Диссертация (1140070), страница 13
Текст из файла (страница 13)
Вцентре мышечного волокна определяется округлая зона интенсивной флуоресценции маркера НММ «центральная» зона центрального стержня. Наблюдается преимущественная локализация маркераMTHSP70 в «промежуточной» зоне центрального стержня, а также в единичных митохондриях,расположенных под сарколеммой и между миофибриллами.80А.Б.Рис.21. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с врождённой миопатиейцентрального стержня. Возраст 9 лет.
Иммуногистохимическое распределение флуоресцентныхмаркеров наружной мембраны митохондрии (зеленый) и MTHSP70 (красный). Увеличениех1000. А. В центре мышечного волокна обнаружена округлая зона интенсивной флуоресценциимаркера НММ - «центральная» зона центрального стержня (белая стрелка). Локализациямаркера MTHSP70 в «промежуточной» зоне, окружающей зону «центрального стержня».
Б.Этот же участок мышечной ткани, показана только локализация маркера MTHSP70 (красный).813.2.1.2. Многостержневая миопатияВ большей части мышечных волокон у больных с многостержневоймиопатией на фоне равномерного диффузного свечения флуоресцентного маркеранаружной мембраны митохондрии (НММ), наблюдались очаги значительногоснижения (иногда отсутствия) свечения указанного маркера. Подобные очагиотличались разнообразием размеров и располагались в различных зонахмышечного волокна («феномен множественных стержней»).
У части больныхбыло обнаружено повышение флуоресценции (1-2 балла) маркера НММ всубсарколеммальных участках мышечных волокон, и, в меньшей степени, между миофибриллами, однако, количество мышечных волокон с подобнымископлениями не превышало 35% (Рис.22).Рис.22.Скелетнаямногостержневойпоперечнополосатаямиопатией.Возрастмышечная8лет.тканьпациентаИммуногистохимическоесврождённойраспределениефлуоресцентного маркера наружной мембраны митохондрии (зеленый). Увеличение х400.Определяются локусы отсутствия флуоресценции указанного маркера в мышечных волокнах(белые стрелки).
Умеренно выраженные субсарколеммальные скопления маркера НММ(желтая стрелка).82Флуоресценция маркеров митохондриальных комплексов IV и V в целомсоответствовала распределению флуоресцентного маркера НММ. Однако, у 2 из 5исследованных больных многостержневой миопатией в части мышечных волоконфлуоресценция митохондриального комплекса IV была умеренно снижена (Рис.23).А.Б.Рис.23. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с врождённой многостержневоймиопатией.Возраст8лет.Увеличениех400.А.Иммуногистохимическоераспределениефлуоресцентного маркера митохондриального комплекса IV (красный).
Б. Иммуногистохимическоераспределение флуоресцентного маркера митохондриального комплекса V (синий). На рисунках А и Бопределяются локусы отсутствия флуоресценции соответствующих маркеров в мышечных волокнах(белые стрелки). Определяются умеренно выраженные субсарколеммальные скопления указанныхмаркеров (желтые стрелки). Распределение маркеров митохондриальных комплексов IV и Vсоответствует маркеру НММ (см. рис.22). В части волокон наблюдается умеренное снижениефлуоресценции маркера митохондриального комплекса IV (голубая стрелка).83В биоптатах мышц больных с многостержневой миопатией был обнаруженвыраженный феномен колокализации интенсивной флуоресценции маркера HIF1α (2-3 балла) с обнаруженными субсарколеммальными и межфибриллярнымископлениями маркера НММ (Рис. 24).
Причем, свечение маркера HIF-1αнаблюдалось также в прилежащей к митохондриальным скоплениями зонемышечных волокон, но было менее интенсивным.А.Б.В.Рис.24. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с врождённой многостержневоймиопатией. Возраст 3 года. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеров НММ(зеленый) и HIF-1α (красный). Совпадение локализаций указанных маркеров – желтый цвет.Проходящий свет (слабая диффузная флуоресценция указанных маркеров удалена, показанораспределение максимумов флуоресценции). Увеличение х400. А. Определяются множественные84локусы отсутствия флуоресценции маркера НММ в мышечных волокнах (белые стрелки) и умеренновыраженные субсарколеммальные скопления маркера НММ (желтая стрелка).
Б. Определяются локусыотсутствия флуоресценции маркера HIF-1α в мышечных волокнах (белые стрелки) и умеренновыраженные субсарколеммальные скопления маркера HIF-1α (желтая стрелка). В. Наблюдаетсясовпадение локализаций указанных маркеров в субсарколеммальных зонах мышечных волокон (желтаястрелка); отсутствие флуоресценции указанных маркеров в зоне стержня (белая стрелка). Участкитканевой гипоксии (красный цвет).Выраженность флуоресценции маркера MTHSP70 в скелетной мышечнойткани больных многостержневой миопатией была значительно ниже (0-1 балл),чем при миопатии «центрального стержня».
