308 нм., только на пораженные участки кожного покрова.Таким образом, воздействие осуществляется не на все тело и здоровая кожане подвергается УФ излучению, что в сочетании с вышеуказанными методикамипозволяетсократитьколичествопроцедуроблученияисуммарнуюкумулятивную доза УФ излучения.Рисунок 12.
Эксимерная лампа.2.3 Статистическая обработка результатов.Статистическую обработку результатов производили с помощью программSPSS 11.5 для Windows и Microsoft Excel 2003. Кроме пунктов, оговоренных62отдельно, данные представляли в виде медиана [10-й — 90-й процентиль], чтократко обозначали как Me[10p-90p]. Если в группе было менее 10 измерений,то вместо 10-го и 90-го процентилей указывали минимум и максимум группы.Группы сравнивали при помощи непараметрического U-теста Манна—Уитни.63Глава 3. Результаты собственного исследования3.1. Результаты лечения.Для лечения псориаза наиболее эффективны ПУВА-терапия спероральнымприменениемфотосенсибилизатораиузкополоснаясредневолновая УФБ–терапия с пиком эмиссии на длине волны 311 нм.
Но, ксожалению, при обоих способах лечения требуется не менее чем 20 лечебныхсеансов ультрафиолетового облучения кожи, причем облучению подвергаетсяне только пораженная высыпаниями кожа, а весь кожный покров, включаяздоровые непораженные участки. Кумулятивные УФ-дозы и потенциальныйриск возникновения рака непораженной кожи при ПУВА-терапии и УФБ-311нм терапии приводит к фототерапевтическим протоколам согласно которымиспользуется либо ПУВА-терапии или УФБ-311 нм терапии, а не комбинацияобоих.
Для сокращения количества процедур и соответственно суммарнуюдозу облучения, удлинить сроки клинической ремиссии, сократить побочныеэффекты, а также уменьшить стоимость лечения, мы решили разработатькомбинированный метод ПУВА-терапии с узкополосной средневолновойУФБ-эксимерная лампа 308 и УФБ-311 нм терапии плюс узкополосная УФБэксимерная лампа 308 нм. Для разработки применения сочетанного методафототерапии, все больные, находившиеся под нашим наблюдением, взависимости от получаемого лечения, были разделены на четыре группы,сопоставимые по основным параметрам. Каждая группа состояла из 15человек.
Первые две группы получали фототерапию только однимфизиотерапевтическим методом. Третья и четвертая группа получалисочетанное лечение двумя методами фототерапии.Итак, первая группа получал фототерапию в виде фотохимиотерапии(ПУВА-терапии)сфотосенсибилизатора.системнымВторая(пероральным)группаполучалаприменениемузкополоснуюсредневолновую УФБ–терапию с пиком эмиссии на длине волны 311 нм.Третья группа пациентов получала комбинированную фототерапию в видесочетания методик – ПУВА-терапия и узкополосная УФБ-эксимерной лампы64(308 нм).
В начале пациент получал системное ультафиолотовое облучение–ПУВА-терапия, первые 2-3 недели в стационарном отделении, после того каккожный процесс регрессировал и высыпания занимали менее 10% кожногопокрова, больной амбулаторно получал сеансы УФБ-эксимерной лампы 308нм до полного регресса морфологических элементов.4 группа получала комбинированную фото-терапевтическую методику в видесочетания узкополосной средневолновой УФБ-311 нм терапию плюсузкополосная УФБ-эксимерная лампа 308 нм. Как и в третьей группе пациентполучал системное ультафиолотовое облучение методом узкополоснойсредневолновой УФБ-311 нм терапии, первые 2-3 недели в стационарномотделении, после того как кожный процесс регрессировал и высыпаниязанимали менее 10% кожного покрова, больной амбулаторно получал сеансыУФБ-эксимерной лампы 308 нм до полного регресса морфологическихэлементов.Для контроля иммунологических показателей была набрана группа здоровыхдоноров состояла из 15 человек, не страдающих псориазом и не имеющихсопутствующую патологию.Первая группа больных получала лечение ПУВА-терапией по методике 4-хразового облучения в неделю.
За два часа до сеанса фототерапии больнойпринимал фотосенсебилизатор пувален, доза препарата рассчитываласьисходя из веса больного. Так, при массе тела до 50 кг пациенту назначали 2таблетки, 50-60 кг - 2,5; 60-75 кг - 3, 75-90 кг - 3,5 и свыше 90 кг - 4. Начальныедозы системного облучения подбирались индивидуально в зависимости фототипа кожи без определения минимальной эритемной дозы (МЭД) иминимальная фототоксической дозы (МФД). Стартовая доза УФА излучения,при лечение методом ПУВА, без определения МФД подбиралась стандартнов зависимости от фототипа кожи. При I типе кожи с дозы УФА 0,5 Дж/кв.см,II типе—1 Дж/кв.см, III типе—1,5 Дж/кв.см, IV типе —2 Дж/кв.см, V типе—2,5 Дж/кв.см к VI типе — 3 Дж/кв.см.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
