Диссертация (1139780), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Если принятьисходные показатели ДИКЖ за 100%, то в конечном результате значениеиндекса можно рассчитать улучшение качества жизни каждого пациента впроцентном отношении.2.3 Микроскопическое и культуральное исследованиеДля установления диагноза онихомикоза стоп и оценки эффективностилечения проводили микроскопическое и культуральное исследование. Передвзятием материала на микроскопическое и культуральное исследованиепациенты проходили подготовку для достоверности результатов анализа.Пациенты ограничивали контакт ногтей с водой, мылом, кремами и любымилекарственными средствами.
Для полного исключения контакта с водой былорекомендованозакрытьногтевые пластинымарлевойсалфеткойподлейкопластырь на 48 часов.Поверхность ногтя перед взятием анализа обрабатывалась раствороммедицинского спирта 70%. Материал забирался скальпелем или кусачками. Приповерхностнойформеонихомикозавыполнялисоскобыскальпелемсповерхности ногтевой пластины в пораженной области. Соскоб выполнялся до43слоев непораженных грибами. При дистально-латеральной подногтевой формеонихомикоза материал брали скальпелем и кусачками, который включал срезногтевой пластины и соскоб с ногтевого ложа из-под пластины.
Припроксимальной подногтевой форме онихомикоза взятие патологическогоматериала представляло наибольшие трудности. При этой форме проводилизабор патологического материала с помощью стоматологической кюретки искальпеля, брались чешуйки, соскоб, срез ногтя или гной из-под заднегоногтевого валика. Собранный материал помещался в сухие закрытые пробирки,где указывалась дата сбора материала, фамилия, инициалы и возраст пациента,откуда был взят материал.От больного взятый патологический материал в пробирках направлялся влабораторию на микроскопическое и культуральное исследование, цельюкоторой являлось выявление возбудителя и определение его вида и рода.
Наначальной стадии проводилось микроскопическое исследование доставленногопатологического материала. Взятый материал помещался на предметное стекло в20% КОН,далеемикроскопическоезакрывалистеклом,исследование.послеОдновременноэкспозициипроводилипроизводилсяпосевпатологического материала на питательную среду Сабуро с добавлениемхлориндремикса.
Проводилась инкубация грибов в термостате, температурасоставляла 27°С. При культивировании рост колоний грибов-дерматофитовопределялся на 7 – 14 сутки, плесневые и дрожжеподобные грибы Candida на 2 –4 сутки. При появлении колоний грибов производился их подсчет и определениеразмера.Культурыгрибовпросматривалисьподмикроскопомвдистиллированной воде и смеси с глицерином. Виды грибов определялись поросту и виду колоний и по морфологическим признакам при микроскопическомисследовании.При выявлении грибов рода Candida для уточнения производился пересевматериала на хромогенную питательную среду Candiselect.442.4 Молекулярно-биологический метод ДНК диагностики (ПЦР)Для объективности и выявления дерматофитной инфекции, а такжеопределения эффективности лечения мы проводили молекулярно-биологическийметод диагностики в виде полимеразной цепной реакции (ПЦР), основойкоторой был метод, использующий последовательность ДНК – топоизомеразы II,специфичной для некоторых видов грибов дерматофитов.Из клинических образцов выделение ДНК для ПЦР-анализа проводилось спомощью набора «Реамикс» с предварительной инкубацией в лизирующемрастворе в течение двух часов при температуре 37°С.
Амплификация спраймерами проводилась с помощью диагностического набора «ТрифАм» НПФ«Гентех» (Москва), предназначенного для определения наличия ДНК T. rubrum иT. mentagrophytes var. interdigitale в соскобах ногтевых пластин человека.В наборе «ТрифАм» применяется мультипраймерная ПЦР с двумя парамиолигонуклеотидных праймеров, где одна пара праймеров специфична дляфрагмента генома гриба T. rubrum объемом 925 пар нуклеотидов, а другая пара –характерна для фрагмента генома гриба T. mentagrophytes var.
interdigitale, где392 пары нуклеотидов. Процесс амплификации состоит в повторяющихся циклахтемпературной денатурации ДНК, отжига праймеров с комплиментарнымипоследовательностями и достройкой полинуклеотидных цепей с праймеровДНК - полимеразы.Методом электрофореза в агарозном геле проводится детекция продуктовПЦР. ДНК окрашенная в этидиуме бромиде в геле смотрят с ультрафиолетовымизлучением.
В представленных образцах по наличию специфических фрагментовамплификации размером 925 пар нуклеотидов и 392 пары нуклеотидов делаютзаключение о результатах ПЦР анализа. Регистрируют результаты визуально спомощью фото или гель – документирующих систем. Чувствительность ПЦР –диагностики не больше 1000 копий/мл генома гриба T.
rubrum и не больше 1000копий/мл гриба T. mentagrophytes var. interdigitale.452.5 Проведение эксперимента in vitro – по лазерному воздействию наколонии грибов при посеве на среду СабуроВ лабораторных условиях был проведен эксперемент in vitro, где на чашкиПетри с колониями грибов воздействовали лазерными лучами Q - Switched1064/532нмиNd:YAG1064нм,которыегенерируютсянамультитехнологической платформе Harmony XL компании Alma Lasers (Израиль,США). При эксперименте сначала подключался модуль Q - Switched 1064/532нм, который имеет плотность энергии равной 900 мДж/см², диаметр рабочегопятна равен 3 мм и длительность импульса 20 наносекунд, с частотой 2 Гц.