Слабое свечение данного маркераотмечалось в единичных митохондриях, расположенных межмиофибриллярно ипод сарколеммой мышечного волокна (Рис. 25). Тем не менее, в мышечныхволокнах больных со сниженной флуоресценцией митохондриального комплексаIV, отмечалось повышение экспрессии маркера MTHSP70 до 2-3 баллов (Рис. 26),что, по всей вероятности, имеет компенсаторный характер [Xu et al., 2009; Tawfiket al., 2012].Важно подчеркнуть, что флуоресценция трех митохондриальных маркеров,а также маркеров обоих регуляторных белков - HIF-1α и MTHSP70 (Рис.
22-25,27) – отсутствовала в зонах множественных стержней, что подтверждает данныеоб ультраструктурной дезорганизации мышечного волокна в этих зонах [Jungbluthet al., 2007; Шаталов, 2013].Рис.25. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с врождённой многостержневоймиопатией. Возраст 1,5 года. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеровнаружной мембраны митохондрии (зеленый) и MTHSP70 (красный).
Увеличение х1000. Слабая85флуоресценциямаркераMTHSP70определяетсявединичныхмежмиофибриллярныхисубсарколеммальных митохондриях. Множественные локусы отсутствия флуоресценции маркера НММв мышечных волокнах (белые стрелки).Рис.26. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с врождённой многостержневоймиопатией, в мышечной ткани которого было обнаружено снижение флуоресценции маркерамитохондриального комплекса IV. Возраст 8 лет.
Увеличение х1000. Иммуногистохимическоераспределение флуоресцентного маркера MTHSP70 (красный). Наблюдается выраженное свечениемаркераMTHSP70,спреимущественнойлокализациейвединичныхмежмиофибриллярныхмитохондриях.Рис.27. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с врождённой многостержневоймиопатией,втканимитохондриальногокоторогокомплексанеIV.былоВозрастобнаружено3года.сниженияфлуоресценцииИммуногистохимическоемаркерараспределениефлуоресцентных маркеров наружной мембраны митохондрии (зеленый) и MTHSP70 (красный).Увеличение х1000.
Флуоресценция MTHSP70 практически не определяется. Определяются локусыотсутствия флуоресценции маркера НММ в мышечных волокнах (белые стрелки).863.2.1.3. Немалиновая миопатияПриисследованиииммуногистохимическогораспределенияфлуоресцентного маркера НММ в скелетной мышечной ткани больных снемалиновой миопатией было обнаружено равномерное диффузное свечениемышечного волокна. На фоне этого свечения не более чем в 10% мышечныхволокон отмечались участки более интенсивной флюоресценции (1-2 балла).расположенные как субсарколеммально, так и межфибриллярно, что позволяетсделать вывод о наличии митохондриальных скоплений в указанных зонах (Рис.28).Рис.28. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с врождённой немалиновоймиопатией.
Возраст 4 года. Иммуногистохимическое распределение флуоресцентного маркеранаружной мембраны митохондрии (зеленый). Увеличение х400. Определяются умеренно выраженныескопления маркера НММ в субсарколеммальных зонах мышечных волокон (белые стрелки).Иммуногистохимическое распределение и интенсивность флуоресценциимаркеров митохондриальных комплексов IV и V соответствовали даннымпоказателям маркера НММ (Рис. 29) У 3 из 6 пациентов наблюдалось умеренноеснижение свечения маркера митохондриального комплекса IV.87А.Б.Рис.29. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с врождённой немалиновоймиопатией. Возраст 4 года.
Иммуногистохимическое распределение флуоресцентных маркеровмитохондриальных комплексов IV (красный, рис.А) и V (синий, рис.Б). Увеличение х400. Определяютсяумеренно выраженные скопления указанных маркеров в субсарколеммальных зонах мышечных волокон(белые стрелки), что соответствует распределению маркера НММ (рис.28). В части мышечных волоконотмечается умеренное снижение флуоресценции митохондриального комплекса IV (голубая стрелка)В описанных выше зонах митохондриальных скоплений наблюдаласьвыраженная флуоресценция маркера HIF-1α (2-3 балла), что свидетельствует оналичии феномена колокализации при немалиновой миопатии. Наиболеевыраженное свечение указанного маркера (3 балла), в виде отдельных четко88очерченных кластеров, определялось на периферии мышечных волокон (Рис.30,31, 32).
В нашем исследовании было показано, что феномен колокализациихарактерен для целого ряда миопатий, в то время как наличие подобныхкластеров маркера HIF-1α было характерно только для немалиновой миопатии,поэтомуданнаяособенностьможетявлятьсяновымкритериемдифференциальной диагностики этой формы врожденной структурной миопатии.Рис.30. Скелетная поперечнополосатая мышечная ткань пациента с врождённой немалиновоймиопатией. Возраст 4 года.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