Далееподключался модуль с Nd:YAG 1064 нм, который имеет плотность энергииравной 200 мДж/см², диаметр рабочего пятна равен 1 мм, длительность импульсане более 10 миллисекунд, с частотой 20 Гц. Колонии грибов обрабатывались ввиде спирали двумя видами лазеров по 5 проходов, с перерывами в 30 – 60секунд, однократно.
Затем за колониями грибов велось динамическоенаблюдение на 3-и и 7-е сутки. В эксперименте облучали 20 чашек Петри, сразными колониями грибов, которые были выращены в лабораторных условияхиз взятого материала от больных онихомикозом.2.6 Методы терапии больных с онихомикозом стоп основной и контрольнойгруппВ основную группу больныхвходило 40 пациентов (17 мужчин, 23женщины), которые получали лазерную терапию на мультитехнологическойплатформе аппарата Harmony XL компании Alma Lasers (Израиль, США)(Фото. 1) с помощью лазерных насадок или модулей Q - Switched 1064/532 нм иNd:YAG 1064 нм. Перед процедурой сухие, чистые (без лака) ногтевые пластиныобрабатывалисьсалфетками,пропитанные70%медицинскимспиртом,одевались специальные защитные очки на пациента и врача.
Сначала припроцедуре подключался модуль Q - Switched 1064/532 нм плотность энергии,которой равна 900 мДж/см², диаметр рабочего пятна равен 3 мм, длительностьимпульса 20 наносекунд, с частотой 2 Гц. Затем подключался модуль с Nd:YAG461064 нм плотность энергии, которой равна 200 мДж/см², диаметр рабочего пятнаравен 1 мм, длительность импульса не более 10 миллисекунд, с частотой 20 Гц.Пораженная грибом ногтевая пластина обрабатывалась по спирали двумялазерами, захватывая всю площадь ногтевой пластины, 2-5 проходами, сперерывами от 30 до 60 секунд.
Так как рост ногтевых пластин стоп у взрослогочеловека составляет 1-2 мм в месяц, нами был разработан метод лазернойтерапии онихомикозов стоп – 1 процедура каждые 2 недели, в течение 6 месяцев.Всем больным проводилась лазерная терапия по нашей методике. Однапроцедура занимала от 20 до 30 минут.Местно пациенты на пораженные ногти наносили лак циклопирокс 8%(Батрафен) 2 раза в неделю в течение шести месяцев.
Для профилактики микозастоп на кожу наносился крем эконазола нитрат 1% (Экодакс) 1 раз в день втечение 2 недель.Фотография 1. Мультитехнологическая платформа системы Harmony XLAlma LasersВ контрольную группу больных входило 40 пациентов (21 мужчин, 19женщин). Все больные этой группы получали пероральный итраконазол47(Орунгал) по методу пульс-терапии по 400 мг в сутки, то есть 200 мг 2 раза вдень (утром и вечером) в течение недели, перерыв в лечении 21 день – курслечения 3 месяца.Местно применяли лак циклопирокс 8% (Батрафен) 2 раза в неделю втечение шести месяцев на пораженные ногтевые пластины стоп.Кожа стоп обрабатывалась кремом эконазола нитрат 1% (Экодакс) 1 раз вдень в течение 2 недель для профилактики микоза стоп.Перед лечением в обеих группах была выполнена однократная аппаратнаяобработка пораженных ногтевых пластин с помощью Podolog nova Hellmut RuckGmb H (Германия) для удаления пораженных участков ногтевых пластин.Всем больным была рекомендована обязательная обработка обуви,нательного и постельного белья, дезинфекция ванны.Оценкаэффективностилеченияпроводиласьвпроцессенашегоисследования по клинической картине и заключалась в виде уменьшения областипоражения грибком ногтя, независимо от клинических форм онихомикозов.Оценку эффективности проводили по следующим критериям:клиническое излечение – отрастание здоровой ногтевой пластинырозового цвета по всей площади;значительное улучшение – отрастание от ростковой зоны здоровойногтевой пластины на 40-60% от площади всего ногтя;улучшение – отрастание здоровой ногтевой пластины стоп откорневой зоны на 20-30% от площади всего ногтя и сохранениеизмененного цвета или подногтевого гиперкератоза или полос и пятен ит.д.без эффекта – клиническая картина в процессе лечения неизменялась.482.7 Статистическая обработка результатовСтатистическийанализрезультатовисследованияпроводилсянапортативном компьютере Asus Intel Core (TM) i3-2367M CPU 1.40 GHz в средеWindows 7, с использованием программы Microsoft Office 2010 и программыSPSS.В работе применялись стандартные методы описательной и вариационнойстатистики, используя простой и множественный линейный регрессионныйанализ.ЗначениярассчитывалисьипредставлялисьввидеM±m,(М - среднее значение, Р - относительные величины, которые выражены впроцентах - %, r - коэффициент корреляции, m - ошибка репрезентативности илисреднее квадратичное отклонение).
Достоверность различий между значениямирассчитывалась с помощью t-критерия Стьюдента и критерия Фридмана дляпараметрических и непараметрических величин. Сравнение групп осуществлялис помощью результатов теста Манна-Уитни. Различия между значениямисчитались статистически значимыми при р<0,05.По полученным результатам исследования производилось построениеграфиков и диаграмм.49ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ3.1 Клиническая характеристика пациентов, включенных в исследованиеВсе пациенты в исследовании находились в возрасте от 20 до 80 лет, срединих было 42 женщины (52,5%) и 38 мужчин (47,5%) (Рис.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
